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1、2011.3,,第五节 消毒与灭菌 检验医学院 杜季梅,2011.3,,2011.3,,物理消毒灭菌法,一、常用方法 1、热力法 2、辐射消毒 3、滤过除菌 4、超声波 5、干燥与低温抑菌,2011.3,,2011.3,,实验室生物危害废物示例,2011.3,,消毒学历史,1 、人类应用消毒学的手段、历史悠久： 公元前17世纪，吕氏春秋中有饮水需“九沸九度”之说 公元1578年本草纲目中“天气瘟疫，取出病人衣物，于甑上蒸过，则一家不染。”等。 公元前322年，希腊的亚里斯多德向亚历山大建议，让士兵饮用开水，掩埋粪便。 1485年，威尼斯用醋熏蒸消毒信件。 1804年，法国用热封装法保存食物。,
2、2011.3,,2、消毒学的形成和发展 19世纪中叶随着微生物的发展，消毒工作才开始进入了有科学依据的时代，消毒技术上开始有较大的进步和发展。如压力蒸汽、干热、过滤等技术，漂白粉、石炭酸、升汞、甲醛等消毒药品的应用等。,2011.3,,清洁清洁剂 消毒 消毒剂/抗菌剂 灭菌灭菌剂/杀菌剂/化学灭菌剂 化学方法 物理方法,基本概念,2011.3,,基本概念,1、消毒（disinfection） 杀灭或去除物体上的病原微生物的方法。 用于消毒的化学物品称消毒剂。 2、灭菌（sterilization） 杀灭或去除物体上所有微生物的方法。包括繁殖体和芽孢，包括病原微生物和非病原微生物。,2011.3
3、,,3、防腐（antisepsis） 破坏或抑制病原微生物的方法。用于防腐的化学物品称防腐剂。 4、无菌（asepsis） 没有活的微生物。包括繁殖体和芽孢，包括病原微生物和非病原微生物。,2011.3,,5、无菌操作（aseptic technique） 防止微生物进入无菌组织或物品的操作技术。 6、D值：能杀死微生物群中90%以上微生物所需接触热或化学物的时间或离子辐射剂量。,2011.3,,2011.3,,2011.3,,一、物理消毒灭菌方法,(一)机械除菌法:为了清除而不是杀灭，减少受感染的机会。 常用的方法有 1、打扫、擦拭 2、洗涤 3、通风,2011.3,,（二）温度 低温： 广
4、泛用于保存菌种和标本。 高温：加热是最常用的清除病原体污染的物理手段。 热力灭菌主要是利用高温使菌体变性或凝固，酶失去活性，而使细菌死亡。 高温亦可导致胞膜功能损伤而使小分子物质以及降解的核糖体漏出。,2011.3,,1、热力消毒、灭菌法 （1）干热灭菌法 焚烧、灼烧、干烤、红外线烤箱,2011.3,,2011.3,,（2）湿热消毒、灭菌法 巴氏消毒法：71.7，15 30秒； 61.162.8 30分 煮沸消毒法：一般细菌繁殖体煮沸5分杀死，芽孢需要12小时。 流通蒸汽消毒法：Arnold流通蒸汽灭菌器/蒸笼,2011.3,,巴氏消毒器（瞬时高温消毒器）,2011.3,,间歇蒸汽灭菌法： 提
5、供芽孢发育的条件，适用于不耐高于100 的物品，如含血清的培养基等。 对某些物质，可将温度减低到7580 ，每次加热时间延长到3060分，次数增加到3次以上可达到灭菌目的。,2011.3,,高压蒸汽灭菌法： 原理： 在完全排除冷空气的密闭的容器中，蒸汽压力越大，温度越高，杀菌能力越强。 通常1.055kg/cm2或15磅的压力下，温度可达121.3 ，在此温度下维持1530分，可杀死一切微生物。,2011.3,,高压蒸汽灭菌器（立式） （手提式 ）,2011.3,,高压蒸汽灭菌器（卧式）,2011.3,,（1） 预真空式高压灭菌器,蒸汽进入前，灭菌器排出空气。 气体是通过一个装有HEPA过滤器
6、的排气阀排出。 灭菌结束时，蒸汽自动排出。 高压灭菌可以在134进行，灭菌周期可以缩短至3min。 预真空式高压灭菌器对于多孔性物品的灭菌很理想，但由于要抽真空而不能用于液体的高压灭菌。,2011.3,,预真空式高压灭菌器（双门互锁）,2011.3,,（2）重力置换式（“下排气式”） 高压蒸汽灭菌器,蒸汽在压力作用下进入灭菌器，由上而下置换较重（冷）的空气并通过灭菌器的排气阀排出。,2011.3,,（3）燃料加热压力锅式高压灭菌器,只有在没有重力置换式高压灭菌器的情况下才使用这一种灭菌器。 从其顶部装载物品，通过燃气、电力或其他燃料来加热。通过加热容器底部的水来产生蒸汽，由下而上置换空气并经排
7、气孔排出。当所有的空气排出后，关闭排气孔的阀门，缓慢加热使压力和温度上升到安全阀预置的水平。 记时，灭菌结束后停止加热。温度下降到80以下再打开盖子。,2011.3,,燃料加热压力锅式高压灭菌器,2011.3,,（4）脉动真空蒸汽内循环高压灭菌器,脉动真空压力蒸汽灭菌器利用真空控制系统、经预抽真空及有限次脉动抽取，通过压力蒸汽循环，强制以饱和蒸汽替换残余空气，可将柜内冷空气抽除98以上； 避免了因内部冷空气排除不彻底而存在的灭菌效果不稳定等问题。 灭菌后真空加温热烘干，可快速干燥灭菌物品。,2011.3,,脉动真空蒸汽内循环高压灭菌器,2011.3,,高压蒸汽灭菌器待灭菌物品放置,松散包装：
8、上下左右均应有空隙； 不能接触器壁； 物品应放在金属网状篮筐内或金属网架上； 物品装载量不超过总体积的80%,2011.3,,灭菌包内放置化学指示卡/条,2011.3,,高压蒸汽灭菌法适用范围： 耐高热的物品如普通培养基、生理盐水、玻璃器皿、衣帽、注射液等。 优点： 速度快 效果可靠 温度高 穿透力强,2011.3,,操作注意事项： 排除冷空气 合理计算灭菌时间 灭菌物品的包装和容器要合适 检查水及热源 安全操作等,2011.3,,2、热力灭菌的机制 主要通过引起菌体蛋白凝固、变性，失去生物活性，代谢发生障碍而死亡。,2011.3,,3、干热和湿热灭菌的比较 在同一温度下，湿热的灭菌效果大于干
9、热 （1）湿热供给充足的水分，蛋白质在含水多的环境中易凝固。 （2）湿热传导快，穿透性强。 （3）湿热的蒸汽可放出潜能。,2011.3,,光线与射线 1、日光和紫外线：200300nm的紫外线 杀菌力强，穿透力差，对人体有损伤。 紫外线作用机制：DNA吸收紫外线，使一条链上的相邻的两个胸腺嘧啶共价结合形成二聚体，干扰DNA的复制与转录，导致细菌变异或死亡。,2011.3,,2011.3,,人工紫外线杀菌灯： 由石英玻璃制成的低压汞灯，能将电能转化254nm的紫外线，能量以单位时间（秒）、单位面积（cm2）的微瓦（W）计算。 灯用久后需要及时更换，一般灯的寿命为3000-4000小时。,2011
10、.3,,2011.3,,2、光感作用：可见光通过某些染料发出荧光杀菌。 3、微波：可穿透玻璃、塑料与陶瓷等物质，但不能穿透金属表面。常用2450MHz与915MHz两种。,2011.3,,4、电离射线：高能量的电子束及r射线，常用于一次性医用塑料制品的灭菌。,2011.3,,滤器 滤过除菌是一种机械除菌的方法，利用物理阻留的方法将液体或空气中的细菌去除。其效能与滤器材料特性、滤孔大小、静电作用等因素有关。 不能去除病毒、支原体、L型细菌等。 处理不能加热灭菌的血清或液体和空气等。,2011.3,,除菌滤膜上的细菌,2011.3,,用于滤过除菌的各式滤器,2011.3,,滤器,2011.3,,超
11、净工作台(HEPA),2011.3,,IIB2型生物安全柜,2011.3,,常用滤器类型： 1、薄膜滤器：硝化纤维素酯，除菌孔径0.22m 2、素陶瓷滤器：制药工业 3、石棉滤器：蔡氏滤器 4、玻璃滤器 5、硅藻土滤器,2011.3,,2011.3,,纱布口罩,过滤除菌法所用的可以阻留80-90%的微生物，使用时应注意： （1）新口罩应先用热水肥皂洗涤后再用 （2）保持清洁干净 （3）内外分清 （4）不能连续4小时以上 （5）不能防止飞沫、空气污染，在特殊传染病房要用特种口罩,2011.3,,声波 超声波可裂解多数细菌，尤其革兰阴性菌。 湿度/干燥 干燥能引起细菌蛋白质的变性和盐类的浓缩，妨碍
12、细菌的生长而导致死亡。,2011.3,,二、 化学消毒灭菌法 1、杀菌机理： （1）菌体蛋白变性或沉淀 （2）干扰细菌的酶系统和代谢 （3）损伤菌细胞膜 （4）改变蛋白质和核酸的功能基,2011.3,,2、消毒剂的种类 （一）分类 可分为灭菌剂、高效消毒剂、中效消毒剂、低效消毒剂、防腐剂和保藏剂。 1灭菌剂 属于此类的有：甲醛、戊二醛、环氧乙烷、乙型丙内酯、二氧化氯、过氧乙酸、过氧化氢、过氧戊二酸等。,2011.3,,2高效消毒剂 可以杀灭一切致病性微生物的消毒剂。 海因类化合物、双链季铵盐等。 3中效消毒剂 可以杀灭除细菌芽孢外的各种致病性微生物的消毒剂。 含碘消毒剂、醇类消毒剂、酚类消毒剂
13、等。,2011.3,,4.低效消毒剂 可以杀灭细菌繁殖体和亲脂病毒，而不能杀灭细菌芽孢和亲水病毒。 苯扎溴铵(新洁尔灭)等季铵盐类消毒剂、氯己定(洗必泰)等二胍类消毒剂。汞、银、铜等 金属离子类消毒剂和中草药消毒剂。 5防腐剂和保藏剂,2011.3,,（二）常用的消毒、灭菌和防腐、保藏剂 1、醛类灭菌剂 甲醛:灭菌效果可靠，但有刺激性气味，作用慢,对人有致癌作用。用于怕热、怕湿物品的灭菌或消毒. 戊二醛:被称为冷灭菌剂，用作怕热物品的灭菌。灭菌效果可靠，对物品腐蚀性小。缺点是具有较强的刺激性何毒性,作用较慢。,2011.3,,（二)烷基化气体灭菌剂 环氧乙烷、环氧丙烷和乙型丙内酯。 1、环氧乙烷 是一种气体灭菌剂，主要用于一次性医疗卫生用品消毒灭菌。杀菌作用强，灭菌效果可靠。由于易燃易爆及近年来发现有致癌作用而影响其广泛使用。,2011.3,,2、乙型丙内酯 杀菌作用比环氧乙烷强，但由于在最初研究时有致癌作用，未能作为一种常规消毒灭菌剂使用。 3、环氧丙烷： 作用不及环氧乙烷。大多数可 用环氧乙烷消毒的物品可用环氧丙烷消毒。目前主要用于消毒粉末性食品和食品添加剂。我国已有生产，但尚未在消毒灭菌上大量应用。,
