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1、鱼类组织胚胎学,绪 论,一、组织胚胎学的研究内容 二、组织胚胎学的研究方法 三、组织胚胎学课程的作用与学习要求,一、组织胚胎学的研究内容,组织胚胎学包括： 组织学 胚胎学,（一）组织学（Histology）,概念：组织学是研究生物体（鱼体）微细结构的一门科学。 研究内容：包括细胞、基本组织、器官组织三个部分。,细胞 细胞间质,器官和系统,机体,细胞,组织,器官,系统,细胞:是机体形态结构的基本单位，是新陈代谢、生长发育和增殖分化的结构基础。 组织:是由许多在结构和功能上密切相关的细胞，借细胞间质结合在一起所构成的细胞群体。组织根据其来源、功能和结构特点，通常将机体所有的组织分为四大类，即上皮组
2、织、结缔组织、肌组织和神经组织，统称为基本组织。 器官:是由几种不同的组织按一定的规律结合而成，如心、肝、脾、肺、肾等。每一器官各有一定的形态结构和特定的生理机能。 系统：由许多功能相关的器官联合在一起构成。每个系统在体内执行特定的相对独立的功能。,（二）胚胎学(Embryology),概念：研究（鱼体）胚胎发育的科学。胚胎发育是指从受精卵开始到幼体的形成并破膜而出（孵出）或脱离母体（产出）的整个过程。 研究内容：包括胚前发育、胚胎发育、胚后发育三个部分。,精细胞 卵细胞,受精卵,胚胎,幼体,机体的各种结构和功能都需要经过一定的发生发展过程逐渐形成和不断完善。在了解机体发生发展规律的基础上，可
3、以更好地理解其结构和功能。,1664年，英国学者Robert Hooke自制的放大镜观察软木薄片，发现了许多小格，把它命名为“cell”，即细胞 荷兰学者Leeuwenhoek用高倍放大镜发现了精子、红细胞、肌细胞和神经细胞等。 组织培养术、细胞融合术、免疫组织化学和免疫细胞化学术、放射自显影术、荧光和激光术、原位杂交术、图像分析和立体计量术等。,17世纪50年代，英国学者Harvey提出“一切生命皆来自卵”的假设。随后，荷兰学者Leeuwenhoek和Graaf分别发现精子与卵泡，提出“先成论”学说 18世纪中叶，德国学者Wolff提出了“渐成论”学说，认为胚胎是经历了由简单到复杂的渐变过程
4、而形成的。1885年，德国学者Remark提出了胚胎发育的三胚层学说。 20世纪的70年代，试管婴儿诞生，90年代克隆动物问世。,组织学与胚胎学是利用显微镜进行观察研究。光学显微镜下所见的结构称光镜结构，其分辨率约为0.2m，可将物体放大约1500倍。有的光镜虽可放大4000倍，但其分辨率不高。电子显微镜 （EM，简称电镜）下所见的结构称超微结构其分辨率可达 0.2nm，可将物体放大100万倍。 光镜和电镜常用的计量单位和换算关系是： 1mm(毫米，millimeter) = 1000m 1m (微米，micrometer) = 1000nm 1nm (纳米，nanometer) = 1000
5、pm 1pm (皮米，picometer) = 1/106m,二、组织胚胎学的研究方法,研究组织胚胎学的常用方法有： 光镜技术 电镜技术 组织化学技术,光镜技术,.石蜡切片技术(H.E染色) 取材和固定; 脱水和包埋; 切片和染色; 封片。,组织切片染色法HE染色,苏木精(Hematoxylin)：碱性染料，使C核内的染色质及C质内的核糖体染成蓝紫色。 伊红(Eosin)：酸性染料，使C质和C外基质中的成分染成红色。 染色过程：,二甲苯,酒精,染色,脱水,透明,封片,脱蜡,脱二甲苯,鱼的胆管,鱼的肾脏,其他切片与染色技术:,火棉胶切片； 冰冻切片； 涂片、铺片、磨片。 硝酸银染色法: 神经细胞
6、(黑)。,涂片 铺片 磨片,血 液,神经组织,（二）电镜技术,透射电镜：观察组织或细胞内部更细微的结构, 即超微结构。,扫描电镜,观察组织或细胞表面的立体结构。,1、透射电镜:,2、扫描电镜：,（三）组织化学技术:,是应用化学、生物化学、免疫学或分子生物学原理和技术, 与组织学技术相结合而产生的综合技术, 能在组织切片定性、定位、定量地显示某种物质的存在与否以及分布状态。,过碘酸 Schiff反应(periodin acid Schiff reaction)：简称 PAS反应，是确定组织或细胞中有无多糖存在的一种方法。,原理：,多糖,醛,紫红色沉淀,PA,氧化,Schiff 试剂,暗视野显微镜
7、术,暗视野显微镜与普通光镜相比，其主要特点是分辨率较高。其内部装有暗视野集光器，视野内不能直接看到照明光线而呈黑暗状态。由于被检物体表面衍射或散射的光亮，可以观察物体的外形和运动，如细胞核、线粒体和纤毛的运动。,荧光显微镜术,荧光显微镜是用来观察标本中的自发荧光物质或以荧光素染色或标记的细胞和结构。,相差显微镜术,相差显微镜用于观察组织培养中活细胞的形态结构。活细胞无色透明，一般光镜下不易分辨细胞轮廓及其结构。相差显微镜能将活细胞不同厚度及细胞内各种结构对光产生的不同折射作用，转换为光密度差异即明暗差而可辨认。,IATIA公司的QPM定量分析相差显微镜系统,共焦激光扫描显微镜术,共焦激光扫描显
8、微镜是20世纪80年代研制成的一种高光敏度、高分辨率的新型生物学仪器。它以激光为光源，采用共焦成像系统和电子光学系统，经过微机图像分 析系统对组织或细胞进行二维和三维分析处理。CLSM可用于细胞内各种荧光标记物的微量分析，细胞的受体移动和膜电位变化，酶活性和物质转运的测定，DNA的精确分析等。,微分干涉差显微镜,1952年，Nomarski在相差显微镜原理的基础上发明了微分干涉差显微镜。DIC显微镜又称Nomarski 相差显微镜，其优点是能显示结构的三维立体投影影像。与相差显微镜相比，其标本可略厚一点，折射率差别更大，故影像的立体感更强。,DIC显微镜下的硅藻（伪彩色）,倒置显微镜,组成和普
9、通显微镜一样，只不过物镜与照明系统颠倒，前者在载物台之下，后者在载物台之上，用于观察培养的活细胞，具有相差物镜,免疫组织化学,是利用抗原抗体特异性 结合的免疫学原理，以检测组织、细胞中某种肽类、蛋白质等大分子物质的分布。其方法是抗原注入使其产生相应的特异性抗体，从动物的血清提取该抗体，以荧光素、酶、铁蛋白或胶体金等标记。,放射自显影术,放射自显影术 亦称同位素示踪术，将放射性核素或其标记物注入动物体内或细胞培养液内，取某部位组织制成切片或取细胞培养液制成涂片，在暗室中将切片涂以薄层感光乳胶，存在于细胞内的放射性核素产生的射线作用于乳胶中的溴化银，还原为银粒，经显影和定影后，便可在光镜或电镜下观
10、察标记物的数量及分布情况。,组织培养术,组织培养术亦称体外培养，是在无菌条件下取机体的活组织或活细胞，在体外适宜的环境中培养成活。细胞在体外培养需要与体内基本相同的条件，研究各种理化因子对活细胞的直接影响，并可观察记录细胞的增殖、分化、运动、吞噬、致病、癌变等动态变化，动物早期胚胎发育过程。,形态计量术,形态计量术 是利用图像分析仪，亦称图像分析系统，运用数学和统汁学原理对组织和细胞进行二维和三维的形态测量研究，可使组织、细胞中各种成分的数量、形态、分布、体积、表面积等以精确的数据显示出来，从而促进形态学研究由定性走向定量，把形态计量技术由平面测量而推论出立体结构。,原位杂交术,原位杂交术 是
11、一种分子生物学技术，用已知碱基序列并带有标记物的核酸探针，检测细胞内mRNA和DNA序列片段，原位研究细胞合成某种多肽或蛋白质的基因表达，从分子水平探讨细胞功能的表达及其调节的机制。,胚胎工程,胚胎工程是指对胚胎发育过程机理的研究和人为干预胚胎发育过程而言。广义的胚胎学研究方法，其包含内容很广，即有胚胎收集、胚胎保存、胚胎培养和胚胎移植，研究胚胎发育机理和人为干预发 育的方法，包括胚胎分割、胚胎嵌合、胚胎性别鉴定、胚胎干细胞、体外受精又称试管动物、细胞核移植又称克隆动物以及转基因动物等。,三、组织胚胎学课程的作用与学习要求,（一）课程作用 鱼类组织胚胎学是水产养殖技术专业的重要专业基础课之一，
12、与其他专业基础课和专业课有密切联系。其中鱼类组织学与鱼类生理学和鱼病学更为密切；鱼类胚胎学与鱼类遗传育种学有着密切关系。,（二）学习要求,1把握好两个学习环节 理论教学：重点掌握各种组织的组成、分布、分类与构造特点，以及胚胎发育过程的分期和不同发育时期的分化与构造特点。为方便学习我们将采取全程多媒体教学，并将所有课程资料上网。 2.实验教学：主要是观察切片，每次实验通过电视显微图像转换系统将要观察的组织转换成电视图像进行示教，然后由同学们自行观察。要求多观察，多操作认真学习和掌握各种组织结构和显微镜使用操作技能。,2、把握好几个关系,注意形态和机能的统一; 建立局部与整体的联系; 培养观察与思维能力; 建立动态变化的概念 。,
