《丹参饮片炮制规范化研究 李慧芬07[1].4.26》由会员分享，可在线阅读，更多相关《丹参饮片炮制规范化研究 李慧芬07[1].4.26（42页珍藏版）》请在金锄头文库上搜索。
1、丹参饮片炮制规范化研究,学生：李慧芬 导师：张学兰 教授,研究的目的和意义,丹参是中医临床和中成药生产中都大量使用的重要中药。中国药典2005年版一部和全国中药炮制规范收载有丹参和酒丹参两种饮片规格，但目前各地丹参的炮制工艺仍不统一,饮片的质控方法和质量标准也很不完善，因而造成各地丹参炮制品质量相差很大，严重影响了丹参饮片的质量及临床疗效。,本课题旨在优选确定丹参饮片的规范化炮制工艺及其技术参数，研究制定丹参饮片的质量标准,实现丹参饮片炮制工艺规范化，质量标准科学化。,主要研究内容,丹参炮制古今文献研究,丹参饮片实验室炮制工艺研究,丹参饮片中试工艺研究,丹参药材及其饮片质量标准研究,第一部分
2、丹参饮片炮制古今文献研究,对丹参炮制的古今文献进行了整理分析，为制定切实可行的研究方案，确定研究考察指标及研究起点，奠定了坚实的基础。,试验设计,根据预试验结果，确定以药材软化时加水量、饮片切制厚度和饮片干燥时的烘制温度为考察的主要因素，每个因素3个水平，如下表。,第二部分 丹参饮片实验室炮制工艺研究,丹参片实验室炮制工艺研究,因素与水平表,样品的制备,取原药材，除去杂质及残茎，取粗细均匀的丹参药材500g，平行9份，抢水洗净，按正交设计的工艺组合进行炮制。操作中，将药材整齐堆放，均匀喷淋清水，每隔1h喷淋清水1次，淋润4h至透，取出稍晾，切片，烘干，取出晾凉，筛去碎屑，用塑料袋密封，备用。,
3、L9(34)正交试验设计表,最佳炮制工艺方案的优选,根据各指标成分在工艺选择中的主次地位，给予不同的加权系数，求出综合评价值，以综合评价值对实验结果进行直观分析和方差分析。评分标准见下表。,各指标成分含量的评分标准表,正交试验结果,丹参片炮制工艺优选直方图,方差分析表,注：F0.05(2,2)=19.00,直观分析表明，丹参软化切制的工艺为A2B1C3。由方差分析结果表明，因素A即药材软化时的加水量是影响丹参饮片质量的主要因素。由于饮片厚度对丹参饮片质量无明显的影响，而在其他条件一致的情况下，切2mm厚的饮片产生的药材碎屑明显高于切4mm厚的饮片，因此，确定丹参软化切制的最佳工艺为A2B2C3
4、，即丹参药材100kg，加80kg的水淋润4h至透，切4mm厚片，80烘干。,按照优选出的丹参软化切制工艺条件制备3批样品，分别测定各指标成分的含量，求出综合评价值Y，结果见下表。,验证实验,验证实验样品各指标成分含量测定结果（n=3）,结果表明，验证实验样品综合评价值Y与正交优选结果的Y值相近，说明优选的工艺条件稳定可行。,酒丹参实验室炮制工艺研究,试验设计,根据预试验结果，确定以黄酒用量、炒制温度和炒制时间为考察的主要因素，每个因素3个水平，见下表。,因素与水平表,注：为药材重量的百分数,L9(34)正交试验设计表,取净丹参片500g, 平行9份，按下表的工艺组合进行炮制。具体操作方法如下
5、：取净丹参片500g, 加黄酒（均加水稀释至150g）拌匀，闷润1h至透，炒制，取出，放凉，筛去碎屑，塑料袋密封，备用。,样品的制备,根据各指标成分在工艺选择中的主次地位，给予不同的加权系数，求出综合评价值，以综合评价值对实验结果进行直观分析和方差分析。评分标准见下表。,最佳炮制工艺方案的优选,各指标成分含量的评分标准表,正交试验结果表,酒丹参炮制工艺优选结果直方图,方差分析表,由直观分析表明，酒丹参炮制的最佳工艺为A3B2C1,即取净丹参片500g, 加黄酒50g（加水稀释至150g）拌匀，闷润1h至透，200炒制12min，取出，放凉，筛去碎屑。由方差分析结果表明，各因素对酒丹参饮片质量均
6、无显著性影响。,注： F0.05(2,4)=6.94,按照优选出的酒丹参饮片炮制工艺条件制备3批样品，分别测定各指标成分的含量，并求出综合评价值Y，结果见下表。,结果表明，验证实验样品综合评价值Y与正交优选结果的Y值相近，说明优选的工艺条件稳定可行。,验证实验,验证实验样品各指标成分含量测定结果（n=3）,通过实验室的系列实验研究，确定了丹参饮片（丹参、酒丹参）的实验室炮制工艺。为验证丹参饮片炮制工艺的合理性，确定其产业化炮制方法，在济南宏济堂制药有限公司，按实际生产要求，进行了中试试验。,第三部分 丹参饮片炮制工艺中试验证,丹参炮制工艺中试验证,将实验室优选出的丹参炮制工艺（丹参药材100k
7、g，加80kg的水淋润4h至透，切4mm厚片，80烘干。）按实际生产要求，生产10批样品，并测定10批中试样品的含水量，结果见下表。,10批丹参中试生产数据表,结果表明，本工艺适合大生产。10批中试样品的含水量在6.58%9.56%之间。,酒丹参炮制工艺中试验证,根据生产实际，设置炒药机的转速为20转min-1，投药量为10kg，从低温到高温，依成品外观为指标，经反复比较试验，确定酒丹参饮片生产条件：净丹参片10kg，加黄酒1kg（加水稀释至3kg）拌匀，闷润1h至透，置炒药机（转速：20转min-1）内，控温仪温度为A，炒制20min。对5个不同产地的酒丹参进行了10批次的炒制中试试验，结果
8、见下表。,10批酒丹参中试生产数据表,结果表明，本工艺适合大生产。成品表面黄褐色，有酒香气。根据实验室和中试试验结果，并结合生产实际，确定酒丹参工业生产的最佳炮制工艺为：设定炒药机控温仪的温度为A，转速为20转min-1。取净丹参片10kg，加黄酒1kg（加水稀释至3kg）拌匀，闷润1h至透，置炒药机内，A炒制20min，取出晾凉，筛去碎屑，混匀，分装，即得。,第四部分 丹参饮片质量标准研究,丹参药材质量标准研究,按中国药典2005年版一部丹参药材性状项下的方法进行检查，结果中试用5个产地的丹参药材均符合药典要求。,性状,薄层色谱鉴别,丹参酮A的鉴别,1 2 3 4 5 6 7,1.山东沂源
9、2.山东沂水 3.丹参对照药材 4.丹参酮A对照品 5.河南方城 6.山西运城 7.安徽亳州,丹参药材中丹参酮A鉴别TLC图,丹酚酸B的鉴别,1 2 3 4 5 6,丹参药材中丹酚酸B鉴别TLC图,1.山东沂源 2.山东沂水 3.丹酚酸B对照品 4.河南方城 5.山西运城 6.安徽亳州,各指标成分含量测定结果,药材各指标成分含量测定结果表,结果表明，5个产地丹参药材含水量为8.10%10.93%、总灰分为4.48% 5.92%、酸不溶性灰分为0.84%1.52%、水溶性浸出物含量为61.34%70.62%、醇溶性浸出物含量为15.78%16.56%、丹参酮A含量为0.249%0.345%、丹酚
10、酸B含量为5.12%8.18%，5个产地丹参药材上述7个指标成分含量均符合药典要求。5个产地丹参药材含杂质为2.89%4.11%。,丹参饮片质量标准研究,性状,根据本品10批中试样品的考察，按实际性状描述，本品为类圆形的厚片，片面红黄色或黄棕色，有散在的黄白色筋脉点，呈放射状排列，中心略黄，周边外皮暗红棕色。气微，味微苦涩。,丹参质量标准研究,薄层色谱鉴别,丹参酮A的鉴别,1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12,丹参中丹参酮A鉴别TLC图,1.山东沂源 2.山东沂源 3.山东沂源 4.山东沂水 5.山东沂水 6.丹参对照药材 7.丹参酮A对照品 8.河南方城 9.河南方城 10.
11、山西运城 11.山西运城 12.安徽亳州,丹酚酸B的鉴别,1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11,丹参中丹酚酸B鉴别TLC图,1.山东沂源 2.山东沂源 3.山东沂源 4.山东沂水 5.山东沂水 6.丹酚酸B对照品 7.河南方城 8.河南方城 9.山西运城 10.山西运城 11.安徽亳州,各指标成分含量测定结果,丹参各指标成分含量测定结果表,丹参中试10批样品中杂质、水分、总灰分和酸不溶性灰分平均含量的95%可信区间依次为1.12%1.68%、7.40%8.93%、4.53%5.63%、0.61%0.94%。结合生产实际，分别以其平均含量95%可信区间的120%为上限规定各指标成分的含
12、量限度，故暂定本品含杂质不得过2.0%、含水分不得过11.0%、总灰分不得过7.0%、酸不溶性灰分不得过1.1%。丹参中试10批样品中水溶性浸出物、醇溶性浸出物、丹参酮A和丹酚酸B平均含量的95%可信区间依次为57.75%63.17%、13.94%15.15%、0.282%0.329%、4.22%5.61%。结合生产实际，分别以其平均含量95%可信区间的80%为下限规定各指标成分的含量限度，故暂定本品含水溶性浸出物不得少于46.0%、含醇溶性浸出物不得少于11.0%、含丹参酮A不得少于0.20%、含丹酚酸B不得少于3.4%。,稳定性考察,在拟上市包装条件下，对丹参3批中试样品，进行了6个月的稳
13、定性考察。在6个月内其性状、薄层色谱行为、水分、水溶性浸出物、醇溶性浸出物、丹参酮A和丹酚酸B的含量均无明显变化，表明丹参饮片中试样品稳定性良好，因此，暂定本品保质期为18个月。,酒丹参质量标准研究,性状,对10批酒丹参中试样品的性状进行考察，按实际性状描述，本品形如丹参片，表面黄褐色，具酒香味。,薄层色谱鉴别,丹参酮A的鉴别,1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12,酒丹参中丹参酮A鉴别TLC图,1.山东沂源 2.山东沂源 3.山东沂源 4.山东沂水 5.山东沂水 6.丹参对照药材 7.丹参酮A对照品 8.河南方城 9.河南方城 10.山西运城 11.山西运城 12.安徽亳州,丹
14、酚酸B的鉴别,1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11,酒丹参中丹酚酸B鉴别TLC图,1.山东沂源 2.山东沂源 3.山东沂源 4.山东沂水 5.山东沂水 6.丹酚酸B对照品 7.河南方城 8.河南方城 9.山西运城 10.山西运城 11.安徽亳州,各指标成分含量测定结果,酒丹参各指标成分含量测定结果表,酒丹参中试10批样品中杂质、水分、总灰分和酸不溶性灰分平均含量的95%可信区间依次为0.88%1.35%、7.72%9.93%、4.53%5.50%、0.59%0.97%。结合生产实际，分别以其平均含量95%可信区间的120%为上限规定各指标成分的含量限度，故暂定本品含杂质不得过2.0%
15、、含水分不得过12.0%、总灰分不得过7.0%、酸不溶性灰分不得过1.2%。酒丹参中试10批样品中水溶性浸出物、醇溶性浸出物、丹参酮A和丹酚酸B平均含量的95%可信区间依次为59.07%64.60%、14.59%15.74%、0.288%0.333%、3.92%5.31%。结合生产实际，分别以其平均含量95%可信区间的80%为下限规定各指标成分的含量限度，故暂定本品含水溶性浸出物不得少于47.0%、含醇溶性浸出物不得少于11.0%、含丹参酮A不得少于0.20%、含丹酚酸B不得少于3.0%。,稳定性考察,在拟上市包装条件下，对酒丹参3批中试样品，进行了6个月的稳定性考察。在6个月内其性状、薄层色谱行为、水分、水溶性浸出物、醇溶性浸出物、丹参酮A和丹酚酸B的含量均无明显变化，表明酒丹参饮片中试样品稳定性良好，因此，暂定本品保质期为18个月。,小结与讨论,传统认为丹参具有活血化瘀的作用，现代药理研究表明，丹参酮A、丹酚酸B为丹参的主要活血成分，故以丹参酮A、丹酚酸B、水溶性浸出物和醇溶性浸出物含量为指标，确定丹参的最佳炮制工艺，按实验室优选出的丹参饮片炮制工艺，在济南宏济堂制药有限公司进行了中试验证，结合生产实际确定了丹参饮片的规范化工艺流程和工艺参数。,
