药物分析：药物的杂质分析

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1、药物的杂质分析,2018/12/10,2,本章要求,熟悉药物杂质及其来源和分类，杂质检查的依据和方法 掌握药物杂质限量及其计算要求 熟悉一般杂质检查的原理、方法和注意事项 了解杂质鉴定的方法,2018/12/10,3,评价药品质量的三种分析手段： 鉴别（identification） 检查（test for purity） 含 量测定（assay）,反映纯度,杂 质,2018/12/10,4,什么是杂质？,指任何影响药品纯度的物质 在药物中存在但存在无治疗作用 使药物的外观性状、物理常数变化 影响药物稳定性 使药物活性降低、毒副作用增加,氯化物、硫酸盐,砷盐、重金属 对氨基酚、游离肼,第一节

2、药物中的杂质与杂质限量,一、基本概念,2018/12/10,5,注意,药物的纯度指药物的纯净纯度，反映了药物质量的优劣，药物中的杂质是影响药物纯度的主要因素,2018/12/10,6,区分： 药物的纯度 化学试剂的纯度,只有两个等级：合格或不合格,有很多等级，如基准试剂、优级纯（GR）、分析纯（AR）、化学纯（CP）、色谱纯、光谱纯,考虑杂质对生理作用的影响,考虑杂质对化学变化的影响,2018/12/10,7,事例： 消化道检查： 化学试剂BaSO4 代 替 胃透视用BaSO4 死亡因素： 游离钡 超过0.8-0.9g 药用硫酸钡必须严格控制游离钡的限量,7,2018/12/10,8,二、杂质

3、的来源,示例：注射用NaCl,生产过程中引入的杂质,以工业用NaCl精制而成，其中含有Br-、I-、K+等,示例：安乃近的生产,可能引入的杂质为中间体MAA、原料AA、副产物等,2018/12/10,10,示例： 肾上腺素注射液(制剂生产) 抗氧剂焦亚硫酸钠 稳定剂EDTA-2Na,肾上腺素磺酸,生产过程中引入的杂质,肾上腺素,SO32-,2018/12/10,11,示例： 中药中的重金属,生产过程中引入的杂质,土壤 环境,2018/12/10,12,（1）原料、反应中间体及副产物 （2）试剂、溶剂、催化剂类 （3）制剂生产过程中产生新的杂质 （4）金属器皿、装置、工具带来的杂质,受外界条件影

4、响发生水解、氧化、分解、异构化、晶形转变、聚合、潮解和发霉等,2018/12/10,13,贮藏过程中引入的杂质,示例：氧化 利血平氧化产物无降压作用 麻醉乙醚过氧化物有毒,严格控制药品的贮藏条件，是保证临床用药安全、有效的一个重要方面,示例：水解（阿司匹林） 生产中反应不完全 水杨酸残留 贮藏中水解 产生水杨酸,2018/12/10,14,三、杂质的种类与分类,按来源分,一般杂质,在自然界中分布较广泛，在多种 药物的生产和贮藏过程中容易引 入的杂质。如酸、碱、水分、氯 化物、硫酸盐、重金属、砷盐等,特殊杂质,在个别药物的生产和贮藏过程中引入的杂质。如阿司匹林中的游离水杨酸、甲硝唑中的2-甲基-

5、5-硝基咪唑等。,2018/12/10,15,按毒性分,信号杂质,本身一般无害，但其含量的多少可以反映出药物的纯度水平，称其为“信号”杂质。如氯化物、硫酸盐等属于信号杂质。,毒性杂质,对人体有毒害的杂质。如重金属、砷盐、氰化物等应严格加以控制，以保证用药安全。,2018/12/10,16,有机杂质,残留溶剂,无机杂质,按 化 学 类 别 和 特 性 分 类,合成中未反应完全的原料、中间体、副产物、降解产物等,生产中使用的有机溶剂,来源于生产过程，一般是已知的和确定的，直接影响药物的稳定性，反映生产工艺情况,2018/12/10,17,四、杂质的限量,定义,药物中所含杂质的最大允许量。,限量检查

6、,百分之几或百万分之几（ppm）,（在不影响疗效和不产生毒副作用的前提下，允许杂质在一定限度范围内存在）,通常不要求准确测定含量，检查杂质是否超过限量,杂质量 杂质限量 杂质量,药品合格,药品不合格,2018/12/10,18,2018/12/10,19,对照法,一定量的被检杂质标准溶液，与一定量供试品溶液，在相同实验条件下，比较反应结果以确定杂质的含量是否超过限量,灵敏度法,比较法,加入一定量的试剂，在一定反应条件下不得有正反应出现，以判断杂质的含量是否超过限量,测定特定待检杂质的参数与规定的限量比较，不得更大,2018/12/10,20,供试品,对照品,杂质最大 允许量,是否稀释,对照法,

7、平行操作,2018/12/10,21,甲管 乙管,甲管 乙管,自上向下透视,药品检验操作标准规定： 遵循平行操作原则,（1）仪器的配对性 （2）对照品与供试品的同步操作,21,2018/12/10,22,计算,2018/12/10,23,示例1 茶苯海明中氯化物的检查,已知：,求：L？,解：,是否正确？,=0.04%,2018/12/10,24,示例2 谷氨酸钠中重金属的检查,已知：S1.0g 10g/ml L10106 求：V？,解：,2018/12/10,25,示例3 肾上腺素中酮体的检查,解：,已知：,=435,A=0.05,求：L？,2018/12/10,26,计算中应注意,单位一致

8、稀释体积 ppm的表示方法,2018/12/10,27,第二节 药物中杂质的检查方法,药物中杂质检查的原理,2018/12/10,28,产生 特征 实验 现象,薄 层 色 谱,高 效 液 相 色 谱,气 相 色 谱,紫 外 光 谱,红 外 光 谱,原 子 吸 收 光 谱,热 重 分 析,观察 颜色 嗅、 味等,2018/12/10,29,一、化学法,与试剂反应产生颜色,与试剂反应产生沉淀,与试剂反应产生气体,比色法 比浊法 气体检查法,2018/12/10,30,示例 苄氨噻嗪中芳香第一胺的检查,分子结构中无芳香第一胺基，不能发生重氮化-偶合反应，而芳香第一胺杂质可以发生反应而产生颜色，采用分

9、光光度法检查。,苄氟噻嗪,2018/12/10,31,1mol/L盐酸溶液 4亚硝酸钠溶液,10氨基 磺酸铵溶液,2二盐酸萘基乙二胺溶液,步骤,518nm处测定，A0.11,2018/12/10,32,在某一波长处杂质有最大吸收，药物无吸收。在此波长处测定样品溶液的吸光度，通过控制吸光度值的大小来控制杂质的量,二、光谱方法,药物 杂质,对光选择吸收性质的差异,紫外吸收光谱法,2018/12/10,33,地蒽酚 432nm无吸收 二羟基蒽醌 432nm有最大吸收,规定0.01%地蒽酚氯仿溶液A432nm0.12,示例 地蒽酚中二羟基蒽醌的检查,二羟基蒽醌,地蒽酚,2018/12/10,34,示例

10、 两性霉素B中两性霉素A的检查,两 性 霉 素 A,两性霉素B,两性霉素B 305nm几乎无吸收 两性霉素A 305nm有最大吸收,ChP要求测定两性霉素B供试液的吸光度A305nm0.40,2018/12/10,35,检查药物中无效或低效晶型。,示例：甲苯咪唑中A晶型的检查 （C晶型有效晶型， A无效）,红外吸收光谱法,A晶型,C晶型,640cm-1 有强吸收 吸收很弱,662cm-1 吸收很弱 有强吸收,2018/12/10,36,对照品 （含10A晶型）,662cm-1 640cm-1,D2,D1,供试品,D2,D1,2018/12/10,37,三、色谱法（chromatography）

11、,药物中的有机杂质的结构和性质往往和药物相近，色谱法可以利用药物与杂质在色谱性质的差异，能有效的将杂质与药物进行分离和检测。,2018/12/10,38,1. 杂质对照品法,适用于已知杂质并能制 备杂质对照品的情况,TLC法（应用广泛）,点样 展开 晾干薄层板检视斑点,2018/12/10,39,示例 枸橼酸乙胺嗪中N-甲基哌嗪的检查,判断结果： 供试品溶液如显与对照品相应的杂质斑点，其颜色与对照品溶液的主斑点比较，不得更深。,供试品溶液：枸橼酸乙胺嗪（50mg/ml） 对照品溶液： N-甲基哌嗪对照品(50 g/ml),2018/12/10,40,2. 供试品溶液自身稀释对照法,适用于杂质的

12、结构不能确定，或无杂质对照品的情况。 以供试液的稀释液作为对照液， 限于杂质斑点的颜色与主成分斑点颜色相同或相近的情况下使用。,高低浓度对比法,2018/12/10,41,示例 吡罗昔康中有关物质的检查,供试品溶液：20mg/ml,对照溶液： 0.2mg/ml,结果判断： 供试品溶液如显杂质斑点，与对照液所显的主斑点比较，不得更深。,稀释,2018/12/10,42,3.杂质对照品法与供试品溶液自身稀释对照 法并用,当药物中存在多个杂质时，其已知杂质有对照品时，采用杂质对照品法检查； 共存的未知杂质或没有对照品的杂质，可采用供试品溶液自身稀释对照法检查。,2018/12/10,43,判断： 供

13、试品溶液如显杂质斑点不得多于2个， 与对照品溶液相同位置上所显杂质斑点颜色与对照品溶液主斑点比较，不得更深， 另一杂质斑点的颜色与对照液主斑点比较，不得更深。,示例 盐酸黄酮哌酯中有关物质的检查,供试品溶液： 20mg/ml 对照溶液： 0.10 mg/ml 对照品溶液：3-甲基黄酮-8-羧酸0.10 mg/ml,稀释,2018/12/10,44,4. 对照药物法,当无合适的杂质对照品，或者是供试品显示的杂 质斑点颜色与主成分斑点颜色有差异，难以判断限量 时，可用与供试品相同的药物作为对照，此对照药 物中所含待检杂质需符合限量要求，且稳定性好。,2018/12/10,45,1. 外标测定法,H

14、PLC法（应用日益广泛）,适用于有杂质对照品的情况,采用HPLC法测定含量，同一条件下可进行杂质检查,2018/12/10,46,示例 卡托普利及其片剂中卡托普利二硫化物的检查,供试品溶液： 0.5mg/ml 对照品溶液：卡托普利二硫化物对照品，5 g/ml,结果判断： 以峰面积计算其含量，原料药中的二硫化物不得超过1.0%,2018/12/10,47,2. 加校正因子的主成分自身对照测定法,消除杂质与主成分的响应 可能不同所引起的测定误差,适用于已知杂质的控制。需要杂质对照品和药物对照品建立内标法计算f，测定时以供试液稀释液为对照，不用杂质对照品,药物对照品的峰面积,杂质对照品的峰面积,20

15、18/12/10,48,示例 红霉素A中红霉素B、C组分及有关 物质的检查,供试品溶液：4mg/ml 对照溶液：0.2mg/ml,稀释,结果判断： 供试品溶液中各杂质的峰面积分别乘以相应的校正因子后，与对照溶液中主成分的峰面积比较。,其他单个杂质峰面积的和不得大于对照溶液主峰面积,2018/12/10,49,3. 不加校正因子的主成分自身对照法,适用于没有杂质对照品的情况， 以供试液的稀释液作为对照液,2018/12/10,50,供试品溶液：1 mg/ml 对照溶液： 5g/ml 结果判断：单个杂质的峰面积不得大于对照溶液的主峰面积（0.5%），各杂质的峰面积的和不得大于对照溶液的主峰面积的4倍（2.0%）,示例 甲氨蝶呤中有关物质的检查,稀释,2018/12/10,51,适用于粗略测量供试品中杂质的含量。,计算各杂质峰面积及其总和占总峰面积（含药物的峰面积，而不含溶剂峰面积）的百分率。,该法一般不宜用于微量杂质的检查。,4. 面积归一化法,2018/12/10,52,主要用于药物中挥发性杂质（残留溶剂）的检查。,方法 ：,方法同HPLC 另外有标准溶液加入法,GC法,2018/12/10,53,1. 原理,对照法,2. 方法,S：供试品溶液 R：杂质对照品溶液,五、药物中杂质检查示例（一般杂质）,氯化物检查,操作要求： 平行操作 黑色背景 比较浊度,2018/12/