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1、食品化学实验,北京农学院食品科学系,綦菁华 王芳 庞美霞,实验目的,（1）通过实验，了解淀粉糊化及酶法制备淀粉糖浆的基本原理。 （2）掌握淀粉双酶法制备淀粉糖浆的实验方法，以及酶的使用。 （3）熟悉淀粉水解产品的葡萄糖值测定方法。,实验一 淀粉糊化及酶法制备淀粉糖浆及其葡萄糖值的测定,实验原理,将淀粉悬浮液加热到55-80时，会使淀粉颗粒之间的氢键作用力减弱，并迅速进行不可逆溶胀，淀粉粒因吸水，体积膨胀数十倍，继续加热使淀粉胶束全部崩溃，淀粉分子形成单分子，并为水包围，形成具有粘性的糊状液体，这一现象称淀粉糊化。糊化淀粉容易被酶水解。 双酶法水解淀粉制淀粉糖浆，是先以-淀粉酶使淀粉中的-1，4
2、甙键水解生成小分子糊精、低聚糖和少量葡萄糖，然后再用糖化酶将糊精、低聚糖中的-1，6甙键和-1，4甙键切断，最后生成葡萄糖。 淀粉糖浆的分析方法是根据国家标准GB12099-89，采用莱恩艾农滴定法测定淀粉水解产品的葡萄糖值（DE），例如DE值为42，表示淀粉糖浆中含42%的葡萄糖。,实验步骤 （一）淀粉糖浆的制备,10g淀粉置于150ml锥形瓶中，加水50ml，搅拌均匀，配成淀粉浆，于80水浴上加热，并不断搅拌，淀粉浆由开始糊化直到完全成糊，呈透明状，加入液化型-淀粉酶8mg(先溶于15ml蒸馏水中，再倒入糊化的淀粉中),不断搅拌使其液化。并使温度保持在80（水浴）温度，搅拌20分钟，然后将
3、锥形瓶移至电炉（隔石棉网）加热到至沸，灭活3分钟。3000rpm离心10min，滤液冷却至55，加入糖化酶25mg， 于65恒温水浴中糖化40min，加热至沸，灭酶3min，即为淀粉糖浆。再取2ml,定容到100ml（即稀释50倍），作为样品液待用。,（二）DE值的测定 （1）标定碱性酒石酸铜溶液,吸取5.0ml碱性酒石酸铜甲液及5.0ml乙液，置于150ml锥形瓶中，加水l0ml,从滴定管滴加约9ml葡萄糖标准溶液，控制在2min内加热至沸，沸腾状态下（锥形瓶一直放在电炉上加热）以每两秒l滴的速度继续滴加葡萄糖标准溶液，直至溶液蓝色刚好褪去为终点，记录消耗葡萄糖标准溶液的总体积，同时平行操作
4、三份，取其平均值，计算每10ml(甲、乙液各5m1)碱性酒石酸铜溶液相当于葡萄糖的质量(mg)。,（2）样品溶液预测,吸取5.0ml碱性酒石酸铜甲液及5.0ml乙液，置于150ml锥形瓶中，加水10ml，控制在2min内加热至沸，沸腾状态下（锥形瓶一直放在电炉上加热）以先快后慢的速度，从滴定管中滴加样品溶液，并保持溶液沸腾状态，待溶液颜色变浅时，以每两秒1滴的速度滴定，直至溶液蓝色刚好褪去为终点，记录样液消耗体积。,（3）样品溶液测定,吸取5.0ml碱性酒石酸铜甲液及5.0ml乙液，置于150ml锥形瓶中，加水10ml，从滴定管滴加比预测体积少1ml的样品溶液，使在两分钟内加热至沸，沸腾状态下
5、继续以每两秒一滴的速度滴定，直至蓝色刚好褪去为终点，记录样液消耗体积，同法平行操作三份，得出平均消耗体积。,结果计算,1 V1N 100 DE=mV21000 式中DE样品中葡萄糖的含量，；11 ml葡萄糖标准液相当于1mg葡萄糖，mg/ mlV1标定碱性酒石酸铜溶液平均消耗葡萄糖标准液 的体积，ml； V2测定时平均消耗样品液的体积，m1； N稀释倍数（50）；m样品质量，g,思考题,为什么在测定DE值的整个滴定过程中，要保持沸腾，蒸汽始终充满烧瓶？,实验目的,以卵蛋白、大豆蛋白为代表，通过一些定性试验了解 1) 蛋白质的水溶性 2) 蛋白质的乳化性 3）蛋白质的起泡性 4）蛋白质的凝胶作用
6、,实验二 蛋白质的功能性质,蛋白质的功能性质一般是指能使蛋白质成为人们所需要的食品特征而具有的物理化学性质，即对食品的加工、贮藏、销售过程中发生作用的那些性质。蛋白质的功能性质可分为水合性质，表面性质、蛋白质蛋白质相互作用的有关性质三个主要类型，主要包括有吸水性、溶解性、乳化性、起泡性、凝胶作用等,实验原理,实验步骤 （一）蛋白质的水溶性,（1）在50ml的小烧杯中加入0.5ml蛋清蛋白，加入5ml水，摇匀，观察其水溶性，有无沉淀产生。在溶液中逐滴加入饱和氯化钠溶液，摇匀，得到澄清的蛋白质的氯化钠溶液。 取上述蛋白质的氯化钠溶液3ml，加入3ml饱和的硫酸铵溶液，观察球蛋白的沉淀析出，再加入粉
7、末硫酸铵至饱和，摇匀，观察清蛋白从溶液中析出，解释蛋清蛋白质在水中及氯化钠溶液中的溶解度以及蛋白质沉淀的原因。 （2）在四个试管中各加入0.1-0.2g大豆分离蛋白粉，分别加入5ml水，5ml饱和食盐水，5ml 1M的氢氧化钠溶液，5ml,1M的盐酸溶液，摇匀，在温水浴中温热片刻，观察大豆蛋白在不同溶液中的溶解度。在第一、第二支试管中加入饱和硫酸铵溶液3ml，析出大豆球蛋白沉淀。第三、四支试管中分别用1M盐酸及1M氢氧化钠中和至pH 4-4.5，观察沉淀的生成，解释大豆蛋白的溶解性以及pH值对大豆蛋白溶解性的影响。,（二）蛋白质的乳化性,（1）取5g卵黄蛋白加入250ml的烧杯中，加入95ml
8、水，0.5g氯化钠，用电动搅拌器搅匀后，在不断搅拌下滴加植物油10ml，滴加完后，强烈搅拌5分钟使其分散成均匀的乳状液，静置10分钟，待泡沫大部分消除后，取出10ml，加入少量水溶性红色素染色，不断搅拌直至染色均匀，取一滴乳状液在显微镜下仔细观察，被染色部分为水相，未被染色部分为油相，根据显微镜下观察所得到的染料分布，确定该乳状液是属于水包油型还是油包水型并阐述现象。 （2）配制5%的大豆分离蛋白溶液100ml，加0.5g氯化钠，在水浴上温热搅拌均匀，同上法加10ml植物油进行乳化。静止10分钟后，观察其乳状液的稳定性，同样在显微镜下观察乳状液的类型，确定该乳状液是属于水包油型还是油包水型并阐
9、述现象。,（三）蛋白质的起泡性,（1）在三个250ml的烧杯中各加入2%的蛋清蛋白溶液50ml，一份用电动搅拌器连续搅拌1-2分钟；一份用玻棒不断搅打1-2分钟；另一份用玻管不断鼓入空气泡1-2分钟，观察泡沫的生成，估计泡沫的多少及泡沫稳定时间的长短。评价不同的搅打方式对蛋白质起泡性的影响并阐述现象。 （2）取二个250ml的烧杯各加入2%的蛋清蛋白溶液50ml，一份放入冷水或冰箱中冷至10，一份保持常温（30-35），同时以相同的方式搅打1-2分钟，观察泡沫产生的数量及泡沫稳定性有何不同并阐述现象。 （3）取三个250ml烧杯各加入2%蛋清蛋白溶液50ml，其中一份加入酒石酸0.5g，一份加
10、入氯化钠0.1g，以相同的方式搅拌1-2分钟，观察泡沫产生的多少及泡沫稳定性有何不同并阐述现象。 用2%的大豆蛋白溶液进行以上的同样实验，比较蛋清蛋白与大豆蛋白的起泡性。,（四）蛋白质的凝胶作用,（1）在试管中取1ml蛋清蛋白，加1ml水和几滴饱和食盐水至溶解澄清，放入沸水浴中，加热片刻观察凝胶的形成并阐述现象。 （2）在100ml烧杯中加入2g大豆分离蛋白粉，40ml水，在沸水浴中加热不断搅拌均匀，稍冷，将其分成二份，一份加入5滴饱和氯化钙，另一份加入0.1-0.2g -葡萄糖酸内酯，放置温水浴中数分钟，观察凝胶的生成并阐述现象。 （3）在试管中加入0.5g明胶，5ml水，水浴中温热溶解形成
11、粘稠溶液，冷后，观察凝胶的生成。 解释在不同情况下凝胶形成的原因。,实验目的,（1）测定油脂的过氧化值 （2）测定油脂的酸价,实验三、脂肪过氧化值、酸价的测定 (滴定法),实验原理,脂肪氧化的初级产物是氢过氧化物ROOH，因此通过测定脂肪中氢过氧化物的量，可以评价脂肪的氧化程度。同时脂肪氧化的初级产物ROOH可进步分解，产生小分子的醛、酮、酸等，因此酸价也是评价脂肪变质程度的一个重要指标。本实验通过油脂在不同条件下贮藏，并定期测定其过氧化值和酸价，了解影响油脂氧化的主要因素。 实验中过氧化值的测定采用碘量法，即在酸性条件下，脂肪中的过氧化值与过量的KI反应生成I2，用Na2S2O3滴定生成的I
12、2，求出每千克油中所含过氧化物的毫摩尔数，称为脂肪的过氧化值(POV)；酸价的测定是利用酸碱中和反应，测出脂肪中游离酸的含量。油脂的酸价以中和1g脂肪中游离酸所需消耗的氢氧化钾或氢氧化钠的毫克数表示。,实验步骤,(一)过氧化值的测定：称取2g(准至0.01g)油脂置于干燥的250mL碘量瓶中，加入20mL氯仿-冰乙酸混合液，轻轻摇动使油溶解，加入1mL饱和碘化钾溶液，摇匀，加塞，置暗处放置5min。取出立即加水50mL，充分摇匀，用0.0lmolL Na2S2O3滴定至水层呈淡黄，加入1mL淀粉指示剂，继续滴定至蓝色消失，记下体积V。 (三)酸价的测定:称取油脂1g(准确至0.01g)于250
13、mL的锥形瓶中,加入中性乙醚-乙醇混合液12mL,小心旋转摇动烧瓶使试样溶解,加三滴酚酞指示剂,用0.01moL/L的碱液滴定至出现微红色在30s不消失,记下消耗碱液毫升数(V)。,结果计算,（一）过氧化值 POV式中：NNa2S2O3溶液摩尔浓度(molL) V消耗Na2S2O3溶液体积(m1) W称取油脂重量(g) （二）酸价NV40 酸价（mgNaOH/g油）= W式中：NKOH的摩尔浓度 V消耗KOH溶液的体积（mL） 40- NaOH的毫摩尔 W-称取油脂重量(g),注意事项,1）滴定过氧化值时,应充分摇匀溶液,以保证I2被萃取至水相中。 2）1%酚酞乙醇溶液在酸性条件下是无色，在碱性条件下是红色,
