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1、临床基础检验学 实验一,牛鲍计数板的使用 和白细胞计数 南通大学第二附属医院 检验医学中心 陆永辉,实验一、 白细胞计数,1.原理：血液经稀乙酸定量稀释并破坏成熟红细胞，在血细胞计数池内计数规定区域内的白细胞总数，换算成每升血液中白细胞数。 2.试剂器材 白细胞稀释液：冰乙酸 2.0ml 10g/L亚甲蓝 3滴 加蒸馏水 至100ml,器材 改良牛鲍血细胞计数板及专用盖片、微量吸管、带孔吸头、1ML刻度移液管、小试管、洁净软纱布、干棉球、光学显微镜。,毛细血管采血标准操作程序,操作步骤： 1 采血部位成人以左手无名指内侧为宜，半岁以下婴幼儿通常自拇指内侧或足跟两侧采血。 2 轻轻按摩采血部位。
2、 3 用棉签蘸消毒液消毒局部皮肤、待干。,4 紧捏刺血部位，使其自然充血。 5 用无菌刺针穿刺取血，动作应迅速，深度 23mm，稍加挤压以血液流出为宜。 6 用干棉球擦去第一滴血。 7 按需要依次采血。 8 采血完毕，用干棉球压住伤口，止血片刻。,微量吸管的使用,1将带孔乳胶吸头轻轻套在微量吸管上，连接紧密不漏气； 2拇指和中指夹住吸头中下端，示指盖住吸头小孔，拇、中指轻微挤压排出适量空气； 3将微量吸管插入抗凝血，拇、中指缓慢松劲（松动快血液会吸入吸头），吸取抗凝血至所需刻度略上方（不能有气泡），吸管呈水平略下垂，松开示指； 4用干棉球顺吸管向下拭尽管外余血（保证血量准确），轻触吸管下口吸去
3、多余血量，使管内抗凝血正处所需刻度； 5将微量吸管插入小试管底部，三指轻微用力慢慢排出血液，用上清液冲洗管内余血2-3次，轻摇试管混匀； 6拔出微量吸管弃入污物桶。,3.操作步骤 （1）加稀释液 用移液管向小试管内加入0.38ml白细胞稀释液。 （2）采血、稀释 用微量吸管采血20ul，拭去管外余血，释放于小试 管底部，用上部稀释液洗净吸管内余血，轻摇试管混匀，静置等其溶血。 （3）清洁计数板及盖片（动作轻柔），夹持盖片缘纵向前推轻放于两侧支持堤上。 （4）充计数池 将小试管轻微振荡2min，立即以一次性微量吸管吸取混匀后的白细胞悬液，充入计数池内。静置2-3min，使细胞沉于计数池底面。 （
4、5）调试显微镜 将计数板放置载物台上，选择（4 ）低倍镜，调节聚光器使光线较暗，调节旋钮找到方格线，转至低倍镜（10），调节光亮 。 （6）计数 低倍镜下计数四角4个大方格内白细胞总数，压线细胞数上不数下，数左不数右。,血细胞计数板的方格,计数板上下各一个计数池 计数区域分为9个大方格 四角的大方格各划分为16个中方格 中央大方格划分为25个中方格 四角的大方格为白细胞计数区 中央大方格四角和正中5个中方格为红细胞计数区,结果计算 白细胞总数 =4大格白细胞数（N） /410 20 106 = N 20 109/L 用. 109/L（小数点后一位）表示,注意事项,稀释液，小试管、计数板 采血
5、充池 计数原则 WBC过多 WBC过少 WBC校正 显微镜调试,5.注意事项,(1).稀释液密封保存，防止污染，小试管、计数板、盖片均须清洁，以免杂质、微粒等被误认为细胞。 (2).采血时针刺深度必须适当，不能过度挤压，防止组织液渗入或采血时间太长引起血液凝固。 (3).稀释液和采血量要准确，充分混匀，充液适量，无不足、外溢和气泡，细胞分布均匀。 (4).白细胞总数在参考范围内，大方格间的细胞数不得相差10个以上，两次重复计数误差不得超过10。 (5).白细胞数量过高时，可加大稀释倍数，白细胞数量过低时，可计数8个大方格的白细胞数或取双倍血量。,(6).一些贫血患者血液中有核红细胞增多，会计数
6、在白细胞总数内，应校正。 校正公式：白细胞校正数/L=M（100/100+N） M为未校正前白细胞数，N为在白细胞分类时，计数100个白细胞的同时计数到的有核红细胞数。 (7).调试显微镜 将血细胞计数板平放于载物台，低倍镜处所充计数池正中盖片略上方，向下微调载物台（防止压碎盖片）至看清计数区域内分隔线条为止。,6.细胞计数原则,大方格四边压线细胞数左不数右，数上不数下， 弓形移动,7.正常参考值 成人 ： （ 4.0-10.0）109/L 新生儿： （15.0-20.0）109/L,8.考核评价 a. 常规考核标准 （RCS） RCS= 100% 评价： 白细胞 4.0109/L者， RCS30% 白细胞在（4.1-14.9）109/L者 RCS20% 白细胞15.0 109/L者 RCS15% 超过上述标准者为不合格 b. 其他方法,四大格所见白细胞最大值最小值,四大格所见白细胞数平均值,9.思考题,1、某标本WBC为11.0x109/L，分类100个WBC见到10个有核红细胞，试计算WBC的实际数目？ 2、某同学在进行白细胞计数时，一次计得四大格白细胞数最多为46，最少值为32，试判断该同学考评结果如何？,实验报告内容,原理 试剂器材 操作步骤 实验结果 注意事项 思考题,
