《脑缺血再灌注损伤后氧化应激对自噬调控机制的研究硕士论》由会员分享，可在线阅读，更多相关《脑缺血再灌注损伤后氧化应激对自噬调控机制的研究硕士论（160页珍藏版）》请在金锄头文库上搜索。
1、上海交通大学医学院2008 级硕士研究生学位论文 脑缺血再灌注损伤后氧化应激对自噬调控机制的研究导师 姓 名：卞留贯 教授研究生 姓 名：王文静学号：1087209099专业：神经外科学答 辩 时 间：2010 年5 月上海交通大学医学院2008 级硕士研究生学位论文 脑缺血再灌注损伤后氧化应激对自噬调控机制的研究导师 姓 名：卞留贯 教授研究生 姓 名：王文静学号：1087209099专业：神经外科学0 究 方 向：脑缺血再灌注损伤 0 键 词：脑缺血再灌注；自噬；氧化应激；Beclin1； LC3；NAC申请学位级别：硕士0 辩 时 间：2010 年5 月 0 养 单 位：上海交通大学医学
2、院附属瑞金医院 基 金 资 助：上海市科委重点课题资助项目 （项目编号：09JC1409700;10JC1410700） 上海市科委生物医药重点课题资助项目 （项目编号：10411954200） 上海交通大学学位论文原创性声明本人郑重声明：所呈交的学位论文，是本人在导师的指导下，独立进行研究工作所取得的成果。除文中已经注明引用的内容外，本论文不包含任何其他个人或集体已经发表或撰写过的作品成果。对本文的研究做出重要贡献的个人和集体，均已在文中以明确方式标明。本人完全意识到本声明的法律结果由本人承担。学位论文作者签名：日期： 年 月 日上海交通大学学位论文版权使用授权书本学位论文作者完全了解学校有
3、关保留、使用学位论文的规定，同意学校保留并向国家有关部门或机构送交论文的复印件和电子版，允许论文被查阅和借阅。本人授权上海交通大学可以将本学位论文的全部或部分内容编入有关数据库进行检索，可以采用影印、缩印或扫描等复制手段保存和汇编本学位论文。保密，在 年解密后适用本授权书。本学位论文属于不保密。 （请在以上方框内打“”）学位论文作者签名：指导教师签名：日期： 年 月 日日期： 年 月 日上海交通大学硕士学位论文脑缺血再灌注损伤后氧化应激对自噬调控机制的研究0 要 目的探讨缺血再灌注损伤后早期自噬激活的作用机制及氧化应激 对 早 期 自 噬 变 化 的 调 控 ， 探 讨 抗 氧 化 剂 N-
4、乙 酰 -L- 半 胱 氨 酸（N-acetyl-L-cysteine，NAC）和自噬诱导剂雷帕霉素(Rapamycin)在缺血性脑血管疾病方面的应用价值，为缺血性脑血管疾病新的药物治疗提供理论依据。方法 采用线栓法制作小鼠短暂性大脑中动脉闭塞(temporarymiddle cerebral artery occlusion，tMCAO)模型。实验分为假手术组(sham组)、缺血再灌注组（ischemia/reperfusion，I/R组）。后者随机分tMCAO+生理盐水、tMCAO+rapamycin和tMCAO+NAC。tMCAO+rapamycin组于术前20分钟侧脑室立体定向注射ra
5、pamycin，tMCAO+NAC组于脑缺血术后立刻腹腔注射NAC，tMCAO组于脑缺血术后立刻腹腔注射同容积生理盐水。在脑缺血60分钟后，分别再灌注1小时，3小时，6小时，12小时，24小时，Western blot检测缺血侧皮质和纹状体自噬相关蛋白LC3 I、LC3II和Beclin 1的表达。利用双氢溴乙啶(Dihydroethidium，DHE)染色检测细胞内ROS水平及对自噬活性的影响，借助荧光显微镜观察NAC或雷帕霉素(Rapamycin)条件下的自噬变化。NAC和Rapamycin分别干预缺血再灌I上海交通大学硕士学位论文注24小时小鼠，脑片2,3,5-氯化三苯四氮唑(2,3,5
6、-triphenyltetrazoliumchloride，TTC)染色观察脑梗塞面积。结果 与假手术组比较，缺血再灌注损伤后1小时Beclin 1开始升高，6小时LC3 II/ LC3 I开始升高。与对照组相比，NAC干预后LC3 II/ LC3 I和Beclin 1表达趋势明显升高。DHE染色结果显示缺血再灌注损伤1小时后即开始出现ROS活性增高，经NAC处理后可被部分抑制。TTC染色提示NAC或rapamycin处理后可减小梗塞面积。结论本结果提示小鼠局灶性脑缺血再灌注损伤后自噬表达上调可能是一种保护机制，氧化应激的激活与自噬表达相互影响，抗氧化剂或自噬诱导剂可以通过激活细胞的自噬途径保
7、护神经细胞，减小脑梗塞面积，减轻缺血神经元的损伤。关键词： 缺血再灌注损伤，氧化应激，自噬，LC3，Beclin 1，NACII上海交通大学硕士学位论文THE REGULATION OF OXIDATIVE STREE ON AUTOPHAGY AFTER CEREBRAL ISCHEMIA REPERFUSION INJURYABSTRACTObjective To discuss the activation of autophagy and changes of early-phase autophagy in which the mechanisms of reactive oxyge
8、n species(ROS) involved. Discover the Antioxidant N-acetyl L-cysteine (NAC) or the autophagy inducer rapamycin in ischemic cerebrovascular disease of the application.Methods The temporary focal cerebral ischemia was induced by occlusion of the left middle cerebral artery by applying a modified intra
9、luminal filament technique. Animals were divided into sham group and ischemia/reperfusion group (ischemia / reperfusion, I / R) (+ saline), the latter divided into temporary middle cerebral artery occlusion (tMCAO) group, tMCAO + NAC group and tMCAO + rapamycin group randomly. tMCAO + NAC group was
10、treated by intraperitoneal injection of NAC after MCAO, then rapamycin was injected intracerebroventricular 20 min before MCAO. After 60 minutes in focal cerebral ischemia, the reperfusion was performed at 1, 3, 6, 12 and 24 h. The expression of LC3 I, LC3 II and Beclin 1 in the cortex and striatum
11、after ischemia-reperfusion were determined by immunoblotting analysis at each time point. The level of ROS was detected by staining technique with dihydroethidium (DHE). Effects of antioxidant N-acetyl-L-cysteine (NAC) or rapamycin on antophagy were evaluated using fluorescence microscope. The total
12、 infarct volume of slices was determined by 2,3,5-triphenyltetrazolium chloride(TTC) staining after 24h reperfusionIII上海交通大学硕士学位论文under the conditions of focal cerebral ischemia and durg adminstrationResults Compared with the sham-operated group, the expression of Beclin1 and LC3 II/ LC3 I was incre
13、ased at the point of 1h and 6h after focal ischemia reperfusion respectively, while upregulation treated by NAC. The results of DHE staining were that the level of ROS enhanced at 1h after focal ischemia reperfusion, while down regulated after received injections of NAC. According to TTC staining, t
14、he treatment with NAC or rapamycin prevented the expansion of the infarct.Conclusion The degree of autophagy and ROS were up-regulated after focal ischemia-reperfusion injury, which may be a kind of protection. Mutual influence happended between activation of oxidative stress and autophagy. Antioxidants or rapamycin possibly increased the expression of autophagy to protect neurons and attenuated ischemic neuron injury.KEY WORDS reperfusion injury, oxidative stre
