《微生物学实验指导-微生物对不含氮有机物和含氮化合物的转化作用》由会员分享，可在线阅读，更多相关《微生物学实验指导-微生物对不含氮有机物和含氮化合物的转化作用（16页珍藏版）》请在金锄头文库上搜索。
1、实验二十二,微生物对不含氮有机物和含氮化合物的转化作用,微生物对不含氮有机物和含氮化合物的转化作用,目的要求 实验程序 思考题,目的要求,了解几种物质的转化作用及其检查方法,实验程序,中温性纤维素分解微生物对纤维素的分解（好气性、厌气性） 蛋白质的氨化作用 硝化作用 反硝化作用,实验程序1 （中温性纤维素分解微生物对纤维素的分解）,材料： 维素分解细菌琼脂培养基和深层培养液。 菜园土、镊子、无菌培养皿、直径9cm的无菌滤纸、尼龙绳、橡皮圈、染色液等。 好气性纤维素分解菌对纤维素的分解 厌气性纤维素分解菌对纤维素的分解,实验程序2 （好气性纤维素分解菌对纤维素的分解）,方法：土粒法 取已融化的纤
2、维素分解细菌琼脂培养基1管,倒入无菌培养皿中，制成平板。 用镊子取无菌滤纸1张，放入已凝固的琼脂平板上，使之紧贴，以使滤纸表面湿润。 用镊子取肥沃菜园土10余粒，均匀放在滤纸表面，进行接种（见图）。 放入28300C条件下培养710d。 结果检查：先观察土粒周围有无黄色、桔黄色、棕色等色斑出现。土粒周围滤纸有无破碎变薄现象。而后挑取少许菌体进行涂片、固定、染色，干燥后，油镜观察并绘图。,实验程序3 （好气性纤维素分解菌对纤维素的分解）,实验程序4 （厌气性纤维素分解菌对纤维素的分解）,以接种匙取水稻土少量,接种在装有滤纸条纤维素深层培养液中,套上试管套,再用尼龙纸及橡皮筋将管口扎紧. 放入35
3、370C条件下培养1015d。 取出试管，观察培养液中滤纸条有无被分解而透空的地方，如有空洞或滤纸边缘有破碎现象，表示厌氧纤维素分解细菌已大量繁殖，否则继续培养。 用接种环自发酵液滤纸破碎处取菌液一环在载玻片上涂片、固定、染色、镜检并绘图表示观察到的细菌形态。,实验程序5 （蛋白质的氨化作用）,材料： 1.牛肉膏蛋白胨培养液一管（5mL）。 2.石蕊试纸（红色）、土壤样品、比色碟、奈氏（Nessler）试剂。 方法： 1.放1小匙土粒于牛肉膏蛋白胨培养液的试管中。 2.在管口内壁悬挂湿红色石蕊试纸1条（见图），然后塞好棉塞，放入28300C的温箱中培养23d。,实验程序6 （蛋白质的氨化作用）
4、,实验程序7 （蛋白质的氨化作用）,检查结果： 1.观察试纸颜色有无变化，培养液是否浑浊或产膜。如试纸变蓝，说明有氨生成；如培养液浑浊或产膜，则说明有大量氨化细菌聚集。 2.取培养液两滴于比色碟中，加入奈氏试剂1滴，如有棕色或黄棕褐色出现，也说明有氨生成。 3.取培养液1环,制成涂片、染色，油镜下观察氨化细菌的形态，并绘图。,实验程序8 （硝化作用）,材料： 1. 100mL三角瓶，内装硝化细菌培养液30mL，硝化作用培养基。 2. 格利斯（Griess）试剂、，二苯胺试剂，土壤等。 方法： 1.取菜园土1g左右接种于盛有铵盐培养液的三角瓶中。 2.放入28300C培养714d。,实验程序9
5、（硝化作用）,检查结果： 取培养液两滴于比色碟中，加格利斯试剂及各1滴，如出现绛红色，则证明硝化作用第一阶段正在进行，即有HNO2产生。另取培养液2滴于比色碟中，加二苯胺试剂12滴，观察有无蓝色出现，如有蓝色出现，说明硝化作用第二阶段也正在进行，即有硝酸存在。以上结果表明硝化作用的两个阶段都在进行中，若只有红色出现，说明只有硝化作用第一阶段存在，若有蓝色出现，则说明硝化作用已彻底完成。,实验程序10（反硝化作用）,材料： 1.内有杜氏小管的反硝化作用培养基。 2.格利斯试剂及，水稻土、比色碟等。 方法： 取反硝化作用培养基1管，放入土壤少许，塞上棉塞，于28300C培养1周。 检查结果： 1.分子态氮：在培养过程中如有氮气产生，则培养液表面有气泡层，或小支管中有气体聚集。 2.取培养液两滴于比色碟中，加格利斯试剂及各1滴，如出现红色则证明有反硝化作用产生的亚硝酸。,思 考 题,纤维素培养基中加滤纸的作用是什么？ 土壤中主要的蛋白质分解细菌有那几种？ 硝化细菌培养基中为什么不加有机成分？硝化细菌从那里获得碳素营养？ 进行反硝化作用的必要条件是什么？,实验二十二,结 束,
