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1、间接抗人球蛋白间接抗人球蛋白 IgGIgG 检查标准操作程序检查标准操作程序1.1. 试验原理和目的试验原理和目的将抗球蛋白血清加入巳经致敏的红细胞盐水悬液中，红细胞表面的抗体球蛋白与抗球蛋白血清中的抗体发生特异性反应，通过桥梁作用使红细胞发生凝集。指导间接抗人球蛋白试验（IAT） 。2.2. 样本收集和贮存样本收集和贮存2.1 标本采集：采集静脉血（患者与 AB 型血各 35ml，O 型血 2ml） 。2.2 标本的抗凝与存放时间：O 型血 EDTA.K2 抗凝，余不抗凝，立即进行实验。2.3 拒收标本规定：拒收样品标识不清或标识错误、采血管不正确、严重溶血或脂血、与申请单内容不符等标本。2
2、.4 储存条件及时间：采完标本立即送检，标本禁忌放入 48冰箱中，以避免红细胞在病人体外致敏所致假阳性反应。血清标本不能含有纤维蛋白，否则出现假阳性反应。已检标本封盖后室温放置，保存 48 小时后由医院按感染标本统一处理。 3.3. 试剂试剂3.1 抗球蛋白血清（广谱及单价） 本科使用上海血液生物医药有限责任公司的抗 IgG、C3d（多特异性） ，抗 IgG，抗 C3d。 。3.2 受检血清。3.3 5% O 型红细胞悬液。3.4 不完全抗 D 血清。3.5 AB 型血清。3.6 5% D 阳性红细胞悬液。3.7 生理盐水。4.4. 仪器仪器4.1 日本 OLYMPUS CX31 普通光学显微
3、镜。4.2 SSW 型微电脑电热恒温水槽（上海博迅实业有限公司医疗设备厂）5.5. 操作步骤操作步骤 5.1 取试管 3 支，标明受检管、阳性对照管及阴性对照管。5.2 按下表将各反应物加入相应试管内。 反反 应应 物物 受检者受检者 阳性对照阳性对照 阴性对照阴性对照受检血清 2 滴 - -5% O 型红细胞悬液 1 滴 - -不完全抗 D 血清 - 2 滴 -AB 型血清 - - 2 滴5%D 阳性红细胞悬液 - 1 滴 1 滴5.3 混匀，离心，检查溶血或凝集。置 37水浴 1h，离心，检查溶血或凝集。用生理盐水洗涤 3次（3000rpm，1 分钟） 。末次洗涤后，将上清液除尽，并用滤纸
4、将附着于管口的盐水吸去。每管各留红细胞悬液 1 滴。5.4 每管各加抗球蛋白血清 2 滴，混匀，3000r/min 离心 15 秒，观察结果。6 6检验结果报告检验结果报告6.1 结果判断6.1.1 须持一定角度轻轻地摇动试管直到松动所有的细胞，然后反复倾斜试管，直到均匀的细胞悬液（阴性）或者凝集物（阳性）为止。阳性对照管凝集，阴性对照管不凝集，受检管出现凝集者为阳性。6.1.2 效价滴定：如受检血清中检出有不完全抗体，可将受检血清以盐水作倍量稀释后，按上法进行测定。6.2 报告传输及打印在 LIS 操作界面输入结果，审核发送报告，门诊和病房报告单在指定处打印。7.7. 参考范围参考范围正常人
5、：阴性。8.8. 安全防范安全防范操作时必须穿戴手套和工作服；工作后的台面应消毒擦洗；用过的加样枪头等耗材应作为医用垃圾处理；为了避免形成气溶胶，所有样品尽可能不要在空气当中暴露太长时间；遇到样本洒出，被污染的区域应立即用次氯酸钠溶液清洗，擦拭用的物品应丢弃在标有生物污染的垃圾筒中。9.9. 注意事项注意事项9.1 红细胞洗涤应迅速，一经开始洗涤，就不应中断停止。洗涤用盐水要足量，并用力冲入管底，使压积于管底的红细胞松离。切勿用手指堵住管口，颠倒混匀，以防污染来自皮肤的蛋白。据研究，其量即使只有 1：4000 稀释，即可中和抗球蛋白血清 1 滴。9.2 离心速度和时间十分重要，应按规定进行。原则上应以最小的离心力和最短的离心时间能使阳性对照管出现阳性反应为宜。9.3 如果检查的抗体为补体依赖抗体，则必须加入新鲜 AB 型血清，抗球蛋白血清中也应含有抗C3d。10.10. 临床意义临床意义10.1 温抗体型导致的 AIHA，IAT 多为性。10.2 药物诱发的 IHA，甲基多巴阳性、青霉素阴性。10.3 冷凝集综合症：37作 IAT 结果阴性，温度下降则 IAT 结果阳性。10.4 PNH 患者 IAT 常为阴性。11.11. 参考文献参考文献11.1全国临床检验操作规程 （第 4 版）11.2 抗人球蛋白试剂盒使用说明书。
