实验5+叶绿体的分离与观察

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1、实验五 叶绿体的分离与观察,实验目的,通过植物细胞叶绿体的分离, 了解细胞器分离的一般原理和方法。,实验原理,分离细胞器的常用方法是将组织匀浆后悬浮在等渗介质中进行差速离心。 一个颗粒在离心场中的沉降速率取决于颗粒的大小、形状和密度，也同离心力以及悬浮介质的粘度有关。 在一给定的离心场中，同一时间内，密度和大小不同的颗粒其沉降速率不同。依次增加离心力和离心时间，就能够使非均一悬浮液中的颗粒按其大小、密度先后分批沉降在离心管底部，分批收集即可获得各种亚细胞组分。,实验原理,叶绿体的分离应在等渗溶液(0.35mol/L氯化钠或0.4mol/L蔗糖溶液)中进行, 以免渗透压的改变使叶绿体受到损伤。

2、将匀浆液1000r/min的条件下离心2min, 以去除其中的组织残渣和未被破碎的完整细胞。然后，在3000r/min的条件下离心5min，即可获得沉淀的叶绿体(混有部分细胞核)。 分离过程最好在05的条件下进行；如果在室温下，要迅速分离和观察。,实验步骤,一、叶绿体的提取 新鲜的嫩菠菜叶洗净擦干去除叶梗脉，取20克放入放入匀浆器中，加入100mL0.35mol/L氯化钠溶液，快速研磨成匀浆。将匀浆液用6层纱布过滤于50mL小烧杯中。 1、取1ml 虑液1000r/min离心2min（去除组织残渣和未被破碎的细胞），弃去沉淀， 2、取上清液在 3000r/min离心5min，保留沉淀（即混有部分细胞核的叶绿体） 3、将沉淀用大约0.2-0.3 mL氯化钠溶液悬浮， 4、取叶绿体悬液一滴滴于载玻片上，盖上盖波片，光学显微镜下观察 。 可看到叶绿体为绿色橄榄形，在高倍镜下可看到叶绿体内部含有较深的绿色小颗粒，即基粒。,二、菠菜叶徒手切片观察 新鲜菠菜叶 用刀片切出一斜面置于载玻片上，滴加12滴氯化钠溶液，盖上盖片显微镜下观察，可以看到三种细胞： （1）表皮细胞：为边缘呈锯齿形的鳞片状细胞。 （2）保卫细胞：为构成气孔的成对存在的肾形细胞。 （3）叶肉细胞：为排成栅状的长形和椭圆形细胞，叶绿体呈绿色橄榄形。,作业,绘制叶绿体形状 思考题 在分离叶绿体时应注意些什么问题？,