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1、罗氏HE4试剂性能评估综述,中山大学附属肿瘤医院 刘万里,内容,罗氏 HE4检测原理 Elecsys HE4 SFDA注册研究概况 Elecsys HE4性能评估 Elecsys HE4性能小结,内容,罗氏 HE4检测原理 Elecsys HE4 SFDA注册研究概况 Elecsys HE4性能评估 Elecsys HE4性能小结,标记免疫电化学发光检测,ECL (IA) Technology,E Electro C Chemo L Luminescence I Immuno A Assay 方法、仪器、试剂三位一体的特定自动化分析，系统解决了大规模样本检测稳定、高效、快速等问题。是医学超微量
2、分析的一次战略性革命,Roche HE4检测试剂设计 双抗体夹心一步法,原理：双抗体夹心法 检测时间：18分钟 1st 孵育: 分钟 10 L血样, 生物素标记HE4特异性单克隆抗体，钌标记HE4特异性单克隆抗体，形成抗原抗体复合物 2nd 孵育:分钟 加入链酶亲和素包被的磁珠，通过生物素和链酶亲和素反应，形成复合物 检测: 反应复合物送入测量池，磁珠结合至电极表面，未结合的反应物通过ProCell清除 通过对电极增加电压触发化学发光光电子释放，后者通过光电倍增管检测,Roche HE4检测试剂设计 HE4检测原理,生物素标记的 HE4单克隆抗体,待检样本中的HE4 (10 L),钌标记的HE
3、4 单克隆抗体,链酶亲和素 包被的磁珠,进行检测,9 min,9 min,Roche HE4试剂成分 试剂 工作溶液,M: 包被链酶亲和素的微粒（透明盖），1 瓶，6.5 mL：包被链霉亲和素的微粒0.72 mg/mL；防腐剂 R1: 生物素化抗人HE4抗体（灰盖），1瓶，10 mL：生物素化单克隆抗HE4抗体（小鼠）0.75 mg/L，磷酸盐缓冲液100 mmol/L，pH值6.5；防腐剂 R2: 钌复合物标记的抗人HE4抗体（黑盖），1 瓶， 10 mL：钌复合物标记的单克隆抗HE4抗体（小鼠）1.5 mg/L；磷酸盐缓冲液100 mmol/L，pH值7.4；防腐剂,Roche HE4试剂
4、成分 需要的材料,卵巢癌肿瘤标志物 提供HE4和CA125检测的厂家,罗氏所有免疫平台均可以同时提供CA125和HE4的检测,内容,罗氏 HE4检测原理 Elecsys HE4 SFDA注册研究概况 Elecsys HE4性能评估 Elecsys HE4性能小结,Elecsys HE4 SFDA注册研究 研究概况,研究时间： 2011.12011.6 研究中心 中国医学科学院肿瘤医院 浙江大学医学院附属妇产科医院 华中科技大学同济医学院附属同济医院 山西省肿瘤医院,Elecsys HE4 SFDA注册研究,研究目的一： 与康乃格公司HE4 (酶联免疫法) 进行比对检测，评价试验结果 研究目的二
5、： 盆腔肿块患有卵巢癌风险的评估：Elecsys HE4和Elecsys 125II联合检测计算ROMA指数，评估风险高低 研究目的三： 血清,血浆对比试验，验证不同类型样本结果的一致性,Elecsys HE4 SFDA注册研究结果 共入组1487例样本,Elecsys HE4 SFDA注册研究结果 各研究中心不精密度结果,选取中、低浓度的样品各一份，分别检测10次，计算CV值,Elecsys HE4 SFDA注册研究结果 各研究中心质控结果良好,Elecsys HE4 SFDA注册研究结果 与参与试剂有良好的一致性,y = 1.0942x + 2.7976 相关系数r0.949 回归系数R2
6、0.8997,Elecsys HE4 SFDA注册研究结果 ROMA指数可将盆腔肿块患者进行风险分级,绝经前: PI = -12,0 + 2,38*LNHE4 +0,0626*LNCA125 绝经后: PI = -8,09 + 1,04*LNHE4 + 0,732*LNCA125 582例样本被正确分入高/低风险组,注：风险指数PI（Predictive Index） LN为自然对数,内容,罗氏 HE4检测原理 Elecsys HE4 SFDA注册研究概况 Elecsys HE4性能评估 Elecsys HE4性能小结,病例报告,患者，女，45岁，B超检查发现卵巢肿块， 罗氏试剂电化学发光法检
7、测血清HE4浓度，结果为 136 pmol/L。 如何判断这患者HE4结果是否异常？,临床判断HE4检测结果应考虑的问题,参考值 HE4实验室检测误差 样本检测前误差：,标本采集影响 标本保存的影响 干扰物质的影响 人生理变异 治疗措施的干扰（药物） 其他疾病的干扰,三组各年龄段HE4浓度比较,a 均值标准差pmol/l（例数）； 青年组：45岁；中年组：45-59岁；老年组：60岁。*LSD检验；#经随机区组设计方差分析,1、参考值,HE4在不同观察组间的差异,OC组，不同年龄的HE4,良性病变组，不同年龄的HE4,健康对照组组，不同年龄的HE4,年龄因素对HE4浓度的影响,HE4在各年龄组
8、参考值的设定和诊断价值评估,所有病例的ROC曲线,青年组的ROC曲线,HE4在各年龄组参考值的设定和诊断价值评估,中年组的ROC曲线,老年组的ROC曲线,2、实验室检测误差,日间精密度（罗氏）,日间精密度（验证）,在三个研究中心进行的重复性检测的结果：不精密度（CV),低值（44.3） CV=2.1% 高值 （1317） CV=1.9%,2、实验室检测误差,初步结论,实验室检测误差5%,样本检测前误差,血清、血浆（EDTA、肝素）,样品保存（24h内）,血清血浆，血清24h内检测，HE4无显著性差异,样本检测前误差,干扰物质影响（罗氏）,药物的影响（罗氏）,回收率均10%,结论：上述浓度下的干
9、扰物质和药物对HE4检测无显著影响。,样本检测前误差,对HE4浓度分别在65 pmol/L 和155 pmol/L进行检测，判 断与乳清酸性蛋白家族其他 成员的交叉反应性 Elafin :弹性蛋白酶特异性抑制剂 SLPI：分泌性白细胞蛋白酶抑制剂,干扰物质的影响 ： 交叉反应（罗氏）,结论：交叉反应对HE4结果的影响可忽略不计。,样本检测前误差,HE4生理变异的影响（n=2),初步结论:HE4个体日间变异度10%,样本检测前误差,肺部疾病的影响,肾功不良的影响,结论：肺部疾病，尤其是肾衰显著影响HE4水平,总结,1、HE4的参考值需按年龄段设定 2、HE4实验室检测误差5 2、HE4个体日间变
10、异度约10 3、肺部疾病和肾衰HE4水平显著升高 4、其他样品前检测影响因素对HE4的影响不显著 5、HE4结果超过参考值上限20判断为异常，对高于 正常参考限但未大于20的患者，应连续追踪观察。,患者HE4结果的初步判断,患者，女，45岁，B超检查发现卵巢肿块， 罗氏试剂电化学发光法检测血清HE4浓度，结果为 136 pmol/L 肾功正常，无肺部疾病 病理诊断：卵巢癌,实验室检测误差约136x56.8 个体变异36x10%=13.6 预计该患者HE4的结果为115.6156.4范围内 该年龄组参考限为80pmol/L,结论：该患者HE4异常增高,内容,罗氏 HE4检测原理 Elecsys
11、HE4 SFDA注册研究概况 Elecsys HE4性能评估 Elecsys HE4性能小结,Elecsys HE4性能参数 小结,Elecsys HE4 来自巴塞罗纳Dr. Molina的评价, .Elecsys HE4提供准确的方法学检测，并拥有优秀的精密度“ . 临床表现. 显示与其他方法有良好的一致性“ . HE4是卵巢癌高灵敏度和特异性的优秀标志物“ . 与卵巢癌的分期明确相关“ . 结果稳定可靠，操作简单，结果精确.“,Elecsys HE4 结论,整个检测范围均呈现优秀的精密度 所需样本量低 血清和血浆均适用 一管血同时检测HE4和CA125两项指标 溯源至 HE4 EIA Fujirebio 临床相关的Cut-off值具有良好的有效性 临床研究数据适用于良性疾病，卵巢癌的监测和风险评估,谢谢！,
