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1、一、概念、内容（What）及意义（Why）,动物组织学 是研究动物机体的微细结构与其功能的科学,又称显微解剖学(microscopical anatomy)。,动物胚胎学 是研究动物个体的发生及发育规律的科学。 包括胚前发育、胚胎发育、胚后发育三个阶段。,研究内容 包括细胞、基本组织、器官组织、家禽器官组织结构特点及哺乳动物胚胎学概论。,课程安排,细胞 cell -细胞学 cytology 组织 tissue -基本组织学 器官 organ -器官组织学 胚胎学,名词术语：,光镜结构/显微结构：普通光学显微镜下观察到的组织细胞内的结构。 电镜结构/超微结构：电子显微镜下观察到的组织细胞内的结构
2、。,二、组织学与胚胎学的研究方法（How）,组织学histology,主要方法 固定组织研究 活组织研究 观察手段 光学显微镜 电子显微镜,光学显微镜石蜡切片法,石蜡切片：paraffin section 固定fix 切片section 染色dye 固定：将组织用化学试剂浸泡，使组织内蛋白质等成分凝固或沉淀。 染色：组织中某些成分与染料化学结合或物理吸附而显色。,40倍,100倍,400倍,1000倍,1600倍,组织学制片技术,固定 脱水-梯度乙醇 透明-二甲苯 透蜡-石蜡 包埋（蜡块） 切片（5m）,组织学染色技术,脱蜡-二甲苯 入水-梯度乙醇 苏木精染色 梯度乙醇到95% 伊红染色 脱水
3、 透明 封片 观察,HE染色（苏木精-伊红染色）,用苏木精与伊红染色，是最常用的组织学，病理学染色方法。 H：苏木精,Hematoxylin碱性，蓝色 E：伊红eosin酸性，红色 嗜碱性:染成蓝色,如:细胞核（核酸，酸性） 嗜酸性:染成红色,如细胞质 （碱性蛋白），,HE染色的肾小管 红色为嗜酸性的胞浆，蓝色为嗜碱性的核,冰冻切片,1冰冻（常用液氮） 2切片 优点： 保存酶活性， 抗原保存好，免疫组化应用较多。 缺点： 形态不如石蜡切片。 要求有冰冻切片机。,其他光镜可用制片方法：,简单，实用，不需要特殊设备，有时候必须用 涂片（血液，体液） 触片 撕片、铺片 装片、磨片。,光学显微镜的结构
4、,机械系统 光学系统 目镜（10x,5x,16x） 物镜 （4x,10x,20x,40x,60x,100x) 聚光器 光源,物镜,最重要，最贵的部位。 物镜上数字，以40倍为例： 40/0.65， 放大倍数，镜口率（数值孔径，N.A) 160/0.17 机械管长，允许盖玻片厚度。,分辨率的问题,分辨率（Resolving power）又称分辨本领，是用来表示人眼或仪器能够区分开的被观察物体上两点间的最小距离。所能分辨的两点间距离越小，见到的细节就越多，分辨率就越高。 人眼在25cm明视距离分辨率为0.2mm， 光镜分辨率为0.2m，电镜的分辨率比光镜的分辨率大约提高1000X- 0.2nm 。
5、,D=0.61/(N*sin(/2),：为入射孔径角，即光线从样品进入透镜的张角：450nm, N：折光率，空气 N=1,香柏油（N=1.5), 光镜最大分辨率，D最小值0.2m,光学显微镜种类,普通光镜（明视野）。 暗视野（dark field）显微镜。 相差显微镜。 荧光显微镜。 激光共焦扫描显微镜（Laser Scanning Confocal Microscopy） 微分干涉显微镜（differential-interference microscope）,明视野效果，无标本处最亮,暗视野效果，无标本处最暗，（花粉管）,相差效果，可以观察透明（不染色）标本。 用于观察活细胞,荧光效果，
6、 用各种不同的荧光染料,万能显微镜，其实是将几种功能通过配件集中在一台显微镜上,倒置显微镜，其实是将标本置于物镜上方，细胞培养常用,显微摄影，现在更多利用了数码相机,电子显微镜,透射电镜TEM(transmission electron microscope) 电子束代替光线，波长短，电磁透镜代替光学透镜。 超薄切片，重金属染色（铅，铀盐），吸收电子。,光学显微镜下结构,电子显微镜下结构,透射电子显微镜。 分辨率1.44埃， 放大倍率80万倍,电镜与光镜的比较,扫描电镜下的结构,切片上还可以做：,组织化学 免疫组织化学 原位杂交 放射自显影,组织化学（切片上的化学反应）,碘酸-雪夫氏PAS反应
7、显示多糖 切片上多糖HIO4（氧化）多醛；多醛无色品红（shiff试剂）紫红色沉淀（显示多糖存在）,碘酸-雪夫氏PAS反应,紫红色沉淀（显示多糖存在）,其他一些特殊染色： 胭脂红染色,粘液染色,类淀粉染色,含铁血黄素,银染，黑色为银颗粒位置,免疫组织化学：immunohistochemistry,利用抗原抗体特异性结合而显示抗原存在。 利用标记技术，如将荧光素（酶）与抗体结合（钥匙）， 如果切片上某个部位有抗原（锁），当抗原抗体结合后，洗去多余抗体，荧光显示部位即是抗原（某种蛋白）部位。,流式细胞术（flow cytometry,FCM）,计量单位,组织学常用的计量单位： 10-3， m 毫米
8、 10-6， 微米 10-9，n纳米(埃,10-10 m） 10-12，p皮 如m(微米），11000mm。 光镜常用，如细胞大小 nm（纳米），1/1000 m。 电镜常用，如细胞膜厚度,四、学习动物组织学与胚胎学应注意的问题 (一)理论与实践的关系 (二) 形态与机能的关系 (三) 静态与动态的关系 (四) 平面与立体的关系 （五）共性与个性的关系,放大倍数问题,粗略的估算： 物镜放大*目镜放大。如40*10 问题 如洗出照片时，如上是否放大倍数就是400。,切面方向与立体结构,横切、纵切。 考虑鸡蛋的几个切面,复习,1 名词解释 动物组织学、动物胚胎学、显微结构、超微结构、HE染色、嗜酸性、嗜碱性、中性、PAS反应 简述题 1）试述动物组织胚胎学的研究内容。 2）举出五种以上组织胚胎学的研究方法 3）试述石蜡切片标本制备的一般程序。 4）学习组胚需注意处理好哪些关系？,
