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1、 颁发部门 接收部门细菌内毒素检验操作规程生效日期操作标准定人 制定日期文件编号 审核人 审核日期文件页数 共 3 页 批准人 批准日期分发部门 1 目的规范操作人员检查细菌内毒素的方法，确保检验数据的准确性。2 范围适用于本厂质监科化验室对注射用水的细菌内毒素检验。3 责任化验员有责任按本操作规程进行正确操作，并对检验结果负责。4 内容本法系利用鲎试剂与细菌内毒素产生凝集反应的机理，以判断供试品中细菌内毒素的限量是否符合规定的一种方法。器、涡混合器、注射器（、注射针（6 号、9 号） 、保鲜纸、试管（1075 、镊子（金属） 、金属盒。具除去外源性内毒素：将用具放入金属盒，在 250干烤 3
2、0 分钟或 180干烤 120 分钟。菌内毒素国家标准品：系自大肠杆菌提取精制而成，用于标定、复核、仲裁鲎试剂灵敏度和标定细菌内毒素工作标准品的效价。菌内毒素工作标准品：系以细菌内毒素国家标准品为基准标定其效价应不小于 2大于 50 细菌内毒素检查用水：系指与灵敏度为 更高灵敏度的鲎试剂在 371条件下 24 小时不产生凝集反应的灭菌注射用水。试剂：（=。试剂灵敏度复核试验 第 2 页/共 3 页鲎试剂灵敏度的标示值（，此处 =将细菌内毒素国家标准品用细菌内毒素检查用水溶解，在旋涡混合器混合 15 分钟，然后制备成合适的稀释浓度，1EU/稀释一步均应在旋涡混合器上混合 30 秒钟。按检查法项下
3、试验，每一浓度平行做 4 支，同时用细菌内毒素检查用水做 2 支阴性对照管，如最大浓度管均为阳性，最低浓度管均为阴性，阴性对照管均为阴性，按下式计算鲎试剂灵敏度的测定值 c。c=1(X/4)式中 X 为反应终点浓度的对数值(反应终点浓度是系列浓度递减的内毒素溶液中最后一个呈阳性结果的浓度。当 c 在 括 ，方可用于细菌内毒素检查，并以 为该批鲎试剂的灵敏度。每批新的鲎试剂在用于试验前都要进行灵敏度的复核。试品干扰试验按鲎试剂灵敏度复核试验项下，用细菌内毒素检查用水和供试品的最大有效稀释倍数（稀释液分别将同一支（瓶）细菌内毒素工作标准品制成含细菌内毒素工作标准品 种浓度的内毒素溶液。用细菌内毒素
4、检查用水和用供试品稀释液制成的每一浓度平行做 4 支，另取细菌内毒素检查用水和供试品稀释液各做 2 支阴性对照管。如最大浓度 均为阳性，最低浓度 均为阴性，阴性对照管均为阴性时，按下式计算用细菌内毒素检查用水制成的内毒素标准溶液的反应终点浓度的几何平均值（用供试品稀释液制成的内毒素溶液的反应终点浓度的几何平均值（。)式中 t 分别为细菌内毒素检查用水和供试品稀释液的内毒素溶液的反应终点浓度的对数值（。当 括 ，且当 括 ，则认为供试品在该浓度下不干扰试验，否则使用更灵敏的鲎试剂，对供试品进行更大倍数稀释或采用其他适合排除干扰作用的方法。当鲎试剂、供试品的来源、供试品的配方或生产工艺有变化时，须
5、重新进行干扰试验。供试品的最大有效稀释倍数（ 按下式计算： L/式中 L 为供试品的细菌内毒素限值。查法第 3 页/共 3 页取装有 鲎试剂溶液原安瓿 5 支，其中 2 支加入 最大有效稀释倍数稀释的供试品溶液作为供试品管，1 支加入 细菌内毒素检查用水将细菌内毒素工作标准品制成的 度的内毒素溶液作为阳性对照管，1 支加入 菌内毒素检查用水作为阴性对照管，1 支加入 试品阳性对照溶液用被测供试品溶液将同一支（瓶）度的内毒素溶液作为供试品阳性对照管。将试管中溶液轻轻混匀后，用保鲜纸封闭管口，垂直放入 371恒温水浴中，保温 60 分钟2 分钟。保温和拿取过程中应避免受到振动造成假阴性结果。果判断
6、将试管从恒温水浴中轻轻取出，缓缓倒转 180。 时，管内凝胶不变形，不从管壁滑脱者为阳性，记录为（+） ；凝胶不能保持完整并从管壁滑脱者为阴性，记录为（） 。供试品管 2 支均为（） ，应认为符合规定；如 2 支均为（+） ，应认为不符合规定；如 2 支中 1 支为（+） ，1 支为（） ，按上述方法另取 4 支供试品管复试，4 支中 1 支为（+） ，即认为不符合规定。阳性对照管为（）或供试品阳性对照管为（）或阴性对照管为（+） ，试验无效。5 训对象：化验员。训时间：二小时。6 记录记录名称 保存部门 保存时间细菌内毒素检验记录 质监科 药品有效期后一年 细菌内毒素检验记录检验日期： 年 月 日品 名 批 号鲎试剂批号 生产厂家灵敏度标示值 工作标准品效价稀释步骤：取 样 量 试 验 温 度 保 温 时 间 结 果供 试 品供 试 品阴 性 对 照阳 性 对 照供试品阳性对照判 定备 注复核人： 检验人：
