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1、四川大学博士学位论文番石榴叶提取物辅助降血糖作用及其机制研究姓名：王波申请学位级别：博士专业：营养与食品卫生学指导教师：黄承钰20070510英文缩写A E 6 5 A E 9 5A G E sA U CB GC A Tc D N AC tD E P CD ME C 5 0G 6 p cG A D P HG KG l i p i z i d eG S HG L RG y sG RH P L CI C s oI C H全文缩略词英文名称6 5 a l c o h o l - s o l u b l ee x t r a c tf r o mP G L9 5 a l c o h 0 1 s o l
2、 u b l ee x t r a c tf r o mP G La d v a n c e dg l y c a t i o ne n dp r o d u c t sa r e au n d e rt h e 删L r V eb l o o dg l u c o s ec a t a l a s e ，c o m p l e m e n t a r yD N At h r e s h o l d c ；y c l ed i e t h y lp y r o c a r b o n a t ed i a b e t e sm o d e l5 0 e f f e c tc o n c e n
3、 t r a t i o ng l u C o s e - 6 - p h o s p h a t a s e ，c a t a l y t i cg l y c e r a l d e h y d e - 3 - p h o s p h a t e d e h y d r o g e n a s eg l u c o l d n a s er e d u c e dg l u t a t h i o n eb l o o dg l u c o s e - l o w e r i n gr a t eg l y c o g e ns y n t h a s eg l y e o g e n e
4、 s i sr a t eh i g l lp e r f o 腓a n c el i q u i dc h r o m a t o g r a p h y5 0 i n h i b i t i n gc o n c e n t r a t i o ni m m u n o h i s t o c h e m i s t r y中文译名番石榴叶6 5 乙醇提取物番石榴叶9 5 乙醇提取物高糖化终末产物曲线下面积血糖过氧化氢酶互补D N A 序列阈值循环数焦碳酸二乙酯糖尿病模型半数有效浓度葡萄糖6 磷酸酶3 一磷酸甘油醛脱氢酶葡萄糖激酶格列吡嗪还原型谷胱甘肽降血糖率糖原合酶糖异生率高效液相色谱半
5、数抑制浓度免疫组织化学I C P A E SI O Dt 毗o G 订P G LR O Sr p mR T P C RS o DS RS T ZT A BU V，Ei n d u c t i v e l yc o u p l e dp l a s m a - a t o m 电感耦合等离子体一原子e r n l T l l S S l O ns p e c t r o m e t r y发射光谱法i n t e g r a t e do p t i cd e n s i t y累积光密度i n h i b i t i n gr a t e抑制率m a l o n d i a l d e h y
6、 d e丙二醛o r a lO u c o s et o l e r a n c et e s t口服葡萄糖耐量试验P s i d i u mg u a j a v aL i n n 1 e a v e s番石榴叶r e a c t i v eo x y g e ns p e c i e s活性氧r e v o l u t i o n sp e rm i n u t e辕f 食铁i - e V C l “ S et r a n s c r i p t i o n - p o l y m e r a s ec h a i n 逆转录一多聚酶链反应删o ns u p e r o x i d ed
7、i s m u t a s e超氧化物歧化酶s c a v e n g i n gr a t e清除率s t r e p t o z o t o c i n链脲佐菌素t h i a b a b i t u r i ca c i d硫代巴比妥酸u l t r a v i o l e t - v i s i b l ea b s o r p t i o ns p e t r o m e t r y 紫外一可见吸收光谱w a t e r - s o l u b l ee x t r a c tf r o mP G L番石榴叶水提取物2声明本人声明所星交的学位论文是本人在导师指导下进行的研究工作及取褥
8、的研究成果。据我所知。除了文中特别加以标注和致谢的地方外，论文中不包含其他人已经发表或撰写过的研究成果，也不包含为获得四川大学或其他教育机构的学位或证书而使用过的材料与我一同工作的同志对本研究所做的任何贡献均已在论文中作了明确的说明并表示谢意。本学位论文成果是本人在四川大学读书期间在导师指导下取得的，论文成果归四川大学所有，特此声明。申请人；王次指导教师：彳写t 以，四川大学博t 学位论文番石榴叶提取物辅助降血糖作用及其机制研究中文摘要营养与食品卫生学专业博士研究生：王波指导老师：黄承钰教授近年来，全球糖尿病患病率呈逐年上升趋势。2 0 0 2 年我国成人糖尿病患病率为2 6 ，估计全国糖尿病
9、现患人数2 0 0 0 多万，到2 0 2 5 年将达到3 8 0 0 万。糖尿病是一组因胰岛素绝对或相对缺乏引起的以高血糖为特征的代谢性疾病。慢性高血糖产生葡萄糖毒性作用，与糖尿病及其并发症的发生发展密切相关。因此，严格控制血糖，是糖尿病治疗的基本要求，寻找方便易行、安全可靠的控制血糖方法，对糖尿病的预防和治疗显得十分重要。番石榴叶具有辅助降血糖作用，其作用机制和功效成分研究尚不广泛深入。我国番石榴自然资源丰富，海南、广东、广西、台湾、福建、云南、贵州和四川等省、自治区有引种种植或遗为野生的种类。四J l i r a 枝花地区野生番石榴叶辅助降血糖作用未见研究报道。本文研究攀枝花地区野生番石
10、榴叶提取物辅助降血糖作用及其机制，为开发利用番石榴叶野生资源提供参考依据。全文从以下三部分进行研究：1 番石榴叶提取物制备和及其辅助降血糖作用比较目的制备番石榴叶水提取物和不同浓度乙醇提取物，比较不同提取物对糖尿病小鼠辅助降血糖作用，筛选安全、有效的降血糖提取物。方法采摘攀枝花地区野生番石榴叶，清洗、晾干、打碎，分别用蒸馏水、6 5 和9 5 食用乙醇浸提，浸提液过滤、浓缩、干燥( 乙醇提取物用乙醚脱脂) 后，研磨成粉得中文摘要水提取物( w E ) 、6 5 乙醇提取物( A E 6 5 ) 和9 5 乙醇提取物( A E 9 5 ) 。选用雄性昆明种小鼠，链脲佐菌素( S T Z ) 8
11、0 m g k g 腹腔注射诱导糖尿病。W E 、A E 6 5 和A E 9 5 悬液灌胃4 周，降血糖药物格列吡嗪( G l i p i z i d e ) 作为降血糖效果阳性对照，比较三种提取物辅助降血糖效果，比较各组小鼠生长情况。结果W E 、A E 6 5 和A E 9 5 等三种提取物得率分别为1 4 5 、2 2 0 和1 1 0 。三种提取物均可明显降低糖尿病小鼠禁食3 h 空腹血糖，在1 2 5 e k g 剂量水平，A E 9 5 组小鼠血糖降低3 1 3 ，降血糖程度明显低于G l i p i z i d e 组( 4 3 2 ) ；W E 和A E 6 5 组小鼠血糖分
12、别降低3 6 3 和3 3 5 ，降血糖程度低于G l i p i z i d e ，但三者差别没有统计学意义；三种提取物中，W E 对小鼠的体重影响较小。W E的1 2 5 、2 5 和5 0 9 k g 三个剂量中，低剂量和中剂量组小鼠血糖下降差别没有统计学意义，对糖尿病小鼠体重增长的影响与模型对照组和G l i p i z i d e 阳性对照组相似；高剂量W E 组小鼠血糖降低4 5 4 ，和G l i p i z i d e 相近，但对小鼠体重增长影响较大。结论番石榴叶水提取物、6 5 乙醇提取物和9 5 乙醇提取物均具有辅助降血糖作用；水提取物安全性较高。2 番石榴叶水提取物辅助降
13、血糖作用机制研究2 1 番石榴叶水提取物对小肠粘膜a 葡萄糖苷酶活性的影响目的研究番石榴叶水提取物( W E ) 对小肠粘膜a 一葡萄糖苷酶的抑制作用。方法选用雄性昆明种小鼠，S T Z 腹腔注射( 8 0 m g k g ) 诱导糖尿病模型。以小鼠小肠粘膜生理盐水匀浆液用作p 葡萄糖苷酶待测液，与双糖底物孵育，比色法测定葡萄糖产量代表p 葡萄糖苷酶的活性。比较正常对照组小鼠和糖尿病小鼠小肠粘膜扣葡萄糖苷酶活性，测定W E 对糖尿病小鼠小肠秸膜p 葡萄糖苷酶活性的影响，L i n e w e a v e r - B u r k 作图判断W E 对弘葡萄糖苷酶抑制作用类型。结果W E 对糖尿病小
14、鼠小肠粘膜蔗糖酶和麦芽糖酶具有较强的抑制作用，并呈剂量效应关系，抑制作用类型为部分竞争性和非竞争性混合型。结论番石榴叶水提取物具有抑制糖尿病小鼠小肠a 一葡萄糖苷酶作用，减缓肠道碳水化合物消化吸收可能是其辅助降血糖作用机制之一。2 2 番石榴叶水提取物对肝脏糖代谢的调节作用目的研究番石榴叶水提取物( w E ) 对糖尿病小鼠肝脏糖代谢的影响，探4中文摘要讨辅助降血糖作用分子生物学机制。方法雄性昆明种小鼠，链脲佐菌素( S T z )8 0 m g k g 腹腔注射诱导糖尿病模型。实验小鼠分为正常对照组、糖尿病模型对照组和W E 辅助降血糖组，W E 按2 5 9 k g 剂量灌胃4 W ，葡萄
15、糖溶液灌胃进行口服葡萄糖耐量试验( o G ，兀) ，丙氨酸溶液腹腔注射进行1 2 h 空腹糖异生实验；小鼠脱颈椎处死，测定肝糖原含量，实时荧光定量P C R ( R e a l t i m eP C R )测定肝组织中葡萄糖激酶( G K ) 、葡萄糖岳磷酸酶( G 6 p c ) 和肝糖原合酶( G y s - 2 )等糖代谢关键酶m R N A 水平。结果与正常对照组小鼠相比，糖尿病模型对照组小鼠3 h 和1 2 h 空腹血糖( 2 1 2 9 和1 2 7 6 m m o F L ) 明显升高，口服葡萄糖耐量明显减低( A U C = 4 8 11 ) ，丙氨酸注射l h 和2 h 糖
16、异生率明显升高( 3 6 5和5 9 1 ) ，肝糖原含量( 3 0 1r a g g ) 明显减少。W E 灌胃4 周后，与糖尿病模型对照组小鼠相比，W E 灌胃组小鼠3 h 和1 2 h 空腹血糖( 1 4 0 9 和8 0 4 m m o F L ) 明显降低，口服葡萄糖耐量明显改善( A U C - - 3 6 8 1 ) ，丙氨酸注射1 h 和2 h 糖异生率明显降低( 2 3 7 和3 8 5 ) ，肝糖原含量( 3 8 7 m g g )明显升高。糖尿病模型对照组小鼠肝组织中G Km R N A 水平明显下降，只是正常对照组小鼠的1 3 ；6 6 p cm R N A 水平明显上升，达到正常对照组小鼠的3 0 倍；G y s - 2m R N A 水平没有明显变化。W E 灌胃处理，糖尿病小鼠肝G Km R N A 水平明显升高，是模型对照组小鼠的6 倍：G 6 p cm R N A 水平呈下降趋势，G y s 2m
