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1、第二十五章 肝炎病毒 (hepatitis virus, HV),以侵害肝脏为主引起病毒性肝炎的一组不同种属的病毒。 临床表现相似：乏力、消化道症状、肝功能异常、部分有黄疸 甲型肝炎病毒（HAV）、乙型肝炎病毒（HBV）、 丙型肝炎病毒（HCV）、丁型肝炎病毒（HDV）、 戊型肝炎病毒（HEV）、GBV-C/HGV、TTV 黄热病毒、CMV、EBV、风疹病毒等,Viral Hepatitis - Historical Perspective,other : GBV-C/HGV, TTV,?,一、甲型肝炎病毒 （hepatitis A virus，HAV）,Feinstone于1973年应用免疫
2、电镜技术在急性期肝炎患者粪便中发现。 1982年国际病毒命名委员会将其分类为小RNA病毒科肠道病毒属72型。 近年又被单列为肠道病毒科的嗜肝RNA病毒属（heparnavirus）。 HAV引起的甲型肝炎是急性肝炎，主要经过粪-口途径传播，可造成暴发或散发流行，潜伏期短，发病急，一般不转为慢性，亦无慢性携带者，预后良好。,形态与结构,一）生物学性状,衣壳: 20面体立体对称，分实心颗粒和空心颗粒两种；由VP1-VP4等4种多肽组成，其中VP1是主要的衣壳蛋白，其抗原决定簇的NT抗体，能中和所有的HAV株。 1个血清型，7个基因型。,球形颗粒，无包膜和突起: 基因组: 线状+ssRNA，稳定性高
3、。,易感动物和细胞培养,一）生物学性状,人、黑猩猩、狨猴、猕猴、恒河猴等灵长类动物对HAV易感，接种病毒后均可出现临床、生化和组织学上急性肝炎的改变，粪便内可检出病毒。HAV可用Vero细胞、人胚肾细胞、传代猴肾细胞 (FRhK-4、FRhK-6)、人胚肺2倍体成纤维细胞和人肝癌细胞株 (PLC/PRF/S) 等分离培养。但不引起CPE。因此需用免疫荧光法或放射免疫法检出培养的HAV。,抵抗力,一）生物学性状,耐酸碱（pH2-10）、耐热、耐有机溶剂。 高压 (121 20 min)、煮沸 (5 min)、干热(180 1 h)、UV (1.1瓦1 min)、甲醛 (1:4 000、37 3
4、d)以及氯 (10-5 ppm、30 min) 等处理均可使之灭活。鉴于HAV有相当大的抵抗力，因此对肝炎患者及其排泄物处理应特别小心。,传染源与传播途径,二）致病性与免疫性,传染源：多为患者和隐性感染者。患者潜伏期后期及急性期的血液和粪便均有传染性。 传播途径：主要通过粪-口途径传播，或经粪便污染的 食物。未有患急性甲型肝炎的孕妇传染给胎儿的病例。,传播方式,致病机制,二）致病性与免疫性,HAV主要侵犯儿童和青年，且多为隐性感染;机体的免疫应答也参与了肝脏的损伤，即抗HAV(IgM和IgG)在肝脏与HAV结合形成免疫复合物，或Tc(CTL)对感染病毒肝细胞的攻击所致。,HAV的致病性,粪口
5、途径传播,小肠淋巴结中大量增殖,入血并形成病毒血症,肝脏为最终靶器官（病毒直接损伤或免疫病理作用）,通过胆汁随粪便排出体外,感染后可产生持久免疫力。 早期：IgM；同时，从粪便中检出sIgA抗体。 恢复期：IgG，并可持续多年；特异细胞免疫应答。,免疫性,二）致病性与免疫性,甲型肝炎血清学变化过程,实验室诊断不依靠分离病毒 1. 血清学检查：检测抗HAV常用RIA和EIA法。检测抗HAV IgM有助于早期诊断；测抗HAV IgG有助于流行病学调查；测粪便中抗HAV IgA也有助于诊断。 2. 病毒检测：潜伏期末期和急性期早期，取粪便用免疫电镜检测HAV颗粒；用放射免疫 (RIA) 或酶免疫 (
6、EIA) 法检测HAV 的抗原。 3. 病毒核酸检测：应用 cDNA-RNA分子杂交技术及PCR技术检测HAV的RNA，方法特异、敏感。用斑点杂交法可检出10-9 mg核酸。,三）微生物学检查法,HAV感染后以隐性感染和无黄疽型病例占多数，因此传染源较难控制。 预防：一般性预防：搞好卫生，切断传播途径。特异性预防：接种疫苗，减毒甲型肝炎活疫苗(H2 株和L1株)；国外灭活疫苗（HM175株、CR326-F株），HAV基因工程疫苗正在研制中。 人工被动免疫：注射丙种球蛋白。,四）防治原则,治疗：甲型肝炎为自限性疾病，经治疗可痊愈，不转慢性亦不留后遗症。用药宜简。,四）防治原则,HAV引起的甲型肝
7、炎是一个消化道传染病，传播途径为粪-口途径，甲型肝炎的过程是一个病毒消灭性的感染，无HAV携带者，可用减毒活疫苗进行预防。,HAV总结,1989年在美国夏威夷召开的国际肝癌会上，将肠道传播的非甲非乙型肝炎病毒正式命名为戊型肝炎病毒，是戊型肝炎（hepatitis E，HE）的病原体。戊型肝炎主要经粪口途径传播常引起大流行，其临床和流行病学特点类似甲型肝炎。,二、戊型肝炎病毒 （hepatitis E virus，HEV）,HEV呈球形，无包膜，表面呈现锯齿状，类似杯状病毒。到目前为止，世界各地分离到的病毒只有一个血清型。HEV直径27-38 nm，20面体立体对称，核酸为线形+ssRNA， 易
8、感染动物是猕猴，也可感染非洲绿猴、恒河猴、猫猴和黑猩猩等灵长类动物，口服或静注含有HEV病原材料均可使之感染。,一）生物学性状,主要通过粪-口途径传播，饮水被病毒污染可造成水源性暴发流行，也可通过密切接触、食物污染等方式传播。 患者多见于20-40岁成年人，潜伏期为2-9 w，多数患者于病后6 w即好转或痊愈。少数患者可表现为重症肝炎，甚至可导致死亡。孕妇感染时，发病率高，病情严重，常发生流产或死产。 HEV致病机制尚不明了，可能是病毒本身作用及机体免疫应答造成肝细胞损伤。病后有一定免疫力。,二）致病性和免疫性,Symptoms,ALT,IgG anti-HEV,IgM anti-HEV,Vi
9、rus in stool,0,1,2,3,4,5,6,7,8,9,10,11,12,13,Serological Course of HEV infection,Titer,Weeks after exposure,1. 免疫电镜： 可取病人粪便标本进行常规免疫电镜检查HEV颗粒。 2. 血清学方法ELISA或Western印迹试验检测抗HEV，包括抗HEV IgM和抗HEV IgG。 3. HEV核酸检测：多采用PCR法。可取患者粪便标本或血清标本检测HEV RNA。,三）微生物学检查法,原则上与甲型肝炎相同。主要措施是保护水源，防止被粪便污染，保证安全用水。在流行地区广泛宣传不喝生水，改善
10、环境卫生和个人卫生，降低新患发病率。 免疫球蛋白预防无效。 本病治疗原则是早期发现，早期治疗。合并重症肝炎时按抢救暴发性肝功能衰竭的原则处理。,四）防治原则,嗜肝DNA病毒科（hepadnaviridae）； 是乙型肝炎病原体，主要经输血、注射、性行为和母婴传播。 起病徐缓，部分患者可转为慢性，少数还可导致肝硬化和肝癌。,三、乙型肝炎病毒 （hepatitis B virus，HBV）,1963年Blumberg在澳大利亚土著人血清中发现一种新抗原，称为澳大利亚抗原（Australia antigen）； 1968年确定这种抗原与血清型肝炎密切相关，称为肝炎相关抗原（hepatitis ass
11、ociated antigen，HAA）； 1970年D.S. Dane在肝炎患者血清中发现具有传染性的颗粒，即Dane颗粒（Danes particle）。从而HBV被确认。,概 述,a 小球形颗粒(small spherical particle)，直径22 nm，HBsAg，不含DNA和DNA多聚酶，无感染性； b 管形颗粒(tubular particle)，直径22 nm，长度在50-700 nm之间，由小球形颗粒串联而成，无感染性； c 大球形颗粒(large spherical particle)，即Dane颗粒，直径42 nm，有感染性。,形态与结构,一）生物学性状,Elect
12、ron microscopy of hepatitis B virus-positive serum reveals 3 morphologically distinct forms of particles,spherical particle (HBsAg),Dane particle (complete virion ),tubular particle,large spherical particle,Hepatitis B virus. Dane particle and incomplete particles that are found in patients serum,形态
13、与结构,一）生物学性状,Dane颗粒是具有感染性的完整成熟的HBV颗粒，直径为42 nm，具有双层核壳结构： 核心颗粒：直径为27 nm。颗粒内部：双股不完全环状DNA和DNA多聚酶。颗粒表面（内衣壳）：含有HBcAg 和HBeAg 。 外壳（包膜）：厚7 nm。脂质双层：来源于宿主细胞包膜蛋白：病毒编码。含有HBsAg 和PreSAg,HBV基因结构,一）生物学性状,HBV DNA是由长链L (负链) 和短链S (正链) 组成的不完全双链环状DNA ，短链的长度相当于长链的50-85%。HBV DNA长链有转录和翻译蛋白的功能，载有病毒蛋白质的全部密码，有4个开放读码框架(ORF)，分别为S
14、、C、P和X区 。,乙型肝炎病毒基因结构模式,S区：衣壳蛋白。分别由S基因、PreS1与PreS2基因编码HBsAg、PreS1和PreS2 Ag。主蛋白 (main protein) ：HBsAg 中蛋白 (middle protein) ：HBsAg+PreS2Ag大蛋白 (large protein) ：HBsAg+PreS2Ag+ PreS1Ag C区：C基因和preC基因分别编码HBcAg和 PreC蛋白（是HBeAg的前体蛋白，经切割加工后形成HBeAg并分泌到血循环中）。,P区：最长，P基因编码HBV DNA多聚酶。末端蛋白区(terminal protein, TP)间隔区(s
15、pacer)聚合酶/逆转录酶区(DNA pol/RT)Rnase H区。 X区：编码X 蛋白，可反式激活一些细胞的癌基因及病毒的基因等，可能与肝癌的发生有关。,HBV复制周期,1. absorption, uncoating 2. dsDNA cccDNA 3. L- DNA mRNA0.8kb HBxAg2.1kb envelope proteins (HBsAg,PreS2)2.4kb envelope proteins (HBsAg,PreS2,PreS1)3.5kb P蛋白、HBcAg、HBeAg前体蛋白template for DNA replication(pregenomic RNA，PgRNA) 4. PgRNA L- DNA S+ DNA dsDNA 5. virion packaging and release,抗原组成,外壳： HBsAg：三种颗粒所共有，是机体受HBV感染的主要标志之一。具有抗原性，能刺激机体产生保护性抗体，即抗HBs 。根据HBsAg抗原性差异，HBV可分为adr/adw、ayr/ayw 等4种血清型。血清型分布有明显的地区差异，并与种族有关。 如欧美主要是adr型，为A基因型；我国以adr、ayw为多见。,一）生物学性状,
