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1、为了适应公司新战略的发展，保障停车场安保新项目的正常、顺利开展，特制定安保从业人员的业务技能及个人素质的培训计划酵母细胞形态的观察实验报告实验七酵母菌的形态观察及死活细胞的鉴定一、目的要求：1、观察酵母菌的形态特征及出芽生殖。2、掌握酵母菌的死活细胞的鉴定方法。3、掌握酵母菌的一般形态特征及其与细菌的区别。二、实验原理酵母菌是单细胞的真核微生物，具有典型的细胞核，个体比细菌大得多。酵母菌的形态通常有球状、卵园状、椭圆状、柱状或香肠状等多种。酵母菌的无性繁殖有芽殖、裂殖和产生掷孢子；酵母菌的有性繁殖形成子囊和子囊孢子。酵母菌母细胞在一系列的芽殖后，如果长大的子细胞与母细胞并不分离，就会形成藕节状
2、的假菌丝。美蓝是一种无毒性染料，氧化型为蓝色，还原型无色。用美蓝对酵母的活细胞进行染色，由于细胞中新陈代谢的作用，使细胞内具有较强的还原能力，能使美蓝从蓝色的氧化型变为无色的还原型，所以酵母的活细胞无色，而对于死细胞或代谢缓慢的老细胞，则因它们无此还原能力或还原能力极弱，而被美蓝染成蓝色或淡蓝色。因此，用美蓝水浸片不仅可观察酵母的形态，还可以区分死、活细胞。但美蓝的浓度、作用时间等均有影响，应加注意。三、实验器材1、酿酒酵母或卡尔酵母；2、吕氏碱性美蓝染液，革兰氏染色用的碘液；3、显微镜，载玻片，盖玻片等。四、操作步骤1、美蓝浸片观察1）在载玻片中央加一滴吕氏碱性美蓝染液，液滴不可过多或过少，
3、以免盖上盖玻片时，溢出或留有气泡。然后按无菌操作法取在豆芽汁琼脂斜面上培养48小时的酿酒酵母少许，放在吕氏碱性美蓝染液中，使菌体与染液均匀混合。2）用镊子夹盖玻片一块，小心地盖在液滴上。盖片时应注意，不能将盖玻片平放下去，应先将盖玻片的一边与液滴接触，然后将整个盖玻片慢慢放下，这样可以避免产生气泡。3）将制好的水浸片放置3分钟后镜检。先用低倍镜观察，然后换用高倍镜观察酿酒酵母的形态和出芽情况，同时可以根据是否染上颜色来区别死、活细胞。4）染色半小时后，再观察一下死细胞数是否增加。5）用吕氏碱性美蓝染液重复上述的操作。2、水-碘浸片观察在载玻片中央滴一滴革兰氏染色用的碘浓，然后再在其上加三滴水，
4、取酿酒酵母少许，放在水-碘液滴中，使菌体与溶液混匀，盖上盖玻片后镜检。五、实验报告1、绘出观察到的酵母菌的形态。2、说明观察到的吕氏碱性美蓝染液浓度和作用时间对死活细胞数的影响。3、比较酵母菌与细菌菌落的区别。4、酵母菌与所学专业有何关系？5、酵母菌细胞与细菌细胞有何区别？姓名班级13级生命基地班学号科目微生物学实验题目酵母菌的形态观察组别3【实验题目】酵母菌的形态观察【实验目的】1.掌握酵母菌一般形态与细菌的区别2.观察酵母菌的出芽生殖，区分酵母菌的死细胞和活细胞3.学习酵母菌子囊孢子的观察方法【实验器材】1.菌种：酿酒酵母2d麦芽汁斜面培养物2.溶液和试剂：A)%吕氏碱性美蓝溶液、质量分数
5、为95%的乙醇溶液、5%孔雀绿水溶液、%番红水溶液、蒸馏水B）香柏油、二甲苯3.仪器及其它用品：普通光学显微镜、擦镜纸、绸布、酒精灯、载玻片、接种针、培养皿、双层瓶等【实验原理】1、单细胞的酵母菌个体是常见细菌的几倍甚至几十倍，大部分采取出芽方式进行无性繁殖，也可以通过接合产生子囊孢子进行有性繁殖。2、由于细胞个体大，采取涂片的方法制片有可能损伤细胞，一般采用美蓝染液水浸片法或水-碘液浸片法来观察酵母菌形态及出芽生殖方式。3、采用美蓝染液水浸法可以对酵母菌的活细胞和死细胞进行鉴别。美蓝对细胞无毒，其氧化型呈蓝色，还原型无色，由于新陈代谢，活细胞内有较强还原能力，使美蓝由蓝色氧化型转变为无色的还
6、原型，而死细胞或衰老细胞胞内还原性弱，染色后细胞呈蓝色或淡蓝色，因此，用美兰染色后，活细胞呈无色，死细胞呈蓝色。【实验内容及步骤】1、酵母菌制片与简单染色-美蓝染液水浸片法1)滴加一滴%吕氏碱性美蓝染液于载玻片中央，无菌操作用接种环由酿酒酵母麦芽汁斜面培养物挑取少许菌体置于染液中，混合均匀。2)用镊子取一盖玻片，将盖玻片一边与菌液接触，缓慢将盖玻片倾斜并覆盖在菌液上。3)将制片放置3min后，用低倍镜及高倍镜观察酵母菌形态和出芽情况，并根据细胞颜色区分死细胞和活细胞。4)染色30min后，再次观察，注意死活细胞的比例是否发生变化。2、酵母菌子囊孢子的观察1)涂片。先在洁净载玻片上滴一滴蒸馏水，
7、用接种环无菌操作挑取适量酵母菌菌体于姓名班级13级生命基地班学号科目微生物学实验题目酵母菌的形态观察组别3蒸馏水中，混合均匀。2)干燥固定。将载玻片在酒精灯上方来回移动，注意不要让载玻片距离火焰过近，以免烫死酵母菌细胞，可用手背反复试温度。3)染色。孔雀绿染色1-2min；水洗后用95%的乙醇溶液脱色30s；水洗后用番红染液复染1min；水洗后干燥。4)镜检。将制好的装片放在显微镜下镜检，由低倍镜到高倍镜，最后用油镜观察。【实验结果】1、酵母菌死活细胞鉴定姓名班级13级生命基地班学号科目微生物学实验题目酵母菌的形态观察组别32、酵母菌子囊孢子的观察【实验小结】酵母菌一般呈卵圆形、圆形或圆柱形。
8、酵母菌大部分采取出芽方式进行无性繁殖，在条件恶劣的情况下进行有性繁殖，形成子囊和子囊孢子。在进行有性繁殖时，两个单倍体的营养细胞结合，质配后发生核配，形成二倍体细胞。这种二倍体细胞在许多情况下能通过出芽繁殖延续几代。在适当的条件下，二倍体细胞的核可进行减数分裂，形成子囊孢子。在本次实验中，应该注意的地方：1、从液体培养基中取菌液前应先摇动锥形瓶，因为长时间培养后菌体会沉积到锥形瓶底部。2、用接种环将菌体与染液混合时不要剧烈涂抹，以免损坏细胞。3、滴加染液要适当，否则用盖玻片覆盖时，染液过多会溢出，过少会产生大量气泡。4、盖玻片要缓慢倾斜覆盖，以免产生气泡。【思考与讨论】1、根据观察，吕氏碱性美
9、蓝染液浓度及作用时间与酿酒酵母死、活细胞比例变化是否有关系？试分析原因。答：时间越长则视野中死亡酵母菌比例越大。原因：酵母菌处于吕氏碱性美蓝染液中会导致细胞脱水死亡，时间越长，细胞死亡数量越多。姓名班级13级生命基地班学号科目微生物学实验题目酵母菌的形态观察组别32、酿酒酵母除了通过出芽方式进行无性生殖以外，还可以形成子囊孢子进行有性繁殖，你在实验中是否观察到了酿酒酵母的子囊孢子？若未观察到，试分析原因。答：观察到了。结果如上图所示。若未观察到，原因可能为培养酵母菌的环境不够恶劣，酵母菌在条件恶劣的情况下形成子囊和子囊孢子，进行有性繁殖。或者是因为染色不够成功。【附录】培养基配方微生物实验报告
10、酵母菌的形态观察一、目的要求：1、掌握普通光学显微镜的使用方法和注意事项2、观察酵母菌的形态特征、出芽生殖方式，并掌握酵母菌与细菌形态特征的区别3、学习鉴别死活酵母细胞的实验方法二、器材和器皿：1、酵母菌2、生理盐水、美蓝染色液、3、显微镜、酒精灯、载玻片、盖玻片、接种针、擦镜纸三、实验原理酵母菌是单细胞的真核微生物，菌体比细菌大而且不运动。酵母菌的繁殖方式分为无性繁殖和有性繁殖两种，以无性繁殖为主。芽殖是酵母菌普遍的无性繁殖方式，少数为裂殖；有性繁殖是产生子囊和子囊孢子。本实验是通过美蓝染液水浸片来观察酵母的形态和芽殖方式。美蓝是一种无毒性的染料，它的氧化型呈蓝色，还原型无色。用美蓝对酵母活
11、细胞染色时，由于细胞的新陈代谢作用，细胞内具有较强的还原能力，能使美蓝由蓝色的氧化型变为无色的还原型，而对代谢作用微弱或死细胞，无此还原能力或还原能力极弱，而被美蓝染成蓝色或淡蓝色。因此，不仅用此法可观察酵母细胞形态，也可用来鉴别酵母菌的死细胞和活细胞。四、操作步骤：显微镜的主要构造：普通光学显微镜的构造主要分为三部分：机械部分、照明部分和光学部分。显微镜的使用方法1低倍镜的使用方法取镜和放置：显微镜平时存放在柜或箱中，用时从柜中取出，右手紧握镜臂，左一手托住镜座,将显微镜放在自己左肩前方的实验台上，镜座后端距桌边12寸为宜，便于坐着操作。调节光源低倍镜观察先将标本玻片置于载物台上，并将标本部
12、位处于物镜的正下方，以左手按逆时针方向转动粗调节器，使镜台缓慢地上升至物镜距标本片约5毫米处，应注在上升镜台时，切勿在目镜上观察。一定要从右侧看着镜台上升，以免上升过多，造成镜头或标本片的损坏。然后，两眼同时睁开，左眼看目镜，同时反时针方向慢慢旋转粗调节轮，当在视野内出现物象后，改用细调节轮，上下微微转动，直至视野内获得清晰的物象。然后认真观察标本各部位，确定并将需进一步要观察的部位移视野中央，准备用高倍镜观察。换片观察完一个标本后，如果想要再观察另一标本时，需先将高倍物镜转回到低倍物镜，取出标本，按放片的方法换上新片，即可观察。千万不可在高倍物镜下换片，以防损坏镜头。意美蓝浸片观察步骤1.制
13、片：在载玻片上滴一小滴%美蓝液，无菌操作用接种环取酵母少许，与美蓝液混合均匀，染色2-3min。2.加盖玻片：先将盖玻片一端与菌液接触，然后慢慢放下使其盖在菌液上。3.镜检：先低倍镜，后高倍镜，观察酵母细胞的形态、构造和出芽情况，并注意区分死细胞与活细胞。后再镜检。五、实验现象1.都是单个细胞2.都是透明的3.基本是活的4.有细胞核5.用美兰染色后蓝色是死细胞，透明的是活细胞六、思考题1.美蓝染液浓度和作用时间的不同，对酵母菌死细胞数量有何影响?试分析其原因。答：吕氏碱性美蓝染液无毒性，在浓度不大的情况下，对酵母菌死细胞的数量影响几乎没有。在浓度高的情况下，会导致酵脱水死亡。作用时间短对死细胞数量影响不大，时间过长，会由于酵母细胞在脱离了最适培养条件的情况下逐渐死亡，而使得死细胞数量偏大。2.在显微镜下，酵母菌有哪些突出的特征区别于一般细菌?答：酵母菌要比细菌大的多酵母菌具有细胞核而细菌没有，细胞核有些细菌具有鞭毛，而酵母菌不具有鞭毛。班级：环境14325班姓名：黄鹏飞时间：目的-通过该培训员工可对保安行业有初步了解，并感受到安保行业的发展的巨大潜力，可提升其的专业水平，并确保其在这个行业的安全感。
