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1、临床标本的细菌学鉴定1 （综合性实验）,教学目的和要求,熟悉临床标本一般细菌鉴定的流程 掌握化脓性球菌的鉴定方法 掌握肠道细菌的鉴定方法 掌握球菌及肠道杆菌的生物学特性,加强与临床实践的联系，从“对已知细菌的认知”到“未知细菌鉴定”。 锻炼学生发现问题,分析问题,解决问题的能力。 培养学生灵活运用基础知识和基本技能的能力。,要求,目的,本次实验内容,临床标本细菌学鉴定的方法及一般程序 血液标本的细菌检测（1） 粪便标本的细菌检测（1） 病原性球菌生物学特性,内容一： 临床标本细菌学 鉴定的方法及一般程序,细菌的鉴定依据,形态学特性: 形状、排列、染色性、特殊结构 生理特性： 菌落特征（鉴别培养
2、基）、 溶血现象（血平板）， 细菌的生化反应（鉴别培养基） 抗原: 细菌的致病性：,方法,革兰染色,培养,抗原抗体反应,动物实验,增 菌,接种平板培养基，分离单个菌落,各种鉴定试验,涂片染色,快速诊 断试验,生化试验,血清学实验,涂片染色,药敏试验,动物试验,初步诊 断报告,细菌学检验的一般程序,挑取可疑菌落,标本,内容二：临床标本细菌学检查,血液标本的细菌学检测 血液标本为无菌标本，鉴定出细菌即有诊断意义 血液标本中常见致病菌 金黄色葡萄球菌、凝固酶阴性葡萄球菌 乙型溶血性链球菌、甲型溶血性链球菌、 肺炎链球菌、 脑膜炎奈瑟菌 铜绿假单胞菌、大肠埃希菌、伤寒杆菌、厌氧菌等,革兰染色：染色性及
3、排列 金黄色葡萄球菌、表皮葡萄球菌普通平板生长现象普通平板（示教） 菌落黄色（有时黄色不典型） 菌落白色或柠檬色,病原性球菌的生物学特性,怎么区分？,金黄色葡萄球菌： 溶血毒素：溶血环 血浆凝固酶：,表皮/腐生性葡萄球菌 无溶血环,金葡菌菌落周围 有宽而透明的溶血环 溶血,在血平板的生长现象（示教）,鉴别葡萄球菌致病即金黄色葡萄球菌的重要指标 原理：凝固酶可催化： 血浆中的纤维蛋白原 纤维蛋白血浆凝固 方法（见实验指导16页） 在抗凝血浆中加入菌液， 37 3小时 结果：金黄色葡萄球菌（阳性） 表皮葡萄球菌（阴性）,血浆凝固酶试验（示教）,病原性球菌的生物学特性,链球菌在血平板上的生长现象（示
4、教）：,溶血性链球菌 草绿色链球菌 肺炎链球菌,溶血，菌落灰白色、细小 溶血，菌落灰白色、细小 溶血，菌落灰白色、细小,肺炎球菌与甲型溶血性链球菌 的区别试验（示教）,胆汁溶菌试验（见实验指导18页） 肺炎球菌（阳性）、 甲型溶血性链球菌（阴性） 菊糖发酵试验（见实验指导18页） 肺炎球菌（阳性）、 甲型溶血性链球菌（阴性）,病原性球菌的生物学特性,脑膜炎奈瑟菌在巧克力色培养基（示教）： 专性需氧，5%CO2 菌落无色透明、细小，露珠状,病原性球菌的生物学特性,血平板上的病原性球菌生长现象的区别要点：,表皮葡萄球菌 金黄色葡萄球菌 溶血性链球菌 草绿色链球菌 肺炎链球菌,溶血，菌落白色或柠檬色
5、 溶血，菌落黄色、较大 溶血，菌落灰白色、细小 溶血，菌落灰白色、细小 溶血，菌落灰白色、细小,分离培养,血浆凝固酶 发酵甘露醇 耐热核酸酶,直接涂片镜检：,革兰阳性、葡萄串状排列。,生长现象,色素，溶血，,生化反应,葡萄球菌,金黄色葡萄球菌与凝固酶阴性葡萄球菌的区别,分离培养：,溶血,直接涂片镜检：,革兰阳性、链状排列，特征！,生长现象,菌落特征， 溶血！,生化反应,链球菌： 乙型链球菌、甲型链球菌、肺炎链球菌的区别,溶血,乙型链球菌,甲型链球菌与肺炎链球菌,乙型链球菌,葡萄球菌属,血液标本,血平板分离培养,革兰染色,染色性 形状排列,初步诊断,溶血现象、革兰染色,甲型链球菌或 肺炎链球菌,
6、血浆凝固酶试验,（+）,（）,金黄色葡萄球菌,表皮葡萄球菌,胆汁溶菌试验 菊糖发酵试验,（+）,（）,肺炎链球菌,甲型链球菌,内容二：粪便标本细菌学检查,粪便标本：为有菌标本，在标本中分离、并鉴定出致病菌才有诊断意义。 粪便标本中常见正常菌群：大肠埃希菌 致病菌：痢疾杆菌、伤寒杆菌,痢疾杆菌,伤寒杆菌,大肠杆菌,大肠杆菌、痢疾杆菌、伤寒杆菌生物学特征比较,含乳糖、中性红指示剂、胆盐、煌绿等,大肠埃希菌,沙门菌 志贺菌,胆盐、煌绿：抑制大肠埃希菌及G+菌， 提高肠道致病菌检出率,肠道选择鉴别培养基：SS培养基（沙门志贺培养基）,SS琼脂平板（下次实验课示教） 基础性成分：牛肉膏,蛋白胨,琼脂 抑
7、制性成分：硫代硫酸钠,煌绿,胆盐等抑制革兰氏阳性菌和大肠菌群生长 鉴别性成分：乳糖分解产酸 指示性成分：中性红酸碱指示剂产酸变红,发酵乳糖的菌落,不发酵乳糖菌落,可疑的致病菌,大肠杆菌,无色、半透明、光滑、较小,观察指标：葡萄糖、乳糖发酵、H2S、动力,上层固体斜面：乳糖+指示剂,下层半固体：葡萄糖+指示剂+FeSO4,挑取可疑的致病菌菌落 接种于半固体双糖铁培养基,半固体双糖铁培养基培养结果 （下次实验课示教）,未接种管,痢疾杆菌,大肠埃希菌,粪便标本,SS平板分离培养,革兰染色,菌落颜色、革兰染色,伤寒杆菌或痢疾杆菌,大肠埃希菌,伤寒杆菌,半固体双糖铁培养基,金黄色葡萄球菌、表皮葡萄球菌普
8、通平板生长现象； 注意观察菌落特征 金黄色葡萄球菌、表皮葡萄球菌、（甲、乙）型溶血性链球菌及肺炎球菌在血平板的生长现象； 注意观察菌落特征、溶血环 肺炎球菌、甲型溶血性链球菌胆汁溶菌试验 肺炎球菌、甲型溶血性链球菌菊糖发酵试验 脑膜炎双球菌在巧克力血平板的生长现象 注意观察菌落特征,本次实验的示教,实验材料： 每组一套标本，编号1号-8号 每人1个（注意勿污染，下个班还用） 每人1块平板（SS平板或血平板） 操作1：临床标本的分离培养（分区划线） 血液标本：接种血平板 粪便标本：接种SS平板 操作2：标本的革兰染色（初步诊断） 操作3：无菌分装培养基（下次实验用）,本次实验的操作,做标记！ 班级姓名,观察临床标本的分离培养物 血平板：观察溶血现象，菌落颜色 SS平板：观察菌落颜色 鉴定：挑取可疑致病菌菌落进一步鉴定 挑取可疑致病菌涂布做革兰染色 明确诊断 示教：肠道杆菌生化试验,下次实验内容,
