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1、1酶联法检测丙型肝炎病毒抗体阳性分析【摘要】 目的 了解采用间接酶联免疫法(ELISA)检测丙型肝炎病毒抗体(抗HCV) 的阳性情况。方法 ELISA 法进行抗HCV 测定，筛选出阳性血清 141 份按S/CO 和年龄分组,分别进行比较。结果 1S/CO3.8 的例数占总阳性率的27.7%，S/CO3.8 的例数占总阳性率的 72.3%；2049 岁与 5080 岁的例数分别占总阳性率的 31%和 69%，两组存在明显差别(P0.001)。结论 采用间接ELISA 法检测抗HCV 有一定的干扰因素，可导致阳性率偏高。临床诊断时它只能作为一个筛查实验，抗HCV 阳性不能完全证明体内存在丙型肝炎病
2、毒感染，要做相关检查慎重诊断，有条件时进行确认实验才能确诊。 【关键词】 丙型肝炎病毒抗体 间接酶联免疫法目前丙型肝炎感染的免疫测定应用最广泛的是间接酶联免疫法(ELISA)检测丙型肝炎病毒抗体(抗HCV) ，影响 ELISA 测定抗体的因素是包被抗原的纯度、机体内较高的 IgG 类抗体浓度和标本中含有超氧化物歧化酶(SOD)等，这些都易引起假阳性反应，现将我院临床标本阳性情况报道如下。1 对象与方法1.1 观察对象 在我院通过常规筛检实验为抗HCV 阳性标本共 141 例，其中男 80 例，女 61 例, 年龄 2080 岁。1.2 仪器与试剂 半自动酶标仪,洗板机,试剂由北京万泰生物药业有
3、限公司。1.3 统计方法 采用 SPSS 软件行 2 检验。2 结果2.1 将 141 例抗HCV 阳性样本按 S/CO 值分组，1S/CO3.8 者 39 例,占 27.7%；S/CO3.8 者 102 例，占 72.3%。来自美国的研究表明间接 ELISA 法检测抗HCV ，S/CO3.8 时才高度预示抗HCV 呈阳性状态，并建议对 S/CO3.8的标本做确认实验。2.2 将抗HCV 阳性样本按年龄分组，年龄 5080 岁组的抗HCV 阳性患者 98 例，占总阳性百分率的 69.5%，而 2049 岁以下年龄组的抗HCV 阳性患者 43 例，仅占总阳性率的 30.5%，两组比较差异有统计学
4、意义(P0.001)。3 讨论抗HCV 是目前临床诊断丙型肝炎感染的常用指标，主要用于检测急、慢性或既往丙型肝炎病毒感染和测定献血员存在感染的可能性。我国丙型肝炎感染2率仅次于乙型肝炎。患急性丙型肝炎后约有 55%85%的患者可变成慢性丙型肝炎，其中 5%20%的患者 2025 年后可发展为肝硬化，肝硬化患者 10 年内 30%发展为终末期肝病。丙型肝炎自然转阴率低，治疗效果差，病程迁延，且与肝硬化、肝癌等的发生及发展显著相关1 。ELISA 间接法检测抗HCV 仍是目前常用的手段,由于存在一定的影响因素会导致抗HCV 出现假阳性,尤其是弱阳性。抗HCV 出现假阳性的主要原因是：类风湿因子(R
5、F)的干扰，RF 可大量存在于类风湿性关节炎及某些患有自身免疫性疾病患者的体内，RF 多为 IgG，它有与变性 IgG 产生非特异结合的特点。因此在抗HCV 测定中，如血清标本中存在 RF，则其可以与固相上的 IgG 和酶标的 IgG 结合,而出现假阳性反应。高免疫球蛋白血症，抗HCV 的间接法最后一步加的是酶标的抗人 IgG,血清中的高浓度的非特异 IgG 可能会致非特异地吸附于固相表面,从而与后加的酶标抗人 IgG结合,造成假阳性。标本中 SOD 的干扰。用于包被固相的重组 HCV 抗原片段C100 如为酵母菌产生的 SOD 融合蛋白,则标本中的 SOD 升高可能会造成抗HCV 假阳性结果
6、。用于固相包被的 HCV 基因工程抗原不纯2 。 另外，筛查实验 S/CO 比值能预测补充实验结果：许多早期研究显示，HCV 抗体 ELISA 筛查弱阳性的结果，进一步实验及临床证实为阴性。据美国一些血站提供给美国疾病与控制中心(CDC)的资料明确显示，筛查实验 S/CO 比值能用来预测补充实验结果；用美国 FDA 批准的两家 ELISA 试剂进行筛查实验，当 S/CO3.8 时，高度预示 HCV 抗体呈阳性状态。2000 年美国的研究资料对 HCV 抗体筛查弱阳性结果的常规确认实验，发现对抗体弱阳性样本进行确认实验，其中 86%88%为阴性。也对 HCV 抗体筛查阳性的样本进行 RIBA 确
7、认实验，他们观察了 1 000 例结果(来自 7.5%血清阳性预期值的人群) ，其中 75 例 ELISA 阳性，75 例中有 65 例 S/CO比值3.8，64 例重组免疫印迹实验(RIBA)阳性，占 98.5%；75 例中有 10 例S/CO 比值3.8，3 例 RIBA 阳性。目前美国已经采用了 CDC 的新导则，现在仅对筛查试验 S/CO 比值3.8 的样本做 RIBA 补充实验，这样既节约了大量资金，又使检验结果更加可靠。筛查实验 S/CO 比值的应用能增加确认实验的价值，提高目前试验的准确性3 。因此本资料统计抗HCV 的 S/CO3.8 的阳性人群中大部分可能存在假阳性结果；另一
8、方面通过对临床观察:50 岁以上抗HCV 阳性患者在总阳性中占有相当大的比例(69.5%)，与 50 岁以下年龄组有显著区别(P0.001)。这因为高龄组由于生理代谢机能逐渐衰退，体内高免疫球蛋白及类风湿因子等影响因素存在的机率较多，这导致 50 岁以上检测抗HCV 阳性比 50岁以下的人明显增高。此外，虽然第三代 ELISA 试剂比第一、二代试剂有明显的改进，但对于强阳性或弱阳性样本的检测，国产试剂的 S/CO 值高于进口试剂,其特异性也明显低于进口试剂，在筛查特异性方面,丙肝抗体酶联免疫检测试剂的特异性不如想象的高,以至于出现更多的假阳性结果；再加之抗HCV 酶免检测试剂皆没有灰区的设定，
9、S/CO 比值较低的结果也报告阳性，也是假阳性比较多存在的原因。因此有条件的单位应为丙肝抗体阳性的患者进一步做 HCV RNA 和RIBA 补充实验，以排除假阳性。总之，定义抗HCV 阳性理解为：抗HCV 筛查实验阳性，进行 RIBA 或HVC RNA 阳性；抗HCV 筛查阳性、HCV RNA 阴性和 RIBA 阳性都可以定为丙型肝炎阳性。所有抗HCV 阳性者都应接受医学咨询，并进行医学评价。抗HCV 筛查实验阳性，RIBA 阴性；抗HCV 筛查实验阳性，HCV RNA 阴性、RIBA 阴性可以3定为丙型肝炎阴性4 。ELISA 间接法测抗HCV 阳性结果时，一定要慎重，应要考虑到假阳性存在的可能性，应进行确认，再报告结果。而对临床患者的诊断，如碰到较弱阳性，则可建议患者间隔一段时间后进一步复查。【参考文献】1 周永兴.慢性丙型肝炎的临床诊断及相关问题.世界华人消化杂志，2004,12(10):23692371.2 邢文革，郑怀竟.必须提高丙型肝炎病毒实验室检验结果的可信度.中华肝脏病杂志，2004，12(3)：170171.3 于小洋,辛楠.提高 HCV 的检测质量.中国医学理论与实践杂志,2006，16(1)：98100.4 李金明.临床酶免疫测定技术.北京：人民军医出版社,2005.207208.
