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1、长 江 大 学毕业论文开题报告毕业论文开题报告题 目 名 称：湖北海棠叶中黄酮类化合物提取工艺及还原能力的研究学院（系） ：生命科学学院专 业 班 级：食品科学与工程 XXXX 班学 生 姓 名：XXX指 导 教 师：XXX辅 导 教 师：开题报告日期：XXXX 年 XX 月 XX 日湖北海棠叶中黄酮类化合物提取工艺及还原能力的研究湖北海棠叶中黄酮类化合物提取工艺及还原能力的研究学生：，生命科学学院指导教师：，生命科学学院1 题目来源题目来源结合生产实际。2 研究目的和意义研究目的和意义湖北海棠 Malus hupehensis(pamp.)Rehd.产于陕西、甘肃、山西、河南、山东及长江流域
2、各地。据记载，其根治筋骨扭伤、抗菌消炎、耐缺氧、抗疲劳、降血糖、降血脂、增强体质，可入药治胃病，嫩叶可代茶，俗称海棠茶，为民间常用饮品之一。黄酮类化合物是湖北海棠叶中的主要活性物质，是一种天然的抗氧化剂，具有很高的药用价值，如抗癌、抗肿瘤、抗心脑血管疾病、消炎镇痛、免疫调节、降血糖、治疗骨质疏松、抑菌抗病毒、抗氧化、抗衰老、抗辐射等作用。黄酮类化合物还在食品、化妆品、药品等行业中广泛应用。黄酮类化合物的抗氧化作用，主要表现为减少自由基的产生和清除自由基两个方面。一般情况下，还原能力与抗氧化能力呈正相关。测定物质的还原能力可以反映其抗氧化活性。自由基，从化学结构上看是指含未配对电子的基团、原子或
3、分子。大量研究表明，由于自由基具有高度的化学活性，一方面它是机体有效的防御系统的一部分，在正常的情况下， 体内自由基处于不断产生与清除的动态平衡之中，并在代谢中发挥着重要作用，参与一些酶和前列腺素的合成，增强白细胞吞噬活性，提高杀菌效果等。另一方面它又是造成许多疾病的原因， 当人体内的自由基产生过多或清除过慢，就会攻击各种细胞、 器官并使之受到损伤， 加速机体的衰老过程并诱发各种疾病。 在众多自由基中，OH是最活泼的，是对机体危害最大的自由基，它可和活细胞中的任何分子发生反应而造成损伤，而且反应速度极快，被破坏的分子遍及糖类、氨基酸、磷脂、核苷和有机酸等。 O2的毒性是机体发生氧中毒的主要原因
4、， 由它引起的损伤表现在使核酸链断裂、多糖解聚及不饱和脂肪酸过氧化作用，进而造成膜损伤、线粒体氧化磷酸化作用的改变及其他一系列的变化。本实验的目的是研究超声波法辅助提取湖北海棠叶中黄酮类化合物的最佳工艺及提取液的还原能力， 加深人们对湖北海棠叶保健价值的认识，为开发湖北海棠叶黄酮类药品、食品以及湖北海棠叶作为天然抗氧化剂的开发利用提供依据。3 阅读的主要参考文献及资料名称阅读的主要参考文献及资料名称1 陈丛瑾，黄克瀛，李德良，等植物中黄酮类化合物的提取方法研究概况J生物质化学工程，2007，41(5)：42-452 郭雪峰，岳永德黄酮类化合物的提取、分离纯化和含量测定方法的研究进展J安徽农业科
5、学，2007，35(26)：8083-80863 王长远，吴洪奎，于长青，等黄酮类化合物研究进展J黑龙江八一农垦大学学报，2007，19(2)：75-784 汪植，杨远兵湖北海棠饮料的质量研究J食品研究与开发，2002，23(2)：59-615 屈克义，胡汉环，杜远义，等湖北海棠叶煎液药效学实验研究J时珍国医国药，2000，11(2)：107-1086 刘良忠，丁士勇，汤丽娜湖北海棠叶茶饮料及其稳定性研究J湖北农学院学报，2004，11：326-3277 张匀，栾雨时，张华微甘薯叶中黄酮类化合物的提取工艺研究J食品研究与开发，2006，27(6)：92-948 赵喜红，何小维，罗志刚，等柿叶黄
6、酮类物质的乙醇提取工艺及其抗氧化性的研究J食品研究与开发，2007，128(8)：49-539 冷桂华，黄宏伟，叶文峰，等枇杷叶中黄酮类化合物提取方法的研究J.安徽农业科学，2007，35(25)：7763-776410 李彩侠，张彬，吴亚卿荷叶中黄酮类化合物的提取工艺研究J上海理工大学学报，2006，28(1)：5-811 吴桂霞，王志杰，杨秀芳菊花中黄酮类化合物超声强化提取工艺参数的研究J陕西科技大学学报，2007，25：56-5812 杨云，冯卫生中药化学成分提取分离手册M北京：中国中医药出版社，1998：31813 傅丰永，刘永隆，尚天明黄酮类化合物在植物界的分布及药用价值和新药的寻找
7、J植物学报，1980，22(1)：87-9214 Jia zhishen, Tang mengcheng, Wu Jianming The determination of flavonoid contents in mulberry andtheir scavenging effects on superoxide radicals.in mulberry and their scavenging effects on superoxideradicalsJ.FoodChemistry,1999,64(4):55515 杨永利，郭守军，马瑞君，等超声波辅助提取坛紫菜多糖的工艺优化J食品研究与
8、开发，2007，128(8)：20-2316 朱平华银杏叶中黄酮类化合物的提取工艺研究J化工生产与技术，2006，13(6)：25-2717 于智峰，付英娟，王敏，等苦荞黄酮提取物体外清除自由基活性的研究J食品科技，2007，3：126-12918 丁利君， 周国栋 莲子水溶性糖的提取及其对自由基清除能力的研究J 食品科学， 2002， 23(8)：252-25419 Habtemariam SFlavonoids as inhibitors or enhancers of the cytotoxi city of tum or Necris is factwrain L 929 tum or
9、 cellsJJNatProd，1997，60(8)：775-77820 柳红，张静不同南瓜多糖体外清除羟基自由基作用的研究J武汉植物学研究，2007，25(4)：356-35921 胡丰林， 陆瑞利， 许成林 一些野生果树鲜叶提取物清除自由基活性研究J 经济林研究， 2003，21(2)，12-1522 陈小萍，张卫明，史劲松，等茶树花黄酮的提取及对羟自由基的清除效果J南京师大学报(自然科学版)，2007，30(2)：93-9723 唐瑛， 罗祖友， 严奉伟 藤茶总黄酮的体外抗氧化作用研究J 中国药师， 2006， 9(8)： 716-7184 国内外现状和发展趋势与研究的主攻方向国内外现状
10、和发展趋势与研究的主攻方向4.1 国内外现状和发展趋势国内外现状和发展趋势黄酮类化合物是在植物中分布非常广泛的一类天然产物，其对植物的生长、发育、开花、 结果及防菌防病等方面起着重要的作用。 同时， 黄酮类化合物生理活性多种多样，对人体有非常重要的保健作用， 因此引起了人们的广泛研究。近十年来黄酮类化合物的研究倾向于其药用价值的开发， 更多地涉及提取工艺的应用研究，从传统的提取方法如热水提取、有机溶剂提取、碱性水或碱性稀醇提取、系统溶剂提取法等，发展到新型的提取技术如超声波提取法、 微波提取法、 酶解法、 超临界流体萃取法、 半仿生提取法等。对黄酮类化合物的结构、 功能等也有了深刻的了解，黄酮
11、类化合物泛指两个苯环通过中央三碳链相互联结而成的一系列 C6-C3-C6化合物，主要是指以 2-苯基色原酮为母核的一类化合物，是具有酚羟基的一类还原性化合物。在复杂反应体系中，由于其自身被氧化而具有清除自由基和抗氧化作用。黄酮及其某些衍生物具有广泛的药理学特性，包括抗炎、抗诱变、抗心肌缺血、抗肿瘤形成与生长等活性。现在已应用各种高新技术从各种植物中分离、提取了大量的黄酮类化合物。有关文献报道了从竹叶、银杏叶、菊花、苦荞等中提取黄酮类化合物，以及这些提取物抗氧化作用的研究情况。但从湖北海棠叶中提取黄酮类化合物还未见报道。近几年来，科学家对黄酮进行了广泛而深入的研究， 发现了黄酮不少令人感兴趣的新
12、用途，黄酮类天然产物是近年来天然药物和人类保健产品研究开发的热点。 从植物中提取具有生理活性的黄酮作为抗氧化剂、天然药物、保健品和化妆品等行业的原料，已日益引起重视，其应用前景无限广阔。4.2 研究的主攻方向研究的主攻方向本实验采用新型技术超声波辅助乙醇提取湖北海棠叶中的黄酮类化合物， 确定提取的最佳工艺参数，并研究提取液的还原能力和自由基清除能力。5 主要研究内容、需重点研究的关键问题及解决思路主要研究内容、需重点研究的关键问题及解决思路5.1 主要研究内容主要研究内容采用超声波法提取湖北海棠叶中的黄酮类化合物， 并对影响其提取的因素提取温度，超声波处理时间，超声波功率，料液比进行单因素实验
13、和正交实验，确定最佳的提取工艺，并参考 Oyaizu 方法，Fenton 反应及邻苯三酚自氧化，分别测定湖北海棠叶中黄酮类化合物的还原能力和清除自由基的能力。5.1.1 乙醇提取湖北海棠叶中的黄酮乙醇提取湖北海棠叶中的黄酮将粉碎好的海棠叶在乙醇浓度 50%，料液比 1:20，水浴温度 90条件下提取 2 h，计算黄酮提取率。5.1.2 超声波提取湖北海棠叶中黄酮化合物的工艺超声波提取湖北海棠叶中黄酮化合物的工艺湖北海棠叶洗净干燥粉碎乙醇浸泡超声波提取过滤旋转蒸发解吸大孔树脂吸附解吸定容测吸光度%100总黄酮质量）=样品黄（质量酮提取率5.1.3 超声波提取温度对黄酮提取率的影响超声波提取温度对
14、黄酮提取率的影响称取相同质量的湖北海棠叶 5 份，分别在 40，50，60，70，80，料液比 1:20，超声波功率 300 W 条件下提取 30 min。5.1.4 超声波处理时间对黄酮提取率的影响超声波处理时间对黄酮提取率的影响称取相同质量的湖北海棠叶 5 份，在合适温度（5.1.3 中得出） ，料液比 1:20，超声波功率 300 W 的条件下分别提取 10 min，15 min，30 min，45 min，60 min。5.1.5 超声波功率对黄酮提取率的影响超声波功率对黄酮提取率的影响称取相同质量的湖北海棠叶 5 份，分别用超声波功率 100 W，200 W，300 W，400W，5
15、00 W，在合适温度（5.1.3 中得出） ，合适提取时间（5.1.4 中得出） ，料液比 1:20条件下提取。5.1.6 料液比对黄酮提取率的影响料液比对黄酮提取率的影响称取相同质量的湖北海棠叶 5 份，分别加入 10 mL，20 mL，30 mL，40 mL，50 mL浓度为 60%的乙醇溶液浸泡，在合适温度（5.1.3 中得出） ，合适超声波功率（5.1.5 中得出）下提取合适的时间（5.1.4 中得出） 。5.1.7 超声波提取的最佳工艺确定超声波提取的最佳工艺确定以超声波提取温度、超声波处理时间、超声波功率、料液比 4 个因素进行 L9(34)正交实验（水平由单因素实验得出） ，确定
16、最佳提取工艺参数。5.1.8 提取物还原能力的测定提取物还原能力的测定参考 Oyaizu 方法，取不同浓度的提取液，加入 0.2 mol/L、pH 6.6 磷酸钠缓冲溶液2.5 mL，1%铁氰化钾 2.5 mL，50水浴 20 min 后急速冷却，加入 10% 三氯乙酸溶液2.5 mL， 于 3000 r/min 离心 10 min， 取上清液 5 mL， 加蒸馏水 4 mL， 及 0.1% FeCl31 mL，混匀后 10 min 于 700 nm 处测定吸光值，吸光值越大则还原能力越强。用蒸馏水作为无还原能力的样品对照，VC和 VE作为有还原能力的样品对照。5.1.9 提取物对自由基清除效果的测定提取物对自由
