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1、目录中文摘要1英文摘要2第一章 绪论31.1雷公藤红素的理化性质及结构31.2 雷公藤红素的药理作用41.3 雷公藤红素研究进展41.4 论文研究的意义及目的5第二章 雷公藤红素定性定量分析方法62.1 薄层色谱定性分析方法62.1.1 仪器与材料62.1.2 对照品溶液的制备62.1.3 供试品溶液的制备62.2 高效液相色谱定量方法72.2.1 仪器与材料72.2.2 HPLC色谱条件72.2.4 雷公藤红素对照品的紫外扫描图谱82.2.3 标准曲线的绘制82.3 样品中含量的计算方法9第三章 南蛇藤中雷公藤红素的柱分离工艺考察103.1 雷公藤红素超声波提取103.2 甲醇超声波提取物浸
2、膏预处理103.2.1 水-氯仿萃取实验103.2.2 水-乙酸乙酯萃取实验103.3柱分离梯度洗脱系统探索113.3.1 硅胶吸附层析石油醚-乙酸乙酯洗脱系统考察113.3.2 硅胶吸附层析氯仿-甲醇洗脱系统考察13全文结论14参考文献15致谢171 中文摘要本文确立了南蛇藤中雷公藤红素的薄层定性分析方法。层析条件为：硅胶GF254，氯仿-甲醇(71)为展开剂。展槽中上行展开后在紫外检测器365nm和254nm下观测。采用高效液相色谱进行定量分析。色谱柱为Kromasil C18柱（200mm4.6mm i.d.，5m），流动相为甲醇1醋酸（8713，v/v），等度洗脱，检测波长为425nm
3、，流速1.0mL/min，柱温25，r=0.9999，在150g/mL范围内线性良好，方法学检测符合要求。探索了南蛇藤药材中雷公藤红素的硅胶吸附柱层析工艺条件。对比甲醇-氯仿系统和石油醚-乙酸乙酯系统的洗脱结果，确定了以石油醚-乙酸乙酯为洗脱系统，洗脱顺序为10(2V0)，51(2V0)，11(10 V0)。用薄层层析条件进行检测，判定含有雷公藤红素的流分。高效液相检测可以得到纯度90.6的雷公藤红素。关键词：南蛇藤；雷公藤红素；薄层层析;高效掖相色谱；吸附柱层析ABSTRACTThin-layer chromatography (TLC) of tripterine was studied.
4、 TLC condition was: silica gel GF254 as adsorbent, chloroformmethanol (71) as developer. Tripterine was developed upwards in the separation chamber and detected under 365nm and 254nm. The quantitative analysis of tripterine by HPLC was studied. An external standard method by HPLC with Zorbax C18 col
5、umn as fixed phase and methano l-1% HAc (8713) as mobile phase was adopted. The detecion wavelength was 425 nm and the flow rate was 1.0 mL /min. The establishment of concentration and the peak area of the standard equation and samples of the formula, were the methods to establish Celastrus in tript
6、erine.Silica gel adsorption chromatography of tripterine was studied.Eluant of silica gel adsorption column was petroleum ether-ethyl acetate. Elution gradient was 10(2V0), 51(2V0)，11(10 V0). The purity of tripterine obtained was 90.6%.Keywords: Celastrus; tripterine; Thin Layer Chromatography; High
7、Performance Liquid Chromatography ; adsorption column chromatography沈阳药科大学本科毕业论文 第一章 绪论- 第一章 绪论从中药特别是有毒中药中寻找抗肿瘤有效成分具有广阔的前景。南蛇藤系卫矛科南蛇腾属植物，分布广泛，药性辛温、其全草均可入药，有清热、祛风、除湿、活血、解毒、消肿等功效，常用于治疗风湿性关节炎、腰腿痛、筋骨痛、牙痛、闭经、痢疾跌打损伤、肠风痔漏、毒蛇咬伤等症。现代药理证实南蛇藤具有强大的抗炎镇痛和抗菌、抗病毒作用1，更重要的是一些初步的实验证实其中的三萜类成分雷公藤红素具有较强的抗肿瘤活性，且抗肿瘤机理不同于现有
8、抗肿瘤化疗药物，是通过抑制泛素-蛋白酶通道来阻止肿瘤的生长，是继紫杉醇之后又一高效低毒的抗肿瘤植物药2。但在现阶段，获得雷公藤红素的主要方法是从卫矛属植物药材中提取纯化。其提取物的成分复杂，除了目标成分外，还含有大量的其他成分。而用于药剂研究及医药生产的原料药需要高纯度的化合物。为了获得纯度高的组分，就需要对提取物进行进一步的分离纯化。1.1雷公藤红素的理化性质及结构雷公藤红素又名南蛇藤素、南蛇藤醇(Celastrol)，属于三萜类化合物，性质稳定，是南蛇藤及雷公藤药材中的主要有效成分之一。雷公藤红素主要存在于根皮中，去皮的饮片中雷公藤红素含量很低。结构式如下图1-1：图1-1 雷公藤红素结构
9、式Fig.1-1 Structural formula of tripterine其在甲醇中溶解(室温)和易溶解(加热)。溶解度大小顺序为：甲醇95%乙醇无水乙醇水丙酮乙酸乙酯石油醚，石油醚：乙醚(1:2)，氯仿3。最大吸收波长： max= 425nm1.2 雷公藤红素的药理作用目前雷公藤红素的药理研究比较多，其主要药理作用有抗炎、抗氧化作用，抗菌、抗病毒作用，抗生育活性，调节自身免疫及抗肿瘤活性。张丽娟4等报道了南蛇藤素对肿瘤血管抑制作用。通过建立动物肿瘤模型，对南蛇藤素予以实验治疗，结合免疫组化，检测其抑制肿瘤率和肿瘤内血管密度，以及瘤体VEGF和bFGF的表达的改变。实验研究发现南蛇藤素
10、具有明显抑制S180肉瘤作用，降低VEGF、bFGF的表达可能是其抑制肿瘤血管形成的机制之一。中国科学院武汉植物园的袁晓副研究员与美国韦恩大学研究人员合作，利用无毛裸鼠为实验动物，研究证实雷公藤中含量较高的一种单体成分雷公藤红素具有抗肿瘤作用，且抗肿瘤机理不同于现有抗肿瘤化疗药物。据美国三位诺贝尔医学/ 生理学奖获得者共同提出的新理论，泛素-蛋白酶是细胞内蛋白质降解的重要通道，它在肿瘤生长与转移中起着关键性作用。据细胞分子学理论，调节细胞生长、信号转移、基因转录和凋亡等均由蛋白酶负责降解。故抑制泛素-蛋白酶通道即可阻止肿瘤的生长。根据上述新理论，美国一些制药公司率先开发出“蛋白酶抑制剂”类全新
11、抗癌药物，而且在临床使用后疗效良好5,6,7。1.3 雷公藤红素研究进展1936年赵承暇等首次发现雷公腾红素，1998年WeiHe8等报道了雷公藤红素类似物的合成工艺，而成熟的雷公藤红素合成工艺仍没有报道。目前获得雷公藤红素的主要方法是从卫矛属植物药材中提取纯化。袁晓9等报道了从毛枝南蛇藤根皮中提取雷公藤红素的工艺。将南蛇藤根皮用丙酮冷浸，回收溶剂，所得的浸膏用氯仿回流提取，将所得的氯仿提取液再进行下一步的纯化。苗抗立10对雷公藤根皮中三萜类化合物的研究中采用丙酮浸提、多次层析得到了雷公藤红素单体。夏焱11等研究了从雷公藤中提取雷公藤红素的工艺。雷公藤药材粉末，用10倍量的甲醇索氏提取。提取液
12、浓缩后加入3倍量的硅藻土拌样，烘干后，用氯仿超声提取3次，滤液合并。硅胶干法装柱，少许氯仿溶解样品，上样。用氯仿洗脱除杂后，用氯仿:甲醇(955)洗脱，流分合并浓缩，得雷公藤红素。Shihua W12等考察了逆流色谱(Counter-current Chromatography, CCC)分离纯化工艺。将雷公藤的提取物上硅胶柱，石油醚-乙酸乙酯洗脱，流分再经逆流色谱进一步纯化得雷公藤红素纯品。1.4 论文研究的意义及目的据文献报道，雷公藤红素的抑瘤作用为6593，超过美国科学家在20 世纪70 年代初发现了来自太平洋紫杉树皮中的紫杉醇。在雷公藤红素单独服用及与其它化疗药配伍使用中，尚未见不良反
13、应的报道。据业内人士预测：雷公藤红素一旦获准上市，它将成为继紫杉醇之后又一个高效低毒的抗肿瘤植物药13,14 ,15。随着雷公藤红素抗癌机理被证明，雷公藤红素作为蛋白酶体抑制剂成为抗癌新药的热点，该化合物也将备受关注，具有广阔的市场前景。而雷公藤红素的相关报道中提取纯化工艺报道甚少，因此探究雷公藤红素提取纯化优化工艺既成了一种必要，更有助于推动雷公藤红素研究的进展，为其进入临床应用提供可能。目前对雷公藤红素的报道主要集中在中药雷公藤的研究上，本文选择了卫矛属的另一种药材南蛇藤作为研究对象。对其甲醇超声波提取物浸膏中雷公藤红素的薄层色谱条件及硅胶柱吸附层析进行了探索，以期能提出、其分离纯化的可行
14、性工艺，为雷公藤红素的进一步研究和生产提供参考依据。18 沈阳药科大学本科毕业论文 第二章 雷公藤红素定性定量分析方法 第二章 雷公藤红素定性定量分析方法2.1 薄层色谱(Thin Layer Chromatography, TLC)定性分析方法2.1.1 仪器与材料仪器：ZF-2型三用紫外仪 上海安亭电子仪器厂药品试剂：薄层层析用硅胶GF254 青岛海洋化工有限公司 氯仿，甲醇（分析纯） 山东禹王实业有限公司对照品：雷公藤红素 (98%) 中国生物制品检定所样品：南蛇藤提取物及硅胶柱上洗脱下的流分 2.1.2 对照品溶液的制备取雷公藤红素对照品适量，乙酸乙酯溶解，备用。2.1.3 供试品溶液的制备取南蛇藤提取物浸膏适量，乙酸乙酯溶解，备用。硅胶柱层析洗脱的流分备用。2.1.4 TLC条件薄层板：薄层层析用硅胶GF254展开系统：氯仿甲醇71展开方式：展开槽中加入适量的展开剂，平衡10min后上行展开检 测：当雷公藤红素点样量大时，薄层板在日光下观测有黄色条带；在紫外检测器365nm和254nm下观测为暗色斑点，同时也可以观察到其它杂质成分的荧光点和暗点。2.2 高效液相色谱(HighPerformanceLiquidChromatog
