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1、2.2 动物细胞工程,2.2.2 动物细胞融合与单克隆抗体,杂合的原生质体,杂种细胞,愈伤组织,杂种植株,温故知新:,植物体细胞杂交过程,一、动物细胞融合,1.概念：,动物细胞融合（cell fusion）也成细胞杂交，是指两个或多个动物细胞结合形成一个细胞的过程。,融合和形成的具有原来两个或多个细胞遗传物质的单核细胞，称为杂交细胞。,2、原理：,细胞膜的流动性,3.融合过程：,诱导融合的方法？,诱导方法：,物理方法：,化学法：,生物法：,灭活的病毒,电激等,聚乙二醇（PEG),为什么灭活的 病毒能作诱导剂？,3.融合过程：,灭活病毒诱导细胞融合的原理：,病毒表面含有的糖蛋白和一些酶能够与细胞
2、膜上的糖蛋白发生作用，使细胞互相凝聚，细胞膜上的蛋白质分子和脂质分子重新排布，细胞膜打开，细胞发生融合。灭活是指用物理或化学手段使病毒或细菌失去感染能力，但并不破坏这些病原体的抗原结构。,P52生物技术资料卡,4.意义：,突破了有性杂交方法的局限，使远缘杂交（种间、属间、科间、动植物之间）成为可能。,5.应用：,最重要的用途是 制备单克隆抗体,植物细胞杂交与动物细胞融合的比较,细胞膜的流动性细胞的全能性,细胞膜的流动性,纤维素酶、果胶酶,胰蛋白酶,物理方法 （离心、振荡、电激）化学方法（PEG）,物理、化学方法 灭活的病毒,去除细胞壁后诱导原生质体融合,使细胞分散后诱导细胞融合,1. 抗体由何
3、种细胞产生？如何产生？ 2. 抗体的化学本质是什么？与抗原作用的特点？主要分布在哪里？ 3. 用传统的方法如何获得抗体？,(三)单克隆抗体,1. 抗体由何种细胞产生？如何产生？ 2. 抗体的化学本质是什么？与抗原作用的特点？主要分布在哪里？ 3. 用传统的方法如何获得抗体？,(三)单克隆抗体,抗原决定簇： 抗原表面具有的某些特定的化学基团，能决定抗原特异性，是免疫细胞识别抗原的重要依据。 各种抗原的决定簇数目不同，同一抗原的决定簇可能有多种。,抗体的传统生产方法,从血清中分离抗体,该法制备抗体的特点：产量低、纯度低，且抗体的特异性差、灵敏度低。,多种效应B细胞,动物体内,多种抗体,抗原,血清抗
4、体（也称多克隆抗体）由血清中提取的抗体是由不同淋巴细胞产生的多种抗体的混合物，可达百万种以上，称为多克隆抗体。 特点：产量低、纯度低、特异性差、反应不够灵敏。,抗原不纯,抗体不纯,每一个B淋巴细胞只分泌一种化学性质单一，特异性强的抗体。如果利用单个B淋巴细胞进行无性繁殖（克隆），形成细胞群，这样的细胞群就有可能产生出化学性质单一、特异性强的抗体单克隆抗体。,问题：怎样获得化学性质单一、特异性强的抗体呢？,在体外培养的条件下，一个B淋巴细胞能无限增殖形成细胞群吗？ 什么样的细胞能够在体外无限增殖呢？,肿瘤细胞！,单克隆抗体的制备,单克隆抗体:单个细胞克隆产生的化学 性质单一特异性强的抗体,利用效
5、应B细胞产生抗体的功能 利用肿瘤细胞无限增殖的特性 利用细胞融合的技术将两种细胞融合获得杂交瘤细胞 利用动物细胞培养技术大量培养杂交瘤细胞,设计方案：,如何诱导融合？,加入聚乙二醇（PEG）,如何得到B淋巴细胞？,3.制备单克隆抗体的过程,细胞两两融合后，有哪些类型？,B-B B-瘤(杂交瘤细胞) 瘤-瘤,如何筛选出杂交瘤细胞？,首先用选择培养基筛选出杂交瘤细胞,细胞合成DNA有D和S两条途径，其中D途径能被氨基嘌呤阻断。 人淋巴细胞中有这两种DNA的合成途径，但一般不分裂增殖。 鼠骨髓瘤细胞中只有D途径，没有S途径，可是能不断分裂增殖。你想到筛选杂交瘤细胞的方案了么？,小资料：,在培养液中加
6、入氨基蝶呤，收集增殖细胞！加入氨基嘌呤后，使 D 合成途径阻断，仅有 D 合成途径的骨髓瘤细胞及其彼此融合的细胞就不能增殖，但人淋巴细胞和骨髓瘤细胞融合后的杂种细胞因为可以利用淋巴细胞中的 S 途径合成DNA而增殖。,阳性孔,方法抗原-抗体杂交法,在单克隆抗体制备过程中，两次筛选的原理和方法是不相同的。,如何得到大量的单克隆抗体？,体内培养 体外培养,单克隆抗体化学性质单一、特异性强,骨髓瘤细胞,免疫小鼠,（选择培养基）,（抗体检测）,单克隆抗体的制备,1、（只考虑两两融合）融合细胞几种类型？ 2、本过程中进行了两次筛选，目的分别是什 么？第1次筛选要淘汰哪些细胞？ 3、杂交瘤细胞有何特点？ 4、本过程利用的哪些技术？,思考以下问题：,2、单克隆抗体的优点,特异性强、灵敏度高,单克隆抗体,杂交细胞,杂交瘤细胞,骨髓瘤 细胞,特异性杂交瘤细胞,杂交瘤细胞系,提取,经过免疫的 B淋巴细胞,动物细胞融合技术,动物细胞培养技术,单克隆抗体的制备过程：,特点：既能产生专一抗体又能大量繁殖,特点：特异性强灵敏度高可大量制备,3、单克隆抗体的应用,（1）作为诊断试剂最广泛应用 准确、高效、简易、快速,（如同位素标记单克隆抗体，可诊断肿瘤、心血管畸形等）,（2）运载药物,生物导弹=单克隆抗体+药物，治疗肿瘤）,(“生物导弹” 单抗导向，药物为弹头),
