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1、蚕豆根尖微核检测技术实 验 名 称： 方便面面饼液对蚕豆根尖微核率的影响专 业 年 级： 2010 级级生物科学成 员: 尹忠围 安树珺 谢林芝 刘伟 指 导 教 师： 实 验 时 间： 2013 年 4 月 一、摘要用蚕豆根尖细胞微核技术检测不同种类方便面面饼液微核的诱变效果。设置了阴性对照：自来水处理组，实验组：康师傅、统一、老坛 ，麻老表四组饼液分别处理蚕豆根尖，阳性对照：用0.02g/L 的醋酸铅溶液处理。发现 方便面面饼液 在诱导微核产生方面影响明显，醋酸铅溶液具有诱导微核产生的作用。关键字：蚕豆根尖，方便面面饼，微核千分率，污染指数二、实验背景和目的随着现代社会的发展，越来越多的化
2、学物质运用到人们的日常生活之中，如种类繁多的食品添加剂。而其中有些物质具有较强的危害，如致畸，致癌，致突变等。为了检测已存在或潜在的危害，各种检测技术应运而生。微核试验是检测染色体或有丝分裂器损伤的一种遗传毒性试验方法。无着丝粒的染色体片段或因纺锤体受损而丢失的整个染色体，在细胞分裂后期仍留在子细胞的胞质内成为微核。用微核试验来评价药物、放射线、有毒物质等对人体细胞或体外培养细胞遗传学损伤仍是一个直观有效可行的方法,在遗传毒理、医学、食品、药物、环境等诸多方面得到了广泛的应用。微核计数经济,迅速,简便,不需要特殊技能,可以统计更多的细胞并实现计算机自动计数。我们采用蚕豆作为实验材料，采用植物微
3、核技术来检测方便面面饼中添加剂对人体是否产生危害。方便面是日常生活中经常接触到的食品，其市场占据快餐食品的大壁江山，在超市中油炸方便面与非油炸方便面占到快餐食品的60%到 70%。另一方面，在各媒体的报道中，经常出现有关方便面的食用危害，而且很有争议，所以这也是我们进行本实验的一个原因。三、实验原理微核是间期细胞中在细胞核之外存在的一个或多个圆形或杏仁状结构，大小在主核的 1/3以下，是有丝分裂后期丧失着丝粒的落后的染色体片段形成。20 世纪 70年代初，Matter 和 Schmid等首先用动物骨髓细胞微核率来测定怀疑具有诱变活力的化合物，并称之为微核。许多能引起染色体断裂的理化因素，如辐射
4、、化学诱变剂等，均可作用于分裂细胞而产生微核。在有丝分裂的后期，断裂的染色体片段或完整的染色体落后于其他染色体，当大部分染色体到达细胞两极并重新被核膜包裹时，这些落后的染色体或染色体片段不能进入主核，便形成了独立于主核之外的核质物团，并在间期时浓缩成小核。含微核的细胞数占观察细胞总数的比率称为微核细胞率，简称微核率，可以用来反映遗传物质受伤的程度。在一定范围内，微核率与环境因子的剂量呈正相关，因此，人们常用微核率来反映环境中有害物质的污染程度。不同厂家生产的面饼化学成分不一，用微核作为面饼材料是否含有有害人体健康物质的手段之一。四、实验用品材料：蚕豆种子， 、康师傅、统一、老坛 ，麻老表四个品
5、种方便面器材：镊子4把，解剖针4支，显微镜，水浴锅，大托盘、培养皿3套，载破片盖玻片若干、烧杯、刀片、吸水纸。试剂：Carnoyg 固定液、盐酸酒精解离液、改良苯酚品红染液、方便面面饼液。五、实验步骤（1）浸种催芽：选取大小均匀、的蚕豆种子约 30粒，直接放入盛有自来水的烧杯中，浸种 24h，此间换水 2次。种子吸胀后，将蚕豆种于放入培养皿中，用草纸覆盖并浇上自来水保持湿度，水淹没 1/3,催芽 48h。大部分初生根长至 1-2cm时，根毛发育良好，准备用来进行检测。（2）制备待测液:我们选取康师傅、统一、老坛 ，麻老表四种常见方便面用来检测，各取面饼 45克,分别放于 5个 1000ml大烧
6、杯中各加加 600毫升开水,加盖浸泡 5分钟,取液体作为待测液并编号,分别存于 4个烧杯待用.（3）用待测液处理根尖：每组选取 4粒初生根生长良好、根长一致的种子，放入待测培养液, 浸没根尖. 另外 1组用蒸馏水做阴性对照,1 组分别用 200mg/L Pb(NO3)2溶液作为阳性对照.根尖细胞恢复培养：用蒸馏水浸洗 3次，洗净后在置于培养皿用凉开水进行恢复培养 24 h。（5）根尖细胞固定：将恢复后的种子，从根尖顶端切下11.5cm 长的幼根，用 Carnoy 固定液固定35小时 ，固定后的根如不及时制片，可换入70%的酒精溶液中置 4冰箱中保存备用。（6）酸解：用蒸馏水浸洗固定好的幼根3次
7、，每次5min，吸净蒸馏水，加入盐酸酒精解离液室温下酸解8-10min，幼根软化即可。（7）染色：吸去盐酸，用蒸馏水浸没幼根3次，每次12分钟。最后浸于水中。制片前取出置载玻片上，截下12mm 左右长的根尖，滴1-2 滴改良苯酚品红染液染色1015min 后，加上盖玻片，覆以吸水纸常规压片。6、实验结果在显微镜低倍镜下找到分生组织区细胞分散均匀，分裂相较多的部位，再转高倍镜观察微核。每一处理观察3个根尖，每个根尖数1000个细胞，统计其中含微核的细胞数，然后平均，计算千分率，以此可作一个检测指标。微核千分率（MCN）=检出的微核数/检测细胞总数*1000在 10以下时，无污染，为环境本底；10-18时，有轻度污染；18-30时，有中度污染；30，有重度污染。2.2污染指数(PI)=实测微核率/标准(蒸馏水)微核率PI 3.5 时，重度污染
