《(课件)上海交通大学医学院附属仁济医院血管外科张岚》由会员分享,可在线阅读,更多相关《(课件)上海交通大学医学院附属仁济医院血管外科张岚(21页珍藏版)》请在金锄头文库上搜索。
1、上海交通大学医学院附属仁济医院 血管外科 张 岚,静脉血栓栓塞症(VTE)发病率高、危害严重病因:遗传性、获得性(FV Leiden突变;AT、PC和PS抗凝蛋白缺陷),AT属于丝氨酸蛋白酶抑制物超家族中的一员,是人体抗凝系统中最重要的一种抗凝物质,约占抗凝系统总活性的70% 432个氨基酸组成,相对分子量为58KDa 反应位点区与肝素结合区 分型I型主要表现为AT抗原(AT:Ag)和活性(AT:A)的同步减少,II型是由于AT结构异常所致。分为RS型(反应位点突变型)、HBS(肝素结合位点变异)和PE(多重变异)等3个亚型,AT基因测序同源模建突变质粒构建蛋白免疫印迹ELISA激光共聚焦显影
2、,红色箭头:先证者;阴影图形:突变携带者 AT:Ag: 0.190.31 g/L; AT:A: 75125%,c.134GA 箭头所示:突变碱基,c.342TG 箭头所示:突变碱基,自然界中蛋白质结构骨架的多样性远少于蛋白质序列的多样性 蛋白质三维结构预测中最为可靠和实用的方法 AT13位碱基与82位碱基在10类物种高度保守 通过同源模建,可以将该区碱基进行任意的人为替换,通过软件分析系统计算出一系列静电力的变化情况,为进一步AT构象病的蛋白质功能研究提供理论基础,同源性检测的目的,突变体AT蛋白三维空间结构左下:Ser82Arg突变图右下:Arg13Gln突变图,左图:AT-Arg13(突变
3、前)蓝色小球表示AT与肝素间的有效静电力 右图:AT-Gln13(突变后)蓝色小球数量与色度均明显下降,第13位碱基(AT-c.134GA)突变后范德华力、静电力、总电能较突变前显著下降,AT-Ser82Arg:突变后碱基与周围折叠形成明显碰撞 紫色区域显示:碱基与折叠间的碰撞,AT:Ser82Arg与周围原子基团产生碰撞; 分子间静电力作用半径重叠;分子间距离缩短,1:空白对照 2:AT-wt 3:AT-82 4:AT-13 5:AT-double WB显示:AT-82与AT-double细胞裂解中AT:Ag显著上升,用3种不同质粒转染HEK293T分别检测细胞上清液与细胞裂解液中的AT:Ag含量,左图:双突变质粒转染细胞;右图:野生型质粒转染细胞,目前已报道的AT突变分子机制,AT Morioka(C95R)Cys21-Cys95间二硫键消失 Ser82Asn额外糖基化 Phe299Leu合成了一种不耐热的杂合性AT蛋白而导致AT缺陷 13387-9delG、T98I和A404T突变AT蛋白分泌障碍和细胞内快速降解 Leu99PheAT蛋白分泌障碍和细胞内滞留,AT-c.134GA & c.342TG突变体AT在细胞内潴留AT-c.342TG突变起主导作用,