实验93紫外分光光度法测定水果或蔬菜中的维生素c含量

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1、实验93 紫外分光光度法测定水果(或蔬菜)中的维生素C含量,93.1 实验目的 (1) 掌握紫外分光光度计的工作原理及使用方法。 (2) 掌握水果(或蔬菜)中的维生素C含量的测定方法。,93.2 实验原理,紫外快速测定维生素C法,是根据维生素C具有对紫外产生吸收和对碱不稳定的特性,于243 nm处测定样品液与碱处理样品液两者消光值之差,通过查标准曲线,即可计算样品中维生素C的含量。,(一)标准曲线的制作 1抗坏血酸标准溶液的配制:用分析天平准确称取抗坏血酸10 mg,加2 mL 10%盐酸,加蒸馏水定容至100 mL,混匀。此抗坏血酸溶液的浓度为100 gmL-1。,93.3 操作步骤,2.

2、标准曲线的绘制,3消光值的测定:以蒸馏水为空白,在243 nm处测定标准系列抗坏血酸溶液的消光值,以抗坏血酸的含量(g)为横坐标,以相应的消光值为纵坐标作标准曲线。,(二)样品的测定 1样品的提取:将果蔬样品洗净、擦干、切碎、混匀。称取5.00 g于研体中,加入25 mL 1% HCl,匀浆,转移到25 mL容量瓶中,稀释至刻度。若提取液澄清透明,则可直接取样测定,若有浑浊现象,可通过离心(10000 g, 10 min)来消除。 2样品的测定:取0.10.2 mL提取液,放入盛有0.20.4 mL 10%盐酸的10 mL容量瓶中,用蒸馏水稀释至刻度后摇匀。以蒸馏水为空白,在243 nm处测定

3、其消光值。 3待测碱处理液的制备:分别吸取0.10.2 mL提取液,2 mL蒸馏水和0.60.8 mL 1 molL-1 NaOH溶液依次放入10 mL容量瓶中,混匀,15min后加入0.60.8 mL 10% HCl,混匀,并定容至刻度。以蒸馏水为空白。在243 nm处测定其消光值。,4由待测样品与待测碱处理样品的消光值之差和标准曲线,即可计算出样品中维生素C的含量。 5也可直接以待测碱处理液为空白,测出待测液的消光值,通过查标准曲线,计算出样品的维生素C的含量。,93.4 计算 V总 维生素C的含量(g/g)= V1W总 式中:从标准曲线上查得的抗坏血酸的含量 (g) V1测消光值时吸取样品溶液的体积(mL) V总样品定容体积(mL) W总称样重量(g),93.5 问题讨论,()除了本实验中的方法外,抗坏血酸还有哪些测定方法?,(1)除了本实验中的方法外,抗坏血酸还有哪些测定方法? 答:一、氧化还原法 1. 直接碘量法 2. 2,6-二氯酚靛酚滴定法 二、分光光度法 1. 紫外快速测定法 2. 2,4-二硝基苯肼法 3. 高铁还原法测定血浆中的抗坏血酸 三、光电比浊法 四、电化学法 五、荧光分析法 1. 抗坏铁酸的微量荧光测定法 2. 抗坏铁酸总量的荧光测定法,93.6 参考答案,

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