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1、1,传染性疾病的诊断,2,病原微生物,病原微生物是指可以侵犯人体，引起感染甚至传染病的微生物，或称病原体。 病原微生物有朊毒体、寄生虫（原虫、蠕虫、医学昆虫）、真菌、细菌、螺旋体、支原体、立克次体、衣原体、病毒 等。,3,传染性疾病诊断的意义,传染病是人类主要的疾病,近30年的新发传染病中，60%为病毒引起的 保护机体健康、有效治疗 控制疾病流行和蔓延 提高人口质量，优生优育（监控垂直传播的病毒和检测导致胎儿畸形的病毒）,4,5,致病微生物的分子诊断策略,完整病原体 核酸 蛋白 在体内留下的痕迹 以病毒为例,分子诊断,6,标本的采集,根据临床诊断、流行病学分析和病毒的致病性等，确定采集合适的标
2、本 血液病毒的抗体 脑脊液神经系统感染 鼻拭子、咽拭子呼吸道感染 粪便肠道感染 疱疹液、尿液、眼泪、精液、阴道分泌液等,7,致病性机制不明的病毒感染，采集多部位的标本 采集标本必须快速、低温，以保证检测的准确性,8,完整病原体的分离与培养,实验室诊断,流行病学研究 分离病原体“诊断的金标准”，在诊断病原体中占重要地位,9,由于病毒是严格的细胞内寄生物，所以，病毒分离必须涉及“活细胞”细胞、动物和鸡胚 动物接种 是最原始的病毒培养方法：根据病毒种类不同，选择敏感动物及接种部位嗜神经性病毒（狂犬病毒）接种于小鼠脑内；痘病毒接种于家兔角膜,10,实验动物,11,鸡胚培养 鸡胚对多种病毒敏感：一般采用
3、孵化914天的鸡胚，根据病毒种类不同，将病毒标本接种于鸡胚的不同部位羊膜腔、尿囊腔、绒毛尿囊膜和卵黄囊等,12,13,14,细胞培养 (cell culture)法 是将离体活组织块或分散的组织细胞加以培养的技术总称，然后加入病毒进行培养、分离鉴定，是病毒分离和培养中最常用、最基本的方法,15,细胞培养瓶,细胞培养板,培养基,16,17,细胞病变效应（CPE）,18,形成合胞体,19,红细胞吸附 (hemadsorption, HAd) 流感或副流感病毒等感染细胞后，由于细胞膜上出现了血凝素(HA)，具有吸附脊椎动物 (豚鼠、鸡、猴等) 红细胞的能力，这一现象称红细胞吸附，常用来测定具有HA的
4、粘病毒与副粘病毒的增殖,20,红细胞,红细胞吸附,21,优点 在选择了正确宿主细胞时，敏感性很高 发现多种不同的病毒 特异性较高 缺点 费时费力，时间3-21天 敏感性的高低受到宿主细胞的影响 有些病毒不能在体外培养，因而会造成假阴性的结果 有些病毒因长时间培养而失去了临床应用价值,22,完整病原毒的电镜检测,实验室快速诊断方法 重要检测方法之一 依靠病毒的形态来诊断,23,优点 快速（30分钟2小时2天） 发现新病毒 适用于一些难以培养或迄今尚不能培养的病毒 缺点 仪器昂贵，需要专业人员 敏感性低，病毒浓度低时假阳性、假阴性率高 特异性低，一般仅能确定到“科” 不能批量检测,24,痘病毒科,
5、虹病毒科,多DNA病毒科,25,疱疹病毒科,多瘤病毒科,乳头瘤病毒科,26,杆状病毒科,非洲猪瘟病毒科,腺病毒科,27,细小病毒科,嗜肝DNA病毒科,逆转录病毒科,28,正粘病毒科,布尼亚病毒科,沙粒病毒科,29,病毒感染的诊断方法,采集标本,电镜检查病毒颗粒,病毒组分的检测,病毒的分离和培养,抗体的检测,抗原,核酸,30,病原体的分子诊断,核酸检测:核酸分子杂交、PCR、生物芯片等 病毒蛋白(抗原)检测：ELISA、化学发光免疫、免疫层析等 抗体：ELISA、化学发光、免疫层析等,31,临床常用的传染性疾病诊断试剂,优生优育系列：TORCH 肝炎系列：甲、乙、丙、丁、戊、庚型病毒性肝炎 性病
6、系列：梅毒、胞疹病毒、衣原体、支原体、淋病和艾滋 呼吸道传染病系列：流感、SARS等,32,血液传染病筛查系列,献血者健康检查要求对献血者所捐献血液进行严格的初、复检两次检测。,1.ABO血型正反定型、Rh血型：正反定型相符，血清中无意外抗体 2.血红蛋白测定：硫酸铜法：男1.052，女1.050；相当于男120g/L， 女110g/L 3.丙氨酸氨基转移酶（ALT）：ALT速率法40单位 4.乙型肝炎病毒表面抗原（HBsAg）：阴性 5.丙型肝炎病毒抗体（HCV抗体）：阴性 6.艾滋病病毒抗体（HIV抗体）：阴性 7.梅毒试验：阴性,33,快速 灵敏 监控机体对病毒的免疫状态 大批量筛查,抗
7、体检测的优点有,34,优生优育系列检测试剂盒,TORCH系列 弓形虫(Toxophasma ） 风疹病毒（Rubella.Virus） 巨细胞病毒（Cytomegalo.Virus） 单纯疱疹病毒I/II（Herpes.Virus）,35,TORCH系列结果分析,结果中的IgM抗体：阳性结果提示近期有感染，结合其他情况，终止妊娠。 结果中的IgG抗体：阳性结果提示过往感染，具有一定的保护性。,36,乙型肝炎病毒的检测,现状 全球约有3.5亿人感染乙型肝炎病毒，中国有1.2亿人感染，其中每年约有1-2%会出现肝硬化或肝癌而死亡,37,HBV病毒颗粒感染肝细胞及DNA复制过程,38,诊断乙肝的指标
8、,生化指标：ALT 免疫学指标：“两对半” 乙肝表面抗原（HBsAg）（携带者指标） 乙肝表面抗体（Anti-HBs） 乙肝e抗原（HBeAg）（活动指标） 乙肝e抗体（Anti-HBe） 乙肝核心抗体（Anti-HBc） 病毒学指标：HBV-DNA,39,40,41,乙肝检测方法：,“两对半”：ELISA、化学发光免疫分析 乙肝病毒（HBV)核酸：PCR（实时荧光定量PCR）,42,丙型肝炎病毒的检测,现状 全球HCV的感染率约为3，估计约1.7亿人感染了HCV，每年新发丙型肝炎病例约3.5万例。我国血清流行病学调查资料显示，我国一般人群抗HCV阳性率为3.2，全国感染HCV人数约4000万
9、。,43,HCV抗原,44,45,HIV的检测,人类免疫缺陷病毒（HIV)感染，获得性免疫缺陷综合征（AIDS) 病毒抗原检测：gp120、gp24等 病毒抗体检测：anti-gp120、anti-gp24等 核酸检测：逆转录病毒，需反转录PCR,46,HIV感染后的免疫情况,47,HIV抗体检测的目的,HIV抗体检测可用于监测、诊断、血液筛查。 以监测为目的的检测是为了解不同人群HIV感染率及其变化趋势，检测的人群包括各类高危人群和一般人群。 以诊断为目的的检测是为了确定个体HIV感染状况，包括临床检测和自愿咨询检测（VCT） 、术前检测、根据特殊需要进行的体检等。 以血液筛查为目的的检测是
10、为了防止输血传播HIV，包括献血员筛查和原料血浆筛查。,48,检测程序,筛查试验 重复检测 确认试验,49,筛查试验方法,用于检测HIV抗体筛查试验的试剂盒种类很多，目前常用的筛查试剂有酶联免疫试验（ELISA）、明胶颗粒凝集试验（PA）、斑点ELISA、斑点免疫胶体金（或胶体硒）快速试验、唾液检测卡、其它快速筛查试验、尿液HIV抗体检测。 第一个用于HIV抗体诊断的试剂盒于1985年问世， ELISA最常用。操作简单、价格便宜，敏感性、特异性较好，适合我国国情。,50,筛查试剂的要求,筛查试剂必须是经国家食品药品监督管理局注册批准、批批检合格、临床评估质量优良、在有效期内的试剂。 推荐使用经
11、临床质量评估敏感性和特异性高的试剂。,51,HIV抗体筛查试验结果,筛查试验（-） 出具“HIV抗体阴性”报告 筛查试验（+） 出具“HIV抗体待复查”， 不能出阳性报告,52,复 检,初次筛查时发现阳性反应，应及时进行复检，复检时除了原标本外尚需重新采集标本一份。（这样既可核对原有检测和复检结果一致性，又可了解有无血液标本受污。）两份标本同时送检。 国际上均认为复检阳性才是做确认检测的指征。,53,复检时的检测试剂,应该用2种不同原理的试剂。 有时由于条件限制，当用ELISA筛查呈阳性反应，在重复检测标本时，如用快速试剂往往敏感性不高，故只好提出用两种不同厂家制造或用原试剂外再用一种高质量的
12、ELISA试剂进行检测。,54,HIV抗体检测的要点,筛查试验阳性不能出阳性报告。 严格遵守实验室标准操作程序（SOP）。 严格按照试剂盒说明书操作，不得擅自更改。 注意防止样品间交叉污染。 注意安全防护。,55,HIV抗体确认试验,包括免疫印迹实验（WB）、条带免疫试验（LIATEK HIV）、放射免疫沉淀试验（RIPA）及免疫荧光试验（IFA） 只有HIV抗体确认实验结果判为阳性的 才能出具“HIV抗体阳性”的报告,56,HIV确认实验,57,HIV核酸检测,早期诊断 ：婴儿 疑难样本的辅助诊断 遗传变异监测 耐药性监测 病程监控及预测 指导抗病毒治疗及疗效判定,58,谢谢 你们的宝贵时间,
