《茶叶中668种农药和化学污染物多组分多类别残留GC-MS,GC-MSMS和LC-MSMS高通量分析方法—国际AOAC协同研究实施方案》由会员分享，可在线阅读，更多相关《茶叶中668种农药和化学污染物多组分多类别残留GC-MS,GC-MSMS和LC-MSMS高通量分析方法—国际AOAC协同研究实施方案（28页珍藏版）》请在金锄头文库上搜索。
1、1,茶叶中668种农药和化学污染物多组分多类别残留 GC-MS,GC-MS/MS和LC-MS/MS高通量分析方法 国际AOAC协同研究实施方案（初稿）,国际AOAC优先研究项目(2010),AOAC Study Director 庞国芳 中国检验检疫科学研究院 Email:,2,1. 目的和意义,世界各国食用农产品中农药残留限量标准越设越多，越设越严。,世界经济一体化步伐的加快，世界各国食品安全战略地位的确立和国际贸易农药残留限量门槛的高筑，都呼唤高通量残留分析技术。,各国农药最高残留限量标准数量对比(2010年数据),文献来源：http:/ 茶叶中农药残留限量国际贸易门槛高筑。,目前世界17
2、个国家和国际组织制订了茶叶中800余项农药残留限量标准MRL：,欧盟、德国、荷兰、瑞士、匈牙利、以色列、意大利、CAC、中国、日本、 中国台湾、韩国、美国、澳大利亚、印度、肯尼亚、南非（截至2006年）。,欧盟：http:/ec.europa.eu/sanco_pesticides/public/index.cfm 日本：http:/www.m5.ws001.squarestart.ne.jp/foundation/search.html CAC：http:/ 中国：GB 2763-2005 美国、德国 ：安徽农业大学博士论文 吴雪原 茶叶中农药的最大残留限量及风险评估,3,本方法适用于绿茶、
3、红茶、普洱茶、乌龙茶中668种农药和化学污染物残留的GC-MS, GC-MS-MS和LC-MS-MS定性定量测定。GC-MS测定的490种农药和化学污染物的方法检出限(LOD)范围为1.0-500 g/kg，LC-MS/MS测定的448种农药和化学污染物的方法检出限(LOD)范围为0.03-4820g/kg。对于LOD100g/kg的农药品种，GC-MS法有482种，占所测农药的98，LC-MS/MS法有417种，占所测农药的93；对于LOD10g/kg的农药品种，GC-MS法有264种，占所测农药的54，LC-MS/MS法有325种，占所测农药的73。对于GC-MS和LC-MS/MS均可测定
4、的270种农药，对于LOD100g/kg的农药品种，GC-MS法有264种，占所测农药的98，LC-MS/MS法有247种，占所测农药的91；而对于LOD10g/kg的农药品种，GC-MS法有133种，占所测农药的49，LC-MS/MS法有200种，占所测农药的74。,2. 方法应用范围,GC-MS & LC-MS-MS 测定的农药品种分布,4,3.分析方法流程,LC-MS-MS,GC-MS-MS,GC-MS-SIM,Centrifugalize,Concentration,Homogenize,Sampler vial,Clean-up,Concentration Concentration
5、,Evaporate with nitrogen,Determine,13500r/min for 1min; 4200r/min for 5min; Concentration to ca 1mL at 40; Natural gravity elution for Cleanert TPT; Concentration to ca 0.5mL at 40 ; Evaporate to dryness with nitrogen gas at 35 Filter through 0.2m membrane.,The key control points,5,3. GC-MS(GC-MS/MS
6、)&LC-MS/MS 操作程序,Study Director郑重提醒：国际协同研究是不同国家有关实验室参加的统一标准化行动，实验的每一步骤包括任一种试剂材料，未经Study Director同意，都不允许改变或更换。这是志愿参加者必须遵守的规则。,5g tea sample,Added 15 mL acetonitrile,Add IS Heptachlor epoxide for GC/MS-SIM, GC/MS/MS or Chlorpyrifos-methyl for LC-MS/MS. Evaporate to dryness with nitrogen at 35,Cleanert
7、TPT Cartridge(2g,12mL) or Envi-Carb/PSA(0.5g/0.5g,6mL) for clean up. Elute with 25 mL acetonitrile+toluene(3+1), concentrate about 0.5 mL,Make up to 1.5 mL with hexane,Make up to 1.5 mL with acetonitrile+water(3+2),GC/MS Determination (490 Varieties) GB/T 23204-2008,LC-MS/MS Determination (448 Varie
8、ties) GB/T 23205-2008,Homogenize at 13500r/min for 1min, and centrifuged at 4200r/min for 5 min before the supernatants are taken, while the dregs are re-extracted and the extracts are combined and then concentrate about 1 mL,6,4. “缩身的”国际协同研究方案,如果组织数百种农药的国际AOAC协同研究会给参加者带来资源、时间和人员不可想象的困难，因此，国际AOAC提出了
9、一个“缩身”的国际协同研究方案，选择两种茶叶，GC-MS(GC-MS/MS） and LC-MS/MS 两种方法，各检测30种农药，共计60种农药参加协同研究。,* Indicates the pesticides to be determined by both GC-MS (GC-MS/MS) and LC-MS/MS,4.1 GC-MS(GC-MS/MS)和LC-MS/MS检测的30种农药,GC-MS(GC-MS/MS)检测的30种农药类别,LC-MS/MS检测的30种农药类别,7,4. “缩身的”国际协同研究方案,Study Director 提供的每个样品仅够一次实验，也就是说参加的
10、实验室对每个样品仅有一次实验机会，必须做到万无一失才能成功！因此，再重复强调务必仔细认真做好这项协同研究的每一步实验。这16个正式协同研究样品的组配如下：,*这里的样品编号，只代表协同研究方案的设计思路，不代表以后寄给参加者的实际样品代号。,每个参加的实验室共检测16个Collaborative Study 样品,30种目标农药浓度范围10ug/kg-2.0mg/kg(1MRL-5MRL). 添加样品和陈化样品都是按Youden Pair原则设计的，一对两个样品，目标农药浓度相差约为5。,8,5. 国际AOAC协同研究流程,Step-I,Step-II,Step-III,Step-IV,Stu
11、dy Director 寄送实验材料, 标 准 储 备 溶 液, 添 加 溶 液, 空 白 样 品, 陈 化 样 品,收到后放冰箱4保存,Collaborators 提交研究结果, 仪器分析参数, 添加样品结果, 陈化样品结果,从收到样品算起80天内完成,Step II-III最好连贯进行,（考核合格实验室参加）,原始记录和质谱图与Excel表一起提交,Excel Worksheet,I 实习阶段,II 考核阶段,III 正式协同研究阶段,添加样品10个,陈化样品6个,绿茶 样品3个,乌龙茶 样品3个,绿茶 样品5个,乌龙茶 样品5个,添加 样品3个,陈化 样品3个,考核样品6个,回收率70-
12、120， RSD15，做考核样品,Study Director 提供一瓶 已知浓度的添加溶液,9,Step-I Study Director给参加实验室寄送的实验材料,1)30种农药混合标准储备溶液：2支安瓿瓶（1.0 mL2支，含备用1支），供建立至少5点基质匹配内标校准曲线。 2)内标储备溶液：2支安瓿瓶（1.0 mL2支，含备用1支）。 3)添加溶液：10支安瓿瓶（0.5 mL10支），供制备添加样品。 4)茶叶空白样品：10袋（5.0g 10），No.01-No.05为绿茶， No.06-No.10为乌龙茶，用于制备添加样品。 5)茶叶陈化样品：6袋（5.0g 6），No.11-No.
13、13为绿茶， No.14-No.16为乌龙茶。 6)绿茶和乌龙茶空白样品：各1瓶（200g 2），供制备基质匹配空白样品溶液。,(1)For Pre-collaborative study,1) 30种农药混合标准储备溶液：2支安瓿瓶（1.0 mL 2支，含备用1支）。 2)内标储备溶液：2支安瓿瓶（1.0 mL 2支，含备用1支）。 3) 绿茶和乌龙茶空白样品：各1瓶（200g 2）。 4)考核样品： 添加溶液：3支安瓿瓶(0.5 mL3),供制备考核样品； 绿茶空白样品：3袋(5.0g 3 ) ,供制备考核样品 ； 乌龙茶陈化样品：3袋（5.0g 3）。,(2)For Collaborat
14、ive study,(3)质量控制质量控制标准储备溶液：2支安瓿瓶（1.0mL 2支，含备用1支）。用于检查仪器的灵敏度和稳定性。,10,Step-II 预协同研究的重要意义,这个课题研究的基质复杂，技术含量高，难度比较大，预研究的目的AOAC Sr. Director, Stakeholder Communications Krystyna McIver 博士做了精辟解释：“pre-collaborative study by the participating laboratories to ensure the laboratories are qualified to run the
15、method”。,Step-II Pre-collaborative study,Study Director再次提醒每位参加者，16个协同研究样品，每个样品，每个参加者只有一次实验机会，成败一锤定音。但Study Director提供给每位参加者的实习样品，却足够你通过充分实习，达到熟练掌握这项技术关键控制点的目的，希望你十分珍惜这个实习机会。,11,Step-II 实习阶段,Study Director提醒：实习要达到的技术水平，应该是稳定的，反复实验都能重现的，而不是偶然一两次能达到。偶然1-2次符合要求，说明还没掌握这项技术的核心和关键，建议多实验几次。这几项指标关系到你检测考核样品是
16、否能过关，更关系到协同研究的16个样品的测定结果是否准确。所以通过实习达到考核指标至关重要。,Step-II Pre-collaborative study,这项协同研究用基质匹配内标校准曲线定量 制备绿茶和乌龙茶空白样品溶液各5份，分别加入20,50,100,200和300 uL混合标准溶液，并加入40uL 环氧七氯内标工作溶液(GC-MS 和 GC-MS/MS)或40uL甲基毒死蜱内标工作溶液(LC-MS/MS) 混匀。 用氮气吹干，用正己烷(GC-MS-SIM or GC-MS-MS)或乙腈:甲苯(3:2) (LC-MS/MS)定容1.5 mL，配成5点基质匹配内标校准混合溶液，并建立5点基质匹配内标校准曲线。 添加回收率练习 用Study Director提供的茶叶空白样品和农药混合标准工作溶液进行1MRL、5MRL水平的添加回收率实验。 自己实习要达到的技术水平：30种农药5点基质匹配内标校准曲线线性相关系数R20.995，添加回收率70-120，RSD15（n=5）。,
