β-葡萄糖醛酸糖苷酶（GUS） 组织化学染色检测转基因植物, 验 目 的,学习转GUS基因的植物组织化学染色方法，掌握染色的原理 验 原 理,β-葡萄糖醛酸糖苷酶（GUS）基因是植物转基因中常用的一个报告基因GUS基因是从大肠杆菌中分离出来的，在GUS基因附近插入启动子区就产生了转录融合基因或翻译融合基因在稳定转化的植物中，利用一个简单的组织化学检测就可以精确地分析GUS融合基因的时空表达模式用X-gluc（5-溴-4-氯-3-吲哚葡糖苷酸）作为底物可以精确地进行活体GUS活性的定位这一反应分两步进行：首先是切割葡糖醛酸部分，产生无色的吲哚氧基中间产物，随后吲哚氧基中间产物氧化成为不溶的蓝色沉淀 试剂： 1．50mmol/l 磷酸钠缓冲液 A液：称NaH2PO4.2H2O 3.12g，定容100 ml 水中 B液：称 Na2HPO4.12 H2O 7.17g，定容100 ml 水中 取39 ml A液、61ml B液混匀 2．缓冲液：50mmol/l 磷酸钠缓冲液中含有0.1 mmol/l K3[Fe(CN)6]、0.1 mmol/l K4[Fe(CN)6].3H2O、1mmol/L EDTA 3．X-gluc母液：称取10mg X-gluc，溶于100μl的N，N-二甲基甲酰胺（DMF，C3H7NO），得到80㎎/ ml 的 X-gluc母液，-20℃保存。
4．X-gluc反应液：取6.5μl X-gluc母液于500μl buffer中 5．70% 乙醇, 验 步 骤,1．将阴性对照材料和转GUS基因或带有可表达的GUS基因的烟草叶片切成小块，浸入盛有100μl染色液的0.5ml的离心管中 2．抽真空后37℃温育4-16h 3．叶片等绿色材料转入70%乙醇中脱色2-3次，至阴性材料呈白色 4．肉眼或显微镜下观察，白色背景上的蓝色小点即为GUS表达位点 5．组织可在70%乙醇中保存数日。
