动物细胞工程ppt课件

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1、,专题2.2动物细胞工程,动物细胞培养,动物细胞融合,单克隆抗体制备,动物细胞核移植,动物细胞工程技术,动物细胞工程的基础,2.2.1动物细胞培养和核移植技术,动物细胞培养,（一）概念,是指从动物机体内取出相关的组织，将它分散成单个细胞，然后放在适宜的培养基中，让这些细胞生长和增殖。,（二）原理,细胞分裂增殖,（三）目的,获得大量细胞或细胞产物,（三）、过程,胚胎或幼龄动物,剪碎组织,原代细胞培养,细胞悬浮液,细胞贴壁:培养贴附性细胞时,细胞要能贴附于底物上才能生长繁殖.,细胞接触抑制,细胞在贴壁生长过程中，随着细胞分裂，数量不断增加，最后形成一个单层，此时细胞间相互接触，细胞分裂和生长停止，

2、数量不再增加。,有关概念,原代培养：从机体取出后立即培养的细胞为原代细胞。一般培养的第1代细胞与传10代以内的细胞称为原代细胞培养。 传代培养：将原代细胞从培养瓶中取出，配制成细胞悬浮液，分装到两个或两个以上的培养瓶中继续培养，称为传代培养。,一、动物细胞培养过程,胚胎或幼龄动物的组织器官,单个细胞,10代细胞,50代细胞,无限传代,剪碎,胰蛋白酶,因为它们具有很强的分生能力,动物细胞培养不能最终培养成生物体,接触抑制,胰蛋白酶,少数癌变,细胞悬液,贴壁生长,分瓶培养,思考题：,1、进行动物细胞培养时用胰蛋白酶分散细胞，说明细胞间的物质主要是什么成分？用胃蛋白酶行吗？,2、胰蛋白酶真的不会把细

3、胞消化掉吗？为什么？,蛋白质，不行，PH不合适。,会，注意控制时间,1、无菌、无毒的环境,保证细胞顺利的生长增殖,添加一定量的抗生素（保证无菌），定期更换培养液（保证无毒）,添加：糖（葡萄糖）、氨基酸、促生长因子、无机盐、微量元素、动物血清等。,（四）、动物细胞培养的条件,2、营养,3、温度和PH,培养室中控制,使之达到 36.5 0.5, 7.27.4,培养箱中提供O2和CO2（95%空气和5% CO2 ）,4、气体环境,获得细胞,细胞的全能性,细胞,植物体,培养结果,或细胞产物,快速繁殖、培育无病毒植株等,培养目的,葡萄糖、动物血清,蔗糖、植物激素,培养基特有成分,液体培养基,固体培养基,

4、培养基性质,细胞增殖,原理,动物细胞培养,植物组织培养,比较项目,植物细胞培养和动物细胞培养的比较,动物细胞培养技术的应用,1、获得细胞产物，如蛋白质生物制品病毒疫苗、干扰素、单克隆抗体等,3、获得细胞用于检测有毒物质,2、作为基因工程的受体细胞,4、用于生理、病理、药理等方面的研究,动物体细胞核移植技术和克隆动物,（一）、动物细胞核移植的概念：,动物核移植是将动物的一个细胞的细胞核,移入一个已经去掉细胞核的卵母细胞中.使其重组并发育成一个新的胚胎,这个新的胚胎最终发育为动物个体.,克隆动物：用核移植的方法得到的动物。,原理：动物细胞核的全能性,（二）、分类：,细胞分化程度低，恢复 全能性容易

5、,细胞分化程度高，恢复 全能性困难,去核卵细胞,供体 细胞,重组细胞,代孕母牛C,无性生殖,（三）、体细胞的核移植过程,思考题：,1、核移植所用受体细胞是什么？为什么？,2、用于核移植的供体细胞一般都选用传代10代以内的细胞，为什么？,卵母细胞，因为卵母细胞体积大，易操作；而且卵母细胞含有促使细胞核表达全能性的物质和营养,10代以内的细胞能保持正常的二倍体核型。,思考题：,3、体细胞核移植方法生成的克隆动物是对体细胞供体动物进行了100%的复制吗？为什么？,（1）生物性状受核基因和质基因的共同控制，线粒体中的部分DNA来自卵母细胞 （2）环境的影响,（四）、体细胞核移植技术的应用前景,1、在畜

6、牧业中可以加速家畜遗传改良的进程,2、保护濒危物种,3、生产医用蛋白质 及组织器官的移植的供体,（五）、体细胞核移植技术存在的问题,1、克隆动物基因组重新编程的机制尚不清楚。 2、克隆技术效率低，畸形率高、死亡率高、易出现早衰等问题。 3、生产克隆动物费用昂贵。,2、在动物细胞培养过程中遗传物质发生改变的细胞是 （ ） A获得不死性的细胞 B10代以内细胞 C原代细胞 D传代细胞,1、动物细胞工程技术的基础是 （ ） A.动物细胞融合 B.单克隆抗体 C.胚胎移植 D.动物细胞培养,A,D,课堂反馈练习,3、在动物细胞培养的有关叙述中正确的是：（ ） A、动物细胞培养的目的只是为了获得大量的细

7、胞 分泌蛋白 B、动物细胞培养前要用胰蛋白酶使细胞分散 C、细胞的癌变发生在原代培养向传代培养的过渡 过程中 D、培养至50代后传代细胞遗传物质没有发生改变,B,4、一般说来，动物细胞体外培养需要满足以下条件（ ）,无毒的环境 无菌的环境 培养基需要加入血清 温度与动物体温相似 需要O2，不需要CO2 CO2能调节培养液PH,A、 B、 C、 D、 ,D,5、动物细胞培养的特点 （ ） 细胞贴壁 有丝分裂 细胞分化 接触抑制 减数分裂 原代培养一般传110代 A、 B、 C、 D、,A,6、下图是动物细胞培养的基本过程示意图。请据此回答：（1）容器A中放置的是动物器官或组织。它一般取自_。 （

8、2）容器A中的动物器官或组织首先要进行的处理是 ，然后用 酶处理，这是为了使细胞分散开来，这样做的目的是 。,动物胚胎或幼龄动物,剪碎,胰蛋白,使细胞与培养液充分接触，便于培养,（3）培养首先在B瓶中进行，瓶中的培养基成分有 _等。在此瓶中培养一段时间后，有许多细胞衰老死亡，这是培养到第 代，到这时的培养称为_ 。 （4）为了把B瓶中的细胞分装到C瓶中，用处理，然后配置成 ，再分装。 ,动物血清,10,原代培养,胰蛋白酶,细胞悬浮液,复习回顾,1、动物细胞工程常用的技术手段有哪四种？其中哪个是其他动物细胞工程技术的基础？ 2、动物细胞培养的目的是？原理是？ 3、动物细胞培养的过程中，用的动物一

9、般是？为什么？ 4、动物细胞培养过程是怎样的？ 5、目前使用的或者冷冻保存的正常细胞通常为几代以内，为了保持什么？ 6、动物细胞培养的条件是？ 7、动物核移植的原理是？分为哪两类？ 8、体细胞核移植的过程是？受体细胞是？为什么？,动物细胞融合与单克隆抗体,一、动物细胞融合 （也称细胞杂交）是指两个或多个动物细胞结合形成一个细胞的过程。 融合后的细胞称为杂交细胞 二、方法：物理、化学、灭活的病毒,细胞A,细胞B,杂交细胞,灭活的病毒,物理法 化学法,原理：细胞膜的流动性,融合成功的标志：杂交细胞能进行有丝分裂,用灭活的病毒诱导动物细胞融合过程,动物细胞融合,植物体细胞杂交和动物细胞融合的比较,二

10、、单克隆抗体,什么是抗体？抗体是机体受抗原刺激后产生的、并能与该抗原发生特异性结合的具有免疫功能的球蛋白。效应B淋巴细胞产生抗体。,单克隆抗体制备过程,细胞融合、筛选,足够数量的、能产生特定抗体的细胞群,单克隆抗体,思考：,1、本过程利用了哪些动物细胞工程的技术？,动物细胞融合和动物细胞培养,2、为什么选用小鼠骨髓瘤细胞与B细胞融合？,这样融合成的杂交瘤细胞，继承了双亲细胞的遗传物质，不仅具有B细胞分泌抗体的能力，而且还有无限增殖的本领，因而可以获得大量单克隆抗体,单克隆抗体的应用,单克隆抗体灵敏度高，特异性强，并可大量制备 。,应用主要有：,1、临床诊断,2、作为载体，运载抗癌药物，形成“生

11、物导弹”治疗肿瘤,资料：目前世界各国已经研制出数以百计的单克隆抗体。许多缺乏良好诊断手段的传染病、免疫性疾病、血液病、内分泌疾病和遗传病，用单克隆抗体作为诊断手段，是一个必然趋势。另外，用单克隆抗体做体内诊断，借以鉴别和定位体内“病灶”也引起人们的注意，目前，主要用于肿瘤追踪及心肌梗塞的诊断。,下图为某同学根据杂交瘤技术的方法，设计的生产破伤风杆菌的实验方案,制备单克隆抗体,B细胞,抗体,细胞融合,灭活病毒,双亲细胞,分泌抗体,无限增殖,原代,传代,50,1.动物细胞工程技术的基础是：（ ）A动物细胞融合 B胚胎移植C动物细胞培养D核移植,在动物细胞融合和植物体细胞杂交的比较中，正确的是（ ）

12、A结果是相同的B杂种细胞的形成过程基本相同C操作过程中酶的作用相同D诱导融合的手段相同,. 单克隆抗体制备过程中，骨髓瘤细胞和B淋巴细胞 诱导融合后，要用特定培养基筛选出杂交瘤细胞， 在这种培养基上不能存活增殖的细胞是（ ）淋巴细胞 小鼠骨髓瘤细胞 B淋巴细胞自身融合细胞 小鼠骨髓瘤细胞自身融合细胞 杂交瘤细胞A B C D,C,(2006年北京卷1题）以下不能说明细胞全能性的 实验是 A.胡萝卜韧皮部细胞培育出植株 B.紫色糯性王米种子培育出植株 C.转入抗虫基因的棉花细胞培育出植株 D.番茄与马铃薯体细胞杂交后培育出植株,(2006年全国卷3题）下列关于动物细胞培养的叙述，正确的是A培养中

13、的人效应T细胞能产生单克隆抗体B培养中的人B细胞能够无限地增殖C人的成熟红细胞经过培养能形成细胞株D用胰蛋白酶处理肝组织可获得单个肝细胞,动物细胞工程技术的基础是 （ ） A.动物细胞融合 B.单克隆抗体 C.胚胎移植D.动物细胞培养,右图是某种淋巴细胞，膜外颗粒状物质为抗体。据图回 答： （1）这是 细胞，它是由 分化而来。 （2）抗体从开始合成到分泌出细胞，经过的细胞结构顺序是（填标号） 。抗体的分泌说明细胞的各种生物膜在结构上具有 。并以 的形式转变。,（4）抗体的化学本质是 ，它能与 发生特异性结合，发挥免疫效应。该过程属 于 免疫的 阶段。 （5）若该抗体是单克隆抗体，则该细胞名称为。在制备单克隆抗体的过程中，应用 的动物细胞工程的技术手段是 。,（3）在分泌抗体时要消耗由 提供的能量。,（1）效应B；B细胞或记忆性B细胞 （2）；一定的连续性；具膜小泡 （3）线粒体 （4）球蛋白；相应的抗原；体液；效应 （5）杂交瘤细胞；动物细胞融合、动物细胞培养,