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1、疯牛病的元凶,朊病毒,朊病毒基本性质,朊病毒的英文名称是prion,是传染性蛋白颗粒(proteinaceous infection particle)的缩写,其实质是一种具有感染性和自我复制能力的无免疫性疏水蛋白因子,可以引起同种或异种蛋白质构象改变而致病或功能改变。 朊病毒的结构较病毒更为简单,只含有蛋白质,不含任何种类的核酸。 朊病毒的寄主主要有哺乳动物和真菌两大类。 朊病毒其实并非真正的病毒。,朊病毒复制及性质,基于其结构差别,朊病毒的复制方式与病毒也不一样,朊病毒蛋白是PrP-PrP的“自他复制”。 从性质方面讲,朊病毒没有免疫原性,而几乎所有病毒都能激发免疫反应;朊病毒具有很强的热
2、稳定性,在90下仍可保持30 nfin不失活,而病毒在高温下失活;朊病毒抗辐射、抗水解、对蛋白质变性剂很敏感。 凡能使蛋白质消化、变性、修饰而失活的方法,均可能使朊病毒失活;凡能作用于核酸并使之失活的方法,均不能导致朊病毒失活。,朊病毒的结构,正常人和动物细胞中朊蛋白称为PrPC,其分子量为3335KD,致病性朊病毒蛋白为称PrPSC,PrP2730是PrPSC部分酶解后除去N端66个氨基酸形成的。PrPC和PrPSC两者是由同一基因PRNP编码的,其氨基酸序列完全一致,质谱和气相测序以及别的生化研究发现共价键也无变化,两者是异构体,本质差别在于它们构象上的差异,PrPC的a一螺旋为42,B一
3、折叠仅为3,而PrPSC的a一螺旋为30,B一折叠反而高达43。PrPSC是由于PrPC发生蛋白质错误折叠,一些a一螺旋变构为B一折叠,三维构象发生变化而产生的,其形成发生在翻译后的加工过程。,下图为朊病毒的结构,朊病毒的危害,朊病毒病可以是遗传性的,也可以是传染性的。朊病毒的传播途径包括,食用动物肉骨粉饲科、牛骨粉汤;医源性感染,如使用脑垂体生长激素、促性腺激素和硬脑膜移植、角膜移植、输血等。 由朊病毒引起的病统称朊病毒病或传染性海绵脑病,它们都为致死性中枢神经系统的慢性退化性脑病,感染朊病毒后有超长的潜伏期,平均20年,最长可达到50年,发病前无法检测和诊断。,传染性海绵脑病,其病理学的特
4、点是淀粉样斑沉积,大脑皮层的神经元细胞退化、丢失,空泡变性、死亡、消失,最终被空泡和星状细胞取代,因而造成海绵状态一大脑皮层(灰质)变薄而白质相对明显,即海绵脑病。 患这种病的病人全部都伴有痴呆、共济失调、震颤等症状。目前发现的人和动物因感染朊病毒所致的疾病包括:震颤病或称库鲁(Kuru)、克雅氏病(CJD)或称为早老性痴呆、吉斯特曼斯召斯列综合症、致死性家族失眠症、绵羊瘙痒症、山羊瘙痒症、大耳鹿慢性消耗病(CWD)、牛海绵脑病(BSE)疯牛病、猫海绵脑病(FSE)、传染性雪貂白质脑病rrME)。,疯牛病(BSE),BSE的病程一般为1490天,潜伏期长达46年。这种病多发生在4岁左右的成年牛
5、身上。其症状不尽相同,多数病牛中枢神经系统出现变化,行为反常,烦躁不安,对声音和触摸,尤其是对头部触摸过分敏感,步态不稳,经常乱踢以至摔倒、抽搐。发病初期无上述症状,后期出现强直性痉挛,粪便坚硬,两耳对称性活动困难,心搏缓慢(平均50次/分),呼吸频率增快,体重下降,极度消瘦,以至死亡。,朊病毒检测方法,1、动物接种试验 用建立试验动物感染模型来判断生物体是否感染朊病毒以及发病特点的方法,是早期研究朊病毒传染性的主要试验方法,也是研究朊病毒不可或缺的重要环节。该方法敏感度较高,但是费时费力,且滴定误差较大。 2、组织病理学检测方法 组织病理学检测方法主要是通过检测羊痒病相关纤(SAF)和神经元
6、空泡化变性来诊断朊病毒的一种方法,也是检测朊病毒的“金标准”方法之一。,朊病毒检测方法,3、免疫学检测方法 免疫组织化学方法:特异性高、敏感性强,该方法已成为检测朊病毒“金标准”方法之一 组织印迹法:灵敏度高,特异性强,而且大大简化了操作程序,对朊病毒的检测更加快速、简单,已被广泛应用于朊病毒的研究。 免疫印迹法:是目前OIE公认的用于确诊疯牛病的方法之一。该方法具有特异性强、敏感性高、所用材料少的特点。 斑点印迹法:其灵敏度较低,但是操作简单,而且对仪器设备要求低,适合大批量样本的筛查。 酶联免疫吸附试验法:具有快速、简便的特点,并且该法可定量,适合大批量样本普查筛选工作。,另外,检测方法还
7、有:,4、蛋白质错误折叠循环扩增 5、毛细管电泳法 6 、Protein A磁珠检测朊病毒 7、双色强荧光目标扫描法 8、红细胞分化相关因子水平检测方法,朊病毒病治疗的思路,朊病毒在机体内复制的分子基础是PrP6与PrP&间构象转化,故而阻断PrPc向着PrP转化是朊病毒病治疗的一个切入点。此外,朊病毒病主要特征是朊病毒在中枢神经系统聚集,引起患病个体脑组织的病理变化,凶此,减少PrP&的蓄积也是治疗过程中经常考虑到的另外一个方面。,朊病毒病治疗的研究进展,1、化学治疗 常常使用一些具有抗朊病毒作用的化合物来治疗。然而,这些物质在体外培养接种朊病毒的细胞模型中有效,有的且对动物模型有毒性,或在
8、体内治疗效率极低,甚至无效。 2 、LRPLR受体特异性抗体治疗 近年来,朊蛋白37一kDa67一kDa层粘连蛋白受体及其前体(LRPLR)备受关注,体外证明该受体是朊病毒分子在细胞内复制和聚集所必需的蛋白。可利用LRPLR的特异性抗体与LRPLR蛋白特异性结合可以抑制或者阻断朊病毒分子在细胞内的聚集。,朊病毒病治疗的研究进展,3、 RNA干扰 RNA干扰是翻译后修饰水平上沉默内源性基因最有力的技术。目前已成为神经类疾病极有效的治疗方法。 4、免疫治疗 有研究发现,PrP抗体在体外培养的细胞模型和动物模型体内都可以降低朊病毒的感染性。PrP抗体以及重组的抗原结合片段(antigen-binding fragment,Fab)可以抑制朊病毒在ScN2a细胞内的复制和增殖。,参考文献 生物学教学-病毒、朊病毒、类病毒辨析2012,37(8)高敏, 李高峰 朊病毒的研究进展,谭皓文,科技风2010(24) 朊病毒检测方法综述,鲁云,李滋薇。杨利峰,赵德明,中国畜牧兽医2011,38(4) 朊病毒病治疗的研究进展张珠明,汪仁莉,赵德明,中国兽医杂志2012,48(3),