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1、PRAS40的研究进展,报告人:李 新 导 师:陈临溪教授,南华大学药物药理研究所 ,读书报告,PRAS40的研究进展主要内容,PRAS40的含义 PRAS40的发现 PRAS40的结构特征 PRAS40的细胞生物学功能,2003年斯坦福大学 Kovacina等人发现 了一种 Proline-rich-Akt Substate,40kDa.故命名为PRAS40 .该发现也被誉为2004年斯坦福大学学术研究的亮点之一. PRAS40作为Akt的作用底物和14-3-3的结合蛋白,它在细胞生长、凋亡、转化以及肿瘤发生等方面起重要作用。,PRAS40的含义,PRAS40的发现(1),蛋白质相互作用实验
2、方法,免疫共沉淀和亲和层析共分离 酵母双杂交系统 FAR WESTERN 表面等离子共振(SPR)法,免疫共沉淀和亲和层析共分离,免疫共沉淀是证明蛋白质-蛋白质相互作用的最直接最经典和最有效的方法,如蛋白A能与B相互作用结合成异源二聚体,无论用抗A或抗B的抗体或与A或B的亲和物偶联的agarose小珠都能把A和B沉淀下来。因此广泛用于蛋白质相互作用研究。 常用的小珠:GST-Agarose(不需要抗体) ProteinA-Agarose(用时需加抗体) 基本方法: 1.表达蛋白质A 2.蛋白质A与亲和小珠结合 3.用结合有蛋白质A的亲和小珠调取细胞破碎液中蛋白质B 4.离心、洗涤亲和小珠若干次 5.处理亲和小珠使蛋白质A、B解吸附(可以直接用SDS-PAGE上样BUFFER 煮),PRAS40结构特征,PRAS40的细胞生物学功能,PRAS40与信号转导 PRAS40与细胞生长 PRAS40与细胞凋亡 PRAS40与肿瘤,PRAS40与细胞生长,PRAS40与细胞凋亡,PRAS40与肿瘤(1),PRAS40与肿瘤(2),PRAS40与肿瘤(3),致谢,非常感谢各位老师和同学的光临,非常感谢能拥有读书报告的机会,Thank you,