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1、输血前相容性试验,第一节 重视血液标本,一、血标本采集要求 （一）输血申请单的正确书写 必须包含足够的信息以识别受血者身份的唯一性， 大部分医疗机构都是使用受血者姓名及其身份证号码 （或住院号）。当输血科（血库）的技术人员在配血过程中遇到问 题时，受血者的诊断、输血史及妊娠史是非常有意义的。 凡资料不全的输血申请单，尤其是缺乏输血史、妊娠史 和无主治医师签名的，要退回临床科室补上，不得迁就。,（二）受血者身份识别1、采用标有受血者全名和住院号的腕带来识别受血者。2、使用更安全的条形码系统对受血者身份进行识别。 在床边完成采血和粘贴标签后，可用一个便携式的条 形码扫描仪进行扫描，以确认血标本试管
2、上的标签信息与 受血者腕带上的身份信息是否相符。3、使用其他标识方式。受血者无法戴腕带，比如大面积烧伤的患者、早产儿 以及某些外科手术中的患者。有些医疗机构就允许将患者 的身份标识符放在患者的踝关节或者前额，门诊患者除了 使用腕带之外，也可以用驾驶证或其他含本人相片的身份 信息来识别。,（三）血标本类型的选择 1选择血清标本的情况 (1)试管法：血浆标本中的纤维蛋白小凝块可干扰检测结果，而血清标本可避免。 (2)存在需激活补体才能反应的抗体：血浆标本因为某些抗凝剂能螯合钙离子及镁离子，阻断补体激活途径。 2选择血浆标本的情况 (1)凝血时间延长或经过肝素化的血液：这种血标本可能发生不完全凝血，
3、如采用其血清进行检测，其结果可能不准确。因此，对于这种情况，可采集抗凝血标本分离血浆进行检测。如要使用其血清，可在这些血标本中加入凝血酶或加硫酸鱼精蛋白中和肝素。 (2)采用微柱凝胶技术：应选择血浆标本进行检测。,（四）血标本采集部位的选择 1、不能在输液部位的上段（近心端）静脉穿刺采血， 但可以在下段（远心端）采血，最好是在另一个肢体采 血，以防止标本稀释。必须在输液血管内采血，应去掉 最初的510ml血液。 2、新生儿应取其脐带的胎盘血；婴幼儿采颈静脉血； 重症休克患者可以采集股静脉血或在深静脉插管部位采 血。 （五）血标本的质量要求 1血标本标识的要求 (1)血标本标识与患者身份的一致性
4、,(2)血标本采集者的标识：采血者最好在血标本管标签上 签名及记录采血日期。 (3)血标本的识别信息与输血申请单上的信息应一致 2血标本外观的要求 (1)避免使用溶血的血标本：采集过程中引起的机械性溶 血，应当重新采集。患者确实存在血管内溶血，而必须 使用溶血的血标本时，为了防止对溶血结果误判建议使 用的方法是：在反定型及交叉配血的红细胞中加入适 量EDTA盐水溶液。由于EDTA能够螫合补体激活所需的 Mg2+和Ca2+，故可阻断补体活化引起的红细胞破坏， 即溶血；另一种方法是在试验前后作溶血程度的比较。 可用生理盐水（或6%白蛋白）与患者的红细胞混合为,阴性对照，将患者血清与患者的细胞混合，
5、反应后离 心，比较两种细胞扣( cell button)的大小，或者比较实 验管与对照管的溶血程度，以证实是否有红细胞破坏增 加的可能性。 (2)避免使用高脂血标本：高脂血症患者禁食12小时后重 新采血。 (3)其他要求：试管应无破损和渗漏。 （六）血标本的采集时间要求 1、普通患者一般用3天内的血标本做交叉配血试验。 2、特殊患者(1)地中海贫血患者：在每3天一次抗筛及鉴定为阴性 时，血标本采集时间可适当放宽。(2)需要剖宫产的孕妇：免疫抗体产生最可能发生于最,后3个月。故至少是7天之内的标本。但尽可能在输血前 采集血标本，以利于在发生输血不良反应时进行回顾性 检查。(3)需输注右旋糖酐的患
6、者：右旋糖酐是大分子葡萄糖 聚合物，会覆盖于红细胞膜上，使红细胞容易发生假凝 集，应在输注前抽取血标本备用。 （七）血标本采集量的要求 1、推荐用EDTA.K2抗凝，血量3ml，抗体鉴定5ml。 2、疑难交叉配血 要求送检2管，一管抗凝，一管不抗 凝，血量均 3ml。综上所述，对不符合要求的情况，可遵循血标本 “八不”接收原则：血标本无标签或填写不清不收； 血标本与输血申请单所填项目不符不收；血标本量少 于3ml不收；血标本被稀释不收；血标本溶血不收,（溶血性疾病除外）；用肝素治疗者的血标本未经鱼 精蛋白对抗使之凝血或未经标记说明不收；用右旋糖 酐、羟乙基淀粉等大分子物质治疗后采集的血标本未作
7、 标记说明不收；非医护人员或非授权人员送血标本不 收。 二、血标本保存的要求 （一）全血标本的保存在输血后，受血者和献血者的血标本必须密封或将 试管盖紧，在16保存7天。用于输血反应尤其是迟 发性溶血性输血反应（多发生于输血后37天）查因。 （二）血清或血浆标本的保存可将血标本分离血清或血浆，置于-30保存，保,存（因许多迟发性溶血性输血反应在输血后10天未必出 现临床表现） 第二节 坚持正反定型正反定型起到互相验证和质量控制的作用，只有正 反定型结果相符才能正确判定ABO血型。除了出生4个 月以内的婴儿和新生儿只做正定型之外，必须坚持正反 定型。 其主要临床意义有： 1、易于发现和纠正血型鉴
8、定错误。 2、有助于发现ABO亚型，因为亚型患者红细胞上A或B 抗原可能很弱，例如将A2型误判为A1型，如果这种患 者含有抗-A1，输A型血（含A1抗原）便会发生急性溶 血性输血反应。,一、ABO血型的鉴定 （一）对常规血标本坚持正反定型 1、人类在出生4个月后抗体已经形成，除了出生4个月 以内的婴儿和新、生儿之外，常规检测受血者和献血者 ABO血型必须正反定型, 并同时进行自身对照和阴性对 照。为了防止对溶血结果误判, 用于配制反定型试剂红 细胞的稀释液应含有EDTA。 2、方法选择 不能用玻片法，可用试管法和微柱凝胶 法。 3、ABO正反定型不一致的原因 (1)人为因素：操作中加错标本或试
9、剂；离心速度不够,或速度过快；细胞与血清比例不当；结果判读错误等。 (2)客观因素：因某种疾病（如白血病）导致抗原减弱， 红细胞发生多凝集现象及产生类B物质；抗体效价低， 如婴幼儿、老年人、低丙种球蛋白血症等；存在不规则 抗体；某些药物干扰；试剂不标准、试剂失效或污染等。4ABO正反定型不一致的处理 使用原始标本重新配制红细胞悬液，采用试管法和 洗涤红细胞重新检测时，同时做自身对照。当检测结果 与以往记录不一致时，应重新采集血标本再检测一次。5正反定型不相符时的输血 献血者正反定型不相符，该袋血不能发出使用；患 者正反定型不相符，如遇紧急输血抢救，可先输O型红,细胞（但不能输O型全血，因全血有
10、近一半的血浆，可 能导致溶血反应），然后再查找原因。 （二）对出生4个月内的婴儿及新生儿血标本只做正定 型 二、RhD血型的鉴定我国已规定常规血型鉴定还应包括RhD定型。 三、疑难血型鉴定 （一）ABO疑难血型的鉴定 主要原因：某些慢性疾病致ABH抗原减弱或丢失；老 年人、化疗或与疾病有关的免疫抑制致天然抗体丢失。 胃肠道肿瘤或梗阻患者出现过量可溶性ABH血型物质。 多发性骨髓瘤或其他异常蛋白血症的患者或静脉输注,高分子质量的液体可形成缗钱状红细胞。高效价冷自 身抗体、脐带血标本中的Wharton胶可引起红细胞凝集。 细菌酶、造血组织中体细胞的突变或遗传性疾病形成 多凝集红细胞。多种细胞群或嵌
11、合现象，如造血干细 胞移植后、输不同ABO血型的红细胞、双胎红细胞生成 组织的宫内交换，引起混合视野凝集。有结肠癌或败 血症病史的患者产生获得性B抗原。红细胞表面存在 少量异型血型抗原。存在A2亚型抗原，血浆中存在 抗-A1或IgM型同种抗体，如抗-P1、抗-M和抗-Leb等。 缺乏ABH抗原，含有抗-H、抗-A和抗-B的盂买表型或 类盂买表型的存在等。 为了解决以上ABO疑难血型鉴定的问题，可根据不 同的情况选择延长室温孵育时间，降低孵育温度，采用,吸收放散试验、洗涤技术、生理盐水稀释、盐水替代、 ABO血型基因分型、设自身对照，或观察是否出现不同 程度的混合视野凝集等方法来解决。 （二）其
12、他疑难血型的鉴定存在自身抗体或异常血清蛋白时RhD血型的鉴定直 接抗球蛋白试验强阳性的致敏红细胞极易造成血型鉴定 错误，这些致敏红细胞在高蛋白或高分子聚合物介质中 易发生自凝，可出现RhD阴性受血者被错误地鉴定为 RhD阳性的情况。为了避免这种情况下血型鉴定的错 误，可采用放散或解离红细胞上大多数自身抗体后再进 行RhD定型。常用的方法有：56水浴放散法、氯喹放 散法、酸洗脱法。,四、紧急情况下ABO和RhD血型鉴定 （一）紧急情况的定义紧急情况是指没有足够的时间采用常规的方法进行 ABO血型和RhD血型定型。 （二）紧急情况下的ABO和RhD血型鉴定在紧急情况下进行血型鉴定时，必须包括用抗-
13、A、 抗-B和抗-D，并设立适当的对照或进行反定型试验。当 检测结果显示患者血型为AB型和RhD阳性时，必须非常 小心。因为实验过程中没有进行严格的对照试验排除冷凝 集等因素。紧急发血后，继续按规范进行ABO和RhD血 型鉴定，发现问题及时纠正。,第三节 做好抗体筛选与鉴定对于有输血史、妊娠史、交叉配血不合或短期内需 要接受多次输血者，应对患者的血液进行红细胞不规则 抗体筛选试验，如果筛选结果为阳性，应该让临床医师 知道可能要推迟提供所需的血液，同时要预留足够的时 间，让技术人员鉴定抗体的特异性，选择相合的血液。 一、抗体筛选 （一）红细胞不规则抗体筛选的原理 红细胞不规则抗体筛选的原理是用一
14、套商品化的 23个献血者的O型红细胞对受血者的血清或血浆进行 抗原抗体反应，以筛查出在37有临床意义的抗体。每个筛选红细胞的表型或抗原谱已经被详细筛选,过，由23个人份的O型红细胞组成一套试剂，要求尽 可能包括更多的抗原，至少需要表达下列18个抗原：D、 C、E、c、e、M、N、S、s、P1、Lea、Leb、K、k、 Fya、Fyb、Jka、Jkb，而且以纯合子基因所表达的抗 原为佳，各组细胞抗原最好具有互补性。随机获得的O 型红细胞作为筛选红细胞则难以达到上述要求，易造成 漏检。 （二）红细胞不规则抗体筛选的临床意义由于输血或妊娠接触外来的红细胞抗原引起同种免 疫产生的抗体通常称为红细胞同种
15、抗体。红细胞同种免 疫患者中有20%产生多种同种抗体。有临床意义的红细 胞同种抗体与溶血性输血反应有关。通过红细胞不规则 抗体筛选，可检出这些抗体。,（三）抗体筛选的基本技术 1、间接抗球蛋白试验：最可靠的方法。 (1)盐水-间接抗球蛋白试验：由于需要较长的孵育时间, 一般不做为常规检测方法。 (2)白蛋白-间接抗球蛋白试验：可提高灵敏度，缩短孵 育时间至30分钟。 (3)低离子强度溶液-间接抗球蛋白试验：孵育时间可缩 短至10分钟，是最合适的方法 (4)聚乙二醇-间接抗球蛋白试验：对IgM型抗体，尤其是 ABO和Lewis系统中的IgM抗体呈弱反应性，甚至无法被 检测出来，但能提高有临床意义
16、的IgG型抗体检测的灵 敏度。 (5)酶-间接抗球蛋白试验：因为酶会破坏某些红细胞抗,原，如M、N、S、Fya和Fyb，因此，酶法不作为常规 使用方法。但是,酶法在Rh系统和Kidd系统的抗体鉴定 中特别有用，经常用来提高抗体鉴定灵敏度。 2、凝聚胺试验 是孵育时间最短的敏感试验。能够提高 对RhD特异性抗体鉴定的灵敏度，但检测抗Kell (K)抗体 的灵敏度却很低。 3、凝胶法或微板法 可实现自动化测试，减少实验室血 标本识别错误。其中微柱凝胶法简单、有效，但无法排 除无临床意义抗体的干扰。 （四）红细胞不规则抗体筛选的局限性 1、低效价抗体的漏检 近30%红细胞同种抗体在产生后 的5年内仍然存在于体内，有些抗体效价已降至难以检,出的水平，有可能被漏检。在输血后，漏检的抗体会再 次对献血者的红细胞上的特异性抗原发生回忆反应，产 生相应的抗体。因此，即使抗筛阴性，也应结合输血史、 妊娠史进行综合分析，防止发生迟发性溶血性输血反应。 2、低频率抗原的抗体可能被漏检 低频率抗原比如Cw、 V、Kpa、 Jsa和Wra抗原，在筛选细胞上是罕见的，筛 选细胞可能不含有这些抗原。因此，如果血清或血浆中 存在这些低频率抗原的抗体，也有可能被漏检，这对于 有输血史和妊娠史的患者必须加倍小心。以往的抗体鉴 定记录有重要参考价值。 二、抗体鉴定 （一）红细胞不规则抗体鉴定的原理,
