化自身免疫病课件

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1、,自身免疫病及其自身抗体的检测,一.概述,自身免疫是指机体免疫系统对自身物质产生抗体或免疫效应细胞而引起的免疫应答. 自身抗体是能与机体正常组织成分或改变了的组织成分起反应的抗体.,正常人血清中可有多种微量的自身抗体或致敏淋巴细胞.它能清除体内衰老细胞而起到免疫稳定的效应.,只有在自身免疫反应超出生理限度或持续过久,损伤了自身组织器官并引起病变或临床症状时,才能导致自身免疫病(Autoimmune disease,AID)的发生.,二.自身免疫病的分类,器官特异性:病变局限于某一器官或组织,可以检出对该器官组织成分特异性自身抗体.非器官特异性:指侵犯多种器官或系统的一组疾病.可检出对多种器官或

2、组织成分的自身抗体.如SLE,RA.,表1 常见自身免疫病分类,类别 病 名 自 身 抗 原 _ 器官特异性 慢性甲状腺炎 甲状腺球蛋白,微粒体甲亢 甲状腺细胞表面TSH受体阿狄森氏病 肾上腺皮质细胞青少年型胰岛素依赖性糖尿病 胰岛细胞萎缩性胃炎 胃壁细胞溃疡性结肠炎 结肠上皮细胞原发性胆汁性肝硬化 胆小管细胞,线粒体重症肌无力 乙酰胆碱受体,自身免疫性溶血性贫血 RBC特发性血小板减少性紫癜 血小板 非器官特异性 类风湿性关节炎(RA) 变性IgG,RANA干躁综合征(SS) SSA,SSB,唾液腺管系统性红斑狼疮(SLE) 胞核成分 (DNA,DNP,RNP,SM)胞浆成分(线粒体,微粒体

3、)RBC,血小板混合结缔组织病(MCTD) 细胞核(RNP) _,三.自身免疫病的发病机制,自身成分具有抗原性,自身免疫耐受性的破坏,发生持久和过度的自身免疫应答,导致自身免疫的病理过程而致病.,(一) 自身抗原的形成,1.自身组织抗原性质的改变理化和生物因素通过多种方式改变自身组织的抗原性质,导致自身免疫.2.隐蔽抗原的释放某些自身抗原与免疫系统隔离,或在胚胎期尚未出现,所以不能建立起免疫耐受.当出生后,由于外伤,感染等原因,使隐蔽抗原释放入血,就可能产生自身免疫应答.3.异嗜性抗原引起的交叉免疫反应,(二) 免疫系统发育或调节功能异常,AID与免疫缺陷病常合并发生.1.胸腺发育和功能异常2

4、.机体免疫调节机制紊乱(1).T细胞旁路的激活(2).Ts细胞功能低下(3).免疫调节网络的异常(4).多克隆B细胞激活,(三) 病毒感染,(四) 遗传因素的作用,四.风湿病与自身免疫病,风湿病学是一门以内科学和临床免疫学为基础的新兴学科.风湿性疾病(Rheumatic Diseases)包括所有不同原因以及不明原因引起的骨,关节,肌病.狭义:主要指自身免疫性结缔组织病.如: RA; SLE; SS; PSS; DM/PM; MCTD,广义:涉及所有骨,关节,肌肉疼痛和炎症的疾病.,如:感染性: 莱姆氏病(Lymes Disease)代谢性: 痛风内分泌性:甲旁亢遗传性:粘液多糖病退化性:骨关

5、节炎生态环境性:大骨节病,WHO公布的10种主要的风湿病是:,1. RA 6.脊椎关节病2. SLE 7.下背部痛3. PSS 8.骨关节炎4. SS 9.软组织风湿病(DM/PM)5. 莱姆氏病 10.痛风,五.自身免疫病的实验诊断,(一) 类风湿因子(RF)RF是一种抗变性的IgG的自身抗体,有 IgG,IgA,IgM,IgE型.IgM-RF是RF的主要类型.RF主要见于RA.还见于多种疾病及部分正常人.RF对RA不是特异的.RF阳性不能作为诊断RA的唯一标准.RF阴性不能排除RA的诊断.检测方法:乳胶凝集试验;ELISA;速率散射比浊法等.,(二) 抗核抗体(ANA),概论: 在自身免疫

6、性疾病中,细胞核常成为自身免疫反应的靶子.包括: 细胞核的核膜核内的染色质非组蛋白 核糖核蛋白粒子ANA分类: ANA是一组抗体,包括近30种成分.目前临床开展的大约有10种左右.,表2. 抗核抗体分类 _ 分类 抗 核 抗 体 _ 1.抗核膜抗体 1)抗核孔复合物抗体 2)抗层素(Lamin)抗体 2.抗染色质(包括 1)抗双链DNA抗体 2)抗单链DNA抗体 3)抗组蛋白抗体 结合在染色质上 4)抗高迁移率非组蛋白抗体 5)抗着丝 点抗体 6)抗Ku抗体 的非组蛋白)抗体 7)抗Scl-70抗体 8)抗RNA聚合酶-1抗体 9)抗NOR-90K抗体 3.抗核糖核蛋白 1)抗SM抗体 2)抗

7、U1RNP抗体 3)抗U3RNP抗体 粒子(包括部分胞 4)抗SSA/Ro抗体 5)抗SSB/La抗体 6)抗核糖体抗体 浆核糖核蛋白粒 7)抗Jo-1抗体 8)抗PL-7抗体 9)抗PL-12抗体 子)抗体 10)抗OJ抗体 11)抗EJ抗体 12)抗U2RNP抗体13)抗Th/To抗体 14)抗SRP抗体 4.抗其它核成分抗体 1)抗PM-Scl抗体 2)抗PCNA抗体 3)抗Mi-2抗体 _,临床常用ANA及意义,1.抗层素抗体(抗Lamin抗体) 层素是一组与核膜内层构成核层的蛋白质,在核分裂时能使核膜溶解.主要见于同时存在三种临床表现的自身免疫病,即1)肝炎2)白细胞减少,抗磷脂抗体

8、阳性3)皮肤白细胞裂解性血管炎或脑血管炎.此外也见于少数SLE患者.检测方法:IF;表现为核膜染色.,2.抗dsDNA抗体,一般仅见于SLE,主要反应疾病的活动程度.SLE阳性率40%左右,是SLE的 血清标记抗体.检测方法:IF;ELISA;放免;金标法等.,3.抗ssDNA抗体,可存在于多种AID中.SLE;MCTD;SS;RA;PSS;DM/PM;药物性狼疮等疾病.缺乏特异性.检测方法:ELISA;血凝等.,4.抗组蛋白抗体,主要的组蛋白有H1;H2A;H2B;H3和H4.主要见于药物性狼疮,阳性率95%以上.也可见于SLE(70%),幼年类风湿性关节炎(30%)等.检测方法:ELISA

9、;IF;血凝法等.,5.抗着丝点抗体,着丝点是纺锤丝在染色体上的附着点.一般采用HEp-2细胞作底物.主要见于硬皮病的CREST综合征(钙质沉着,雷诺氏现象,食管运动障碍,指(趾)硬皮病和毛细血管扩张).检测方法:IF,6.抗Scl-70抗体,Scl-70抗原实际上是DNA拓扑异构酶1.主要见于硬皮病.是其血清标记抗体.检测方法:双相免疫扩散;对流免疫电泳;免疫印迹;ELISA等.,抗核糖核蛋白粒子抗体,细胞内含有各种不同的核糖核酸(RNA)分子,包括:核糖体RNA(rRNA),转运RNA(tRNA),信使RNA(mRNA),mRNA的前体,不均一的细胞核RNA(hnRNA),以及各种小分子R

10、NA.RNA与各自专一的蛋白质组成核糖核蛋白粒子(Particlse).小分子核糖核蛋白粒子又分为小分子细胞核核糖核蛋白(SnRNP),小分子细胞浆核糖核蛋白(ScRNP).,7.抗Sm抗体,作用的抗原是U族小分子细胞核核糖核蛋白粒子(USnRNP),分子量大小从11kd-29kd不等,是SLE的血清标记抗体.检测方法:同前.,8.抗RNP(U1RNP)抗体,抗原为U1SnRNP.主要见于MCTD (混合性结缔组织病）,也可见于SLE,PSS,RA,SS等多种AID.,9.抗SSA/Ro抗体,抗原是ScRNP.主要见于SS.也可见于其它AID,包括SLE,RA,PSS.在一些正常人,病毒感染特

11、别是EBV感染也可阳性.IgG类抗SSA抗体通过胎盘进入胎儿后,可引起新生儿狼疮综合征,患儿出现典型的SLE皮损.抗SSA抗体与胎儿心脏的传导系统结合,可造成先天性心脏传导阻滞.,10.抗SSB/La抗体,抗原属SnRNP.常与抗SSA抗体同时存在。主要见于SS,是SS的血清标记抗体.也可见于其它AID.,11.抗核糖体或抗rRNP抗体,核糖体RNP抗原是由38kd,16kd和15kd 磷酸化蛋白组成.主要见于SLE,阳性率 10%左右,是SLE的又一血清标记抗体.检测方法:免疫印迹,IF,ELISA,双扩散,12.抗Jo-1抗体,抗原为组氨酰-tRNA合成酶,酶蛋白分子量为55kd.是PM/

12、DM的血清标记抗体.抗Jo-1抗体在PM（多发性肌炎）中阳性率25%.检测方法:同前,13.抗PM/Scl抗体,又称PM-1抗体.抗原位于核仁和胞浆,是分子量从20kd至110kd的11种蛋白质的复合物.主要见于具有PM和PSS特征的重叠综合征患者(8%).,ANA的检测方法,1.LE细胞检查:敏感性特异性较差,目前已逐渐淘汰.2.IF: 这是目前检测ANA的最常见方法,也是经典的方法.一般是以鼠肝组织切片作为反应基质.目前国内也已用培养的HEp-2细胞(人喉癌上皮细胞)作为底物.,核染色模型:,1) 周边型 主要由抗dsDNA的抗体所引起. 主要见于SLE.核膜型与此型相似,是由抗核膜抗体所

13、引起.2) 均质型 是由抗DNP抗体所引起.主要见于SLE,药物性狼疮.3) 颗粒型或斑点型 是由抗ENA抗体所引起.主要见于SLE,MCTD,PSS,SS等.4) 核仁型 主要见于硬皮病. 核糖体型 主要见于SLE. 5) 着丝点型 主要见于硬皮病及CREST综合征.,3.ID或CIE,主要用于检测抗ENA抗体.所用抗原:兔胸腺;小牛胸腺;人脾;猪脾;组织培养细胞等提取物.4.同位素(Farr氏法)检测主要用于检测抗dsDNA抗体.,5.ELISA:可用于抗dsDNA;抗ssDNA;抗组蛋白抗体;及抗Sm;抗RNP;抗SSA;抗SSB等. 6.免疫印迹技术主要用于ENA抗体的检测.一般可检测

14、7种以上的抗体.,抗核抗体谱,ANA在不同的疾病中呈现不同的组合.不同的疾病有自己的ANA谱.有的抗体仅见于某一疾病;有的抗体可见于多种疾病,但阳性率有显著差别.ANA的这一特征,有助于AID的诊断和鉴别诊断.,表3.系统性红斑狼疮的自身抗体,_抗体反应性 阳性率(%) 抗 原 性 质 _ 双链DNA 40 双链DNA 变性DNA 70 单链DNA 组蛋白 70 所有组蛋白亚基:H1,H2A,H2B,H3和H4 Sm 30 B/B D,E,F和G蛋白,与snRNAs,U1,U2,U4-U6和U5形成复合物 核RNP(U1RNP) 32 蛋白A,C,和70kD蛋白,与snRNAU1形成复合物 SS-A/Ro 35 60kD和52kD蛋白与RNAs,Y1,Y3,Y4和Y5形成复合物 SS-B/La 15 48kD磷酸化蛋白,与RNA聚合酶III转录产物形成复合物,