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1、薄层层析与柱层析 问题探讨 黄 松,薄层层析：固定相：硅胶（G,F）、氧化铝、纤维素、聚酰胺、硅藻土、葡聚糖凝胶。粘合剂：CMCNa等。添加剂：荧光指示剂、酸碱等。,点样量：15l（过多或太少）斑点大小：5mm左右（大小）,点样,方式：线性（上行、下行、水平等）、环形、多次等。影响因素：相对湿度（如何控制）、温度、溶剂蒸气（是否饱和）、展距等。,展开,展开剂： 溶剂的分类 溶剂一般分为6类： 第类为电子授受体溶剂：甲苯、苯、四氢呋喃、乙酸乙酯、丙酮、乙睛。 第类为质子给予体溶剂：异丙醇、正丁醇、无水乙醇、甲醇。 第类为强质子给予体溶剂：氯仿、冰醋酸、甲酸、水。,第类为质子受体溶剂：三乙胺、乙醚
2、。 第类为偶极作用力溶剂：1，2二氯乙烷、二氯甲烷。 第类为惰性溶剂（非极性溶剂）：环己烷、正己烷、四氯化碳。,展开剂的选择一般可以从电子授受体溶剂（）、质子授受体溶剂（、）、偶极作用力溶剂（）及溶剂极性调节溶剂（、）中分别选出一种构成四元系统。,展开剂中溶剂的作用 展开剂中比例较大的溶剂极性相对较小，起溶解物质和基本分离的作用，一般称为底剂。 展开剂中比例较小的溶剂，极性较大，对被分离的物质有较强的洗脱力，帮助化合物在薄层上移动，可以增大Rf值，但不能提高分辨率，称为极性调节剂。,展开剂中少量酸、碱，可抑制某些酸、碱性物质或盐类的解离而产生斑点拖尾，故称之为拖尾抑制剂。 展开剂中加入丙酮等中
3、等极性溶剂，可促使不相混合的溶剂混溶，并可以降低展开剂的粘性，加快展速。,选择展开剂的方法选择展开剂的原则为“相似相溶”原则,举例：以黄酮类化合物为例,A环和B环都是苯环结构，可以考虑选择苯及苯的衍生物；A环和B环上一般都连接有羟基，可以考虑选择无水乙醇、甲醇等极性较大的醇类；黄酮类化合物一般都呈酸性，故可以在展开剂中加入少量甲酸，可以消除极性大的成分的拖尾、防止极性小的成分斑点扩散；黄酮类化合物中一般都会有黄酮苷类成分，故可以在展开剂中加入少量水，可以防止斑点拖尾和扩散。,根据溶剂分类原则应选择甲苯乙酸乙酯无水乙醇甲酸四元系统的不同比例进行展开,实例：独脚金总黄酮薄层色谱,展开条件为：第一次
4、展开：甲苯氯仿乙酸乙酯无水乙醇水甲酸4：4：10：1.5：0.5：0.5；展距约9cm。在荧光下定位，第二次的展距应低于第一次展开时最顶端两个斑点0.5cm，然后第二次展开：乙酸乙酯无水乙醇水甲酸=6：1：0.5：0.5，展开后取出晾干，用浓度为5AlCl3显色，在日光下观察。,柱层析： 1、洗脱条件 2、伴样 3、装柱 4、洗脱,洗脱条件： 洗脱剂的确定（一般都由薄层条件来确定） 洗脱剂的选择 常压柱：洗脱条件与薄层条件相比 加压柱：洗脱条件如何确定,伴样： 样品量与硅胶量比 伴样方法,装柱： 干法 湿法 其他方法 柱径比（塔板数问题、空白硅胶量）,适用条件及优缺点,洗脱： 流速控制 收集量：影响每瓶收集量的因素,合并 重结晶（结晶条件）,单体化合物打谱前应准备的工作： 纯度检测（HPLC、UV） 熔点（可以初步确定纯度） 溶媒（氯仿、甲醇、二甲亚砜）,谢谢！,
