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1、血栓与止血实验的临床应用 四川大学华西医院实验医学科/检验系 江 虹,二、血栓与止血的相关实验简介,三、血栓与止血实验的临床应用,四、血栓与止血实验的影响因素及质量控制,一、概述,止凝血的生理机制 血管壁的止血作用,概述,概述 血小板的止凝血功能,概述 血浆凝血系统的凝血机制,外源启动内源放大、强调组织因子的重要性、增加TFPI的抑制作用,概述,抗凝系统的抑制凝血作用： AT： PC 、PS ： TFPI ： PZ、ZPI：,概述 纤维蛋白溶解系统的纤溶作用：,血栓与止血实验所涉及的主要检测内容： 血管及血管内皮细胞的止血功能 血小板的止凝血功能 血液凝固系统的成分及功能 抗凝系统的成分及功能
2、 纤溶系统 的成分及功能,概述,概述 2. 凝血、抗凝、纤溶三者的关系及其异常疾病的实验室检测指标的变化,概述 凝血、抗凝和纤溶系统异常的相关疾病 凝血系统 抗凝物质 纤溶活性 凝血系统异常： 血友病 N N 肝病 A A A 抗凝系统异常： 先天性缺陷 N A 获得性增多 A N,凝血、抗凝和纤溶系统异常的相关疾病 凝血系统 抗凝物质 纤溶活性,纤溶系统异常： 原发性纤溶 N N 继发性纤溶 N 高凝状态： 血栓性疾病 N/ N 血栓前状态 ,概述 3. 血栓与止血实验主要的检测方法 凝血系统、纤溶系统和抗凝系统的检测 自动凝血分析仪： 凝固法（生物学法） 发色底物法（生物化学法） 免疫法
3、酶联免疫法：,血小板功能的检测 血小板自动分析仪： 比浊法 阻抗法 生物膜法 流式细胞术： 血小板特异性膜糖蛋白检测 活化血小板的标志物检测,概述,血管内皮细胞的相关检测 ELISA方法 遗传性止凝血疾病的诊断 分子生物学技术： RFLP PCR 探针标记 DNA序列测定,概述,概述,4. 凝血分析最常用的检测方法凝固法 检测原理： 凝固法也称生物学方法，是通过连续记录血浆凝固过程中的光、电、机械运动等系列变化，将变化信号转变、处理后得出检测结果。 主要检测方法： 光学法 钩方法 磁珠法,(1) 光学法(optical detection) 光学法为通过测定血浆凝固时光强度的变化判断凝固终点的
4、方法。 散射比浊法 (nephelometric clot detection） 透射比浊法 （photometric clot detection）,概述,散射比浊法,自动凝血分析,检测散射光的变化,概述,血液凝固过程散射光的变化曲线,自动凝血分析,概述,透射比浊法,自动凝血分析,检测吸光度的变化,概述,光学法检测特性：, 操作简便、快速 仪器结构简单、无需特殊反应杯 受光学干扰物影响,自动凝血分析,概述,（2） 钩方法（hook method） 钩方法也称电流法 根据纤维蛋白具有 导电性的特点，通 过电流的测定确定 凝固的终点。,自动凝血分析,概述,自动凝血分析,钩方法检测特性:, 仪器结
5、构简单、无需特殊反应杯 不受光学干扰物的影响 对低纤维蛋白原检测的灵敏度低,概述,（3）磁珠法（magnet ball method） 该方法根据小钢珠 随血浆粘度增加运 动强度逐渐减弱的 特性确定凝固终点。,自动凝血分析,概述,磁珠法检测特性:, 排除了光学法检测的一些影响因素 提高了对低纤维蛋白原检测的灵敏度 不受标本本身粘度等因素的影响 需特殊反应杯,概述,血小板相关检查 001 网织血小板计数* 002 常规血小板聚集功能*（ADP、肾上腺素、瑞斯托霉素） 003 抗血小板药物监测(004、005)* 004 阿司匹林（花生四烯酸诱导剂） 005 ADP受休拮抗剂（ADP）* 006血
6、小板相关免疫球蛋白测定（007010）* 007 PAIgG * 008 PAIgA * 009 PAIgM * 010 PAC3 *.,血栓与止血的相关实验简介,011抗血小板自身抗体测定* 012血小板膜表面蛋白分子测定（013、014）* 013 GPIb * 014 GPIIb/IIIa * 015血小板活化分子测定（016018）* 016 PF4测定 * 017 TXB2 * 018 GMP-140（P选择素）*,相关实验,血栓与止血功能检查 037 术前凝血常规（PT、INR、APTT、FIB、TT） 038 抗凝药物监测（APTT、PT、INR） 039 凝血图（PT、INR、
7、APTT、FIB、TT、PLT、CRT、CT） 040 DIC常规检查（PT、INR、APTT、FIB、TT、D-dimer、FDP） 041 DIC监测指标（PLT、D-dimer定量、PT、FIB） 042 DIC诊断分子学指标*（PF4、TXB2、AT-III、PC、TAT、 SMF、D-D、TF） ,相关实验,043 血液流变学（包括全血和血浆试验） 044 血栓前状态及易栓症早期筛选试验*（PF4、TXB2、 AT-III、PC、TAT、F1+2、SMF、D-D、Plg、PC、 PS、VWF：Ag、TM、PagT、狼疮物质检测）,相关实验, 045凝血酶原时间（PT） 046活化部分
8、凝血活酶时间（APTT） 047纤维蛋白原（FIB） 048凝血酶时间（TT） 049 血块收缩试验（CRT） 050 试管法CT 051 D-dimer（定性） 052 D-dimer（定量）* 053标准出血时间测定 054血管性血友病诊断分型试验* 055抗凝物质筛选试验（APTT纠正试验+正浆）,相关实验,056 PT纠正试验 057低分子肝素监测（AFXa）* 058溶栓治疗监测 (FIB、FDP定量)* 059血友病相关凝血因子测定（060063） 060 FVIII：C 061 FIX：C 062 FXI：C * 063 vWF：CBA * 064其他不明原因出凝血疾病（0650
9、68） 065 FII：C * 066 FV：C *,相关实验,067 FVII：C * 068 FX ：C * 069 FDP定量 * 070 AT-III * 071 PC * 072 PS * 073 TAT * 074 F1+2 * 075 SMF * 076 Plg * 077 TF * 078 TFPI * 079 vWF：Ag * 080 TM * 081狼疮物质检测 *,相关实验,血栓与止血实验的临床应用 1、常规筛检试验,血管壁及内皮细胞功能筛检 BT,血小板数量和质量筛检 PLT、BT、CRT,凝血系统筛检 PT、APTT、TT,病理性抗凝物质筛检TT、复钙交叉试验,纤溶亢
10、进筛检3P、 FDP、D-dimer,临床应用 2、 止凝血功能的评价 止凝血功能的评价试验：PLT、PT、APTT 评价试验结果判断： PLT：异常 PT：异常 APTT：异常,临床应用 3出血性疾病的实验室筛检 （1）一期止血缺陷的筛检： BT、PLT BT正常 、PLT正常 BT延长 、PLT正常 BT延长 、PLT减少 BT延长 、PLT增多,临床应用 （2）二期止血缺陷的筛检 凝血障碍性疾病的筛检： PT、APTT PT正常 、APTT正常 PT正常 、APTT延长 PT延长、 APTT正常 PT延长 、APTT延长,临床应用 纤溶性疾病的筛检： FDP 、D-D FDP正常、D-D
11、正常 FDP阳性、D-D阴性 FDP阴性、D-D阳性 FDP阳性、D-D阳性,临床应用 4. 血栓性疾病 （1）血栓前状态： 一般筛选指标 : PT、APTT 可能缩短 PagT 增强 FIB 增加 血液粘度 增加 特异性指标 : 血栓前状态的特异性分子标志物,临床应用 （2）血栓性疾病： 血管内皮细胞 血小板 凝血活性 抗凝物质 纤溶活性 血流变学,临床应用 5. 抗凝药物治疗的监测 （1）普通肝素 常规检查：APTT 肝素治疗的有效阈值为测定值 是正常对照值的1.5倍 ACT治疗的有效安全值为450600秒 鱼精蛋白中和后应恢复到80120秒 PLT血小板低于50109/L时慎用 TT有效
12、安全值为正常对照1.52.5倍,临床应用 特殊检查：肝素浓度 有效安全值为0.20.5IU/ml AT活性 AT活性低于70%肝素效果减低 AT活性低于50%肝素效果明显减低 AT活性低于30%肝素失效,临床应用 （2）低分子量肝素 因子Xa抑制试验 有效安全值为0.51.0（AFXa）IU/ml （3）口服抗凝剂的监测 常规检测：PT 有效安全值PTR为1.52.0； INR值为1.52.5 特殊检测：F1+2有效安全值为0.101.5nmol/L,血栓与止血实验的影响因素及质量控制 1 标本的影响： 受检者的状态： 标本的采集： 标本的贮存与运送： 标本的处理： 标本的影响因素：溶血、黄疸
13、、脂血、药物,2 试剂的影响： 抗凝剂的影响： 抗凝剂的种类：应用0.129mol/L的枸橼酸钠 抗凝剂的量：多为1:9，但血细胞比积可引起血浆与抗凝剂比例间的变化（当Hct大于55%或小于25%时要调整抗凝剂的用量）。 体积（血样）=体积（抗凝剂）9（1.00-0.45)/(1.00-HCT) 抗凝剂+抗聚剂的应用：,影响因素及质量控制,影响因素及质量控制,(2)检测试剂的影响： 试剂的种类： ISI对PT测定的影响 不同APTT试剂敏感性不同 激活剂 凝血因子 肝素 狼疮抗凝物 白陶土 + + + 硅藻土 + + + 鞣化酸 + + + 试剂与仪器的匹配：,(3)正常对照血浆、参标血浆和质控血浆： 正常对照血浆使用： 20份以上的成年健康人混合血浆 参标血浆在方法标准化中的作用： 选用国际标准品对方法仪器标化 质控血浆的应用： 正常和异常血浆均选用,影响因素及质量控制,3设备和仪器的影响： （1）不同试管对实验的影响： 不同试管对测定结果的影响 硅化管 塑料管 普通玻璃管 PT(s) 11.10.3 11.40.4 11.30.6 Fg(g/L) 3.790.25 3.690.31 3.580.36 APTT(s) 25.32.5 25.62.4
