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1、流式细胞术 风湿免疫病,北京协和医院 风湿免疫科 赵丽丹,常用的流式细胞仪与流式分析软件,BD-FACSDiva Flow Jo CellQuest WinMdi FCS Express CFlow Sampler Analysis（ Accuri C6 Flow Cytometer） ModFit LT增殖分析,骨髓和器官移植,基础医学,流式细胞仪的临床应用,免疫病,血液病,肿瘤性疾病,感染性疾病,外周血淋巴细胞,T淋巴细胞,NK细胞,外周血免疫细胞亚群,CD16+CD56+,T辅助细胞,CD3+,CD19+,T8细胞,B淋巴细胞,CD4+,CD8+,Nave T,CD45RA+CD45RO
2、-,Memory T,CD45RA-CD45RO+,CD95 DR CD38,活化标志,细胞毒T细胞,抑制型T细胞,CD28,CD28,增殖标志,Ki-67,DC细胞,pDC,抑制型T细胞,CD11c-CD123high,CD11c+CD123low/-,免疫细胞的性质,吞噬能力、分泌细胞因子的能力,免疫调节功能,发育、分化和成熟,迁移和趋化能力,增殖与凋亡,表型和数量,流式细胞仪在 免疫病中的应用,1,2,3,4,了解体内免疫功能状态细胞亚群分析 细胞免疫：T细胞/nave T/活化T 体液免疫：B细胞,辅助疾病诊断 HLA-B27 HLA-B5 HLA-DR4,探索疾病的发病机理、病程、预
3、后 Th17、TregBR3、TACI、BCMA 血清中多种细胞因子,监测指导临床治疗方案美罗华B细胞 Belimumab B细胞 预防性抗PCP,流式细胞术在免疫学中的应用,免疫学研究中常用的流式方法,细胞表面染色 荧光选择与配伍 避免交叉污染 调节补偿,胞内分子及细胞因子染色 破膜/固定剂 同时测定多种细胞因子 PMA/Ionomycin +Golgi阻断剂 -CD4荧光的选择,细胞增殖及凋亡分析 CFSE 增殖分析 DNA分析 PI-Annexin Casepase 检测,细胞分选,流式细胞术对免疫细胞亚群测定的范例,Anti-CD20不同发育阶段B细胞的影响,临床应用,抗CD20单抗治
4、疗中监测淋巴细胞亚群的临床意义,初始治疗B细胞显著增多应用价值；CD4+T细胞显著减少应用风险；治疗中的监测B细胞清除效应预测治疗效果（临床效果与B细胞清除相关，*长寿命浆细胞）随访中的病情监测B细胞恢复病情复发强化治疗；感染风险评估,细胞免疫功能与机会性感染,指导临床治疗：加强免疫抑制治疗 vs 经验性抗感染治疗CD4/CD8 （参考值12）2：细胞免疫功能过度活跃1：病毒感染、恶性肿瘤 CD4 200 ：PCP、隐球菌、分支杆菌感染的风险 Nave T 、 CD28的CD4减少易发生机会性感染,免疫缺陷病的诊断和定位,X连锁无丙种球蛋白血症 XLA外周血和淋巴组织中B 细胞减少或缺失，Ig
5、缺乏男性婴幼儿，69月发病，反复化脓性感染普通变异性免疫缺陷病CVIDIgG显著低下，B细胞减少或正常，nave T减少青壮年，反复化脓性呼吸道感染选择性IgA缺陷、选择性IgG亚类缺陷 高IgM综合征,X连锁重症联合免疫缺陷SCIDT细胞和NK细胞减少，B细胞可正常新生儿、婴幼儿，病毒、PCP、念珠菌、败血症,Moleculars as therapeutic target,5,6,Rituximab / ocrelizumab; 2. Anti-CD40L; 3. Atacicept / Belimumab; B cell tolerogen-Abetimus sodium; 5. Aba
6、tacept; 6. Epratuzumab;,FC对于基础研究的重要性,细胞分选 细胞增殖 基因研究GFP标签 高通量的细胞因子测定CBA,Science is hard. Flow cytometry should be easy.,CFSE,HC,SLE,CD4+T：CDI=0.98 CDI=1.72 CDI=5.25,CFSE细胞增殖的流式测定,CBA（Cytometric Bead Array） assay,Terasawa H et al. Clin Cancer Res 2002;8:41-53,细胞凋亡的流式测定,本实验室近期工作的相关文章,1. Zhao LD, Li Y,
7、Smith MF Jr, Wang JS, Zhang W, Tang FL, Tian XP, Zhang FC, Zhang X. Expressions of BAFF/BAFF receptors and their correlation with disease activity in Chinese SLE patients. Lupus. 2010 Nov;19(13):1534-49. (SCI=2.586)2. Yue C, You X, Zhao L, Wang H, Tang F, Zhang F, Zhang X, He W. The effects of adali
8、mumab and methotrexate treatment on peripheral Th17 cells and IL-17/IL-6 secretion in rheumatoid arthritis patients. Rheumatol Int. 2010 Nov;30(12):1553-7. (SCI=1.493)3.Yang HX, Zhang W, Zhao LD, Li Y, Zhang FC, Tang FL, He W, Zhang X. Are CD4+CD25-Foxp3+ cells in untreated new-onset lupus patients
9、regulatory T cells?Arthritis Res Ther. 2009;11(5):R153. (SCI=4.271)4.Zhang B, Zhang X, Tang FL, Zhu LP, Liu Y, Lipsky PE. Clinical significance of increased CD4+CD25-Foxp3+ T cells in patients with new-onset systemic lupus erythematosus. Ann Rheum Dis 2008;67(7):1037-40. (SCI 6.411)5.Zhang B, Zhang X, Tang F, Zhu L, Liu Y. Reduction of forkhead box P3 levels in CD4+CD25high T cells in patients with new-onset systemic lupus erythematosus. Clin Exp Immunol 2008;153(2):182-7. (SCI 2.599),总结,流式细胞术 风湿免疫病,
