《血凝仪检测原理及应用》由会员分享，可在线阅读，更多相关《血凝仪检测原理及应用（65页珍藏版）》请在金锄头文库上搜索。
1、1,凝血仪的检测原理 及应用,2,（一） 凝血常规（常规凝血功能筛选组合） 1. 凝血常规1（6项）： PT、APTT、TT、Fib-C、D-二聚体、AT- 适合于：干部病房、ICU病房、呼吸内科、消化内科、血液内科、产科、肿瘤科、心内科、肾内科和术后出血患者等，以及其它科室60岁以上高危人群。 2. 凝血常规2（4项）： PT、APTT、TT、Fib-C 适合于：一般手术患者。,3,（二） DIC筛选试验组合： PT、APTT、TT、Fib-C、D-二聚体、FDP、AT- （三）血友病组合： PT、APTT、TT、:C、:C、抑制物检查 （四） 凝血因子全套检查： PT、APTT、TT、Fi
2、b-C、:C、:C、：C、:C、:C、：C,4,（五）药物性出血的监测 1. 口服华法林治疗监测组合：PT 2. 普通肝素治疗监测组合： TT、APTT、AT- 3. 溶栓药物治疗（SK、UK、t-PA）监测组合： PT、APTT、D-二聚体、TT、Fib-C、FDP,5,出血 血栓形成,正常,止血血栓,6,三个阶段，两个途径 （内源性、外源性）,第一阶段：凝血酶原激活物形成 第二阶段：凝血酶形成 第三阶段：纤维蛋白形成,7,凝子因子参与的凝血途径,内源性凝血途径：， 外源性凝血途径：， 共同凝血途径：，,8,9,传统的凝血途径的修改,外源性的因子在组织因子的结合下既可激活因子，又可激活内源性
3、的第因子，从而打破了内源与外源的界限。 因子缺乏时并不引起出血，这说明第因子并不一定只被因子激活，现已证明本身具有自身激活作用。 凝血酶（因子）也可激活因子，原来认为只有因子才能激活因子。 TF被激活并与因子结合后会被一种组织因子途径抑制物（TFPI）所抑制；后者已成为一种新型抗凝剂。,10,二、凝血检验标本收集和预处理,11,（一）标 本 采 集,1. 抽血注意事项 （1）抽血管首选优质塑料管； （2）定量抽血完毕，立即将标本轻柔颠倒混匀5次，避免剧烈摇动； （3）许多专家建议抽血的第一管血不用作血栓试验，尽量选第二管。,12,2. 抗凝剂问题 （1）世界卫生组织/美国临床和实验室标准协会（
4、WHO/CLSI）都推荐使用0.109mol/L枸橼酸钠（3.2% Na3C6H5O72H2O）作为凝血检验的抗凝剂； （2）一般选用1份抗凝剂+9份静脉血当Hct 25%55%时； （3）若Hct 25%或55%时，抗凝剂的用量=0.00185全血量1- Hct 100；,13,Hct异常时抗凝剂和抽血量,14,高Hct的影响,病例：真性红细胞增多症患者，Hct 0.562 （1）1：9比例抗凝结果（错误）： PT 19.2s，PT-INR 1.78，APTT 62.1s， Fib-C 1.67g/L，TT 22.9s，与临床不符。 （2） 0.2 0.00185（100-56.2） 计算后
5、应抽血2.5ml，结果（正确）为： PT 13.9s，PT-INR 1.30，APTT36.2s， Fib-C 1.70g/L，TT 19.7s，与临床相符。,15,（二） 离心问题 1. 血栓试验使用的血浆为PPP； 2. 一般要求20002500g/min（3000r/min ），离心时间为10min左右，转速N（转/分）与“g”的转换关系：g=11.1810-7半径（mm）N（转/分）； 3. 离心温度室温即可，但不可超过25，4离心条件应该提倡。,16,（三） 即时试验标本的要求 1. 标本尽可能在4小时内完成； 2. 筛查试验和一些因子测定时，应避免将标本长时间室温放置； 3. 因子
6、测定时，标本要避免冷藏。,17,（四）分离后血浆标本的处理,1. 建议将标本保存在-70以下条件，凝血因子至少可稳定6个月； 2. 短期保存可在-35条件，-20条件通常是不理想的； 3. 冷冻血浆解冻应放置37水浴条件，并轻轻摇动45分钟，分析前轻柔地颠倒混匀。室温放置自然解冻是不可取的，因室温放置会有冷沉淀形成，:C和vWF会减少，并有纤维蛋白原析出。冷冻过的血浆不能再次冷冻。,18,XII,XI,IX,VIII,外源凝血途径 检查 PT,内源凝血途径 检查 APTT,组织因子,VII,+,X,Xa,II 凝血酶原,IIa（凝血酶）,I (FIB),Ia (凝块),V,组织因子途径,TF,
7、TFPI,共同途径途径 检查 TT,凝血途径示意图,19,三、凝血酶原时间测定（PT）,20,III,IV,PL,III,X,II,VII,XIII,I,IX,VIII,VII,V,IV,III,II,XI,XII,in Blood血液中,in Plasma血浆中,PT Reagent,Fibrin,Extrinsic System 外在系统,Measure Clotting Time,without,Tissue Factor,Blood Sampling,without,without,Trisodium Citrate,Normal Range 9-14 sec,37,X,V,I,XII
8、,XIII,X,VII,IX,VIII,V,IV,II,III,I,Phospholipid,XI,XIII,（一）检 测 原 理,21,PT检测的原理,在受检血浆中加入过量的组织凝血活酶和钙离子，使凝血酶原变为凝血酶，后者使纤维蛋白原与转变为纤维蛋白。观察血浆凝固所需的时间即为凝血酶原时间。CA1500仪器法判断终点采用光学法，即当纤维蛋白原转变为纤维蛋白时，经光照后产生的散射光发生变化，仪器判读终点。,22,（二）临 床 应 用,1. 延长 （1）见于先天性外源凝血因子（、 ）缺乏症和低/无FIB血症，凝血因子、 轻微减少，PT的延长幅度也不大，因子减少病人，其PT经常在正常范围； （2）
9、口服抗凝药，如华法令等； （3）维生素K缺乏症； （4）DIC及原发性纤溶症； （5）肝脏疾病； （6）血中有抗凝物质（狼疮抗凝物、抗磷脂抗体、肝素、FDP以及抗、 的抗体）。,23,2 .缩短 （1）血栓前状态和血栓性疾病； （2）见于先天性V因子增多； （3）长期口服避孕药； （4）使用重组的因子治疗时； （5）标本放置在28， 因子冷激活发生，使PT缩短。 3.口服抗凝剂的检测 PT和PT-INR是监测口服抗凝剂的常用指标，中国人PT-INR在1.5-2.5用药较为安全和有效。,24,低ISI试剂的优势,ISI=1.0试剂 ISI=2.0试剂 MNPT 11 sec 11 sec PT
10、22 sec 15.6 sec PT-INR (22/11) =2.0 (15.6/11) =2.0 当系统误差是 (21/11) = 1.91 (14.6/11) =1.76 1秒时的INR (23/11) = 2.09 (16.6/11) =2.28 INR误差范围 1.91 2.09 1.76 2.28,1,2,1,1,2,2,25,MNPT的确定方法,标本：多份混合血浆（20份以上） 年龄：18-55岁 性别：男、女（非妊娠、非经期）各半 药物的影响： 激素、抗生素、口服避孕药、降压药、维生素 采血前的要求：勿剧烈运动空腹或只服少量无脂类食物,26,四、 活化部分凝血活酶時間 （APT
11、T）,27,28,APTT检测的原理,37条件下，以白陶土（激活剂）激活因子和，以脑磷脂（部分凝血活酶）代替血小板提供凝血的催化表面，在Ca2+的参与下，观察贫血小板血浆凝固所需的时间即为活化部分凝血活酶时间。CA1500仪器法判断重点采用光学法，即当纤维蛋白原转变为纤维蛋白时，经光照后产生的散射光发生变化，仪器判读终点。,29,临 床 应 用,1 .延长 （1）见于内源性凝血因子（、）缺乏， 如血友病A、血友病B及 因子缺乏症； （2）严重的凝血酶原、和FIB缺乏，如肝脏疾病、阻塞性黄疸、新生儿出血症、肠道灭菌综合征、吸收不良综合征、口服抗凝剂、应用肝素及FIB缺乏血症； （3）纤溶活性增强
12、，如继发性、原发性纤溶亢进及循环血液中有纤维蛋白（原）降解产物（FDP）； （4）血液中有抗凝物质，如抗因子或抗体，狼疮抗凝物质等。,30,2.缩短 （1）高凝状态，如DIC的高凝期、促凝物质进入血液以及凝血因子的活性增高等； （2）血栓性疾病，如心肌梗死、不稳定性心绞痛、脑血管病变、糖尿病伴血管病变、肺梗死、深静脉血栓形成妊以及高症、肾病综合征和严重的灼伤等。,31,3.肝素治疗的监测 （1）肝素用于预防血栓形成时，APTT为同时检测的正常对照值的1.5倍； （2）肝素用于治疗的安全有效范围是APTT为同时检测的正常对照值的1.5-2.5倍。,32,APTT测定常见的问题,1. 分析前因素
13、2. APTT试剂（激活剂）,33,五、凝血酶时间测定（TT）,34,35,36,临 床 应 用,1 延长 （1）见于FIB水平或功能减低，如低FIB血症或异常FIB血症； （2）应用肝素或肝素类物质存在（如SLE、肝病和肾病等）； （3）见于FDP增多。,37,2 缩短 见于高凝状态 3 作为溶栓药物，如链激酶（SK），尿激酶（UK）和组织性纤溶酶原激活剂（t-PA）等溶栓治疗的监测指标。 TT在正常对照值的1.52.5倍 ，治疗安全有效。,38,TT测定常见的问题,1.分析前因素 2.TT试剂 凝血酶试剂 :来源于牛； 对肝素和FDP高度敏感； TT试剂保存时间较短，不宜重复使用。,39,
14、PT、APTT、TT 联合分析一,40,OAT,PT、APTT、TT 联合分析二,41,凝血因子FVIII或IX或XI或XII缺陷,PT、APTT、TT 联合分析三,42,纤溶过程（纤溶系统）,FIB （纤维蛋白原）,纤维蛋白 (血栓）,FSPs (包括D-D),FDPs,(统称)FDP,纤溶酶,纤溶酶原,(抗纤溶酶),激活剂,抑制物,抑制物,FDP:Fibrinogen Degradation Products FSP:Fibrin Split Products,43,六、纤维蛋白原测定（Fib-C）,44,45,OD,OD1,OD2,OD3,250mg/dl,125mg/dl,62mg/d
15、l,OD3,OD2,OD1,0,62,125,250,Mg/dlFIB,时间,OD,FIB,FIB,FIB,OD x FIB,检 测 原 理（PT演算法）,PT演算法的原理,PT测定完后纤蛋白原会转变成纤维蛋白，其形成的浊度与纤维蛋白质的含量成正比，因此不需要任何试剂，即可由产生的浊度直接推算出纤维蛋白原的含量。,46,检测原理（免疫学方法）,利用抗FIB多克隆抗体与FIB特异性结合反应进行测定； 方法有免疫浊度、单向免疫扩散和ELISA等。,47,临 床 应 用,1 增高 （1）动脉粥样硬化 （2）糖尿病 （3）急性传染病，急性感染 （4）结缔组织病 （5）急性肾炎和尿毒症 （6）妊娠晚期和
16、妊高症 （7）放疗后，灼伤，休克，外科 大手术后，恶性肿瘤等,48,2 减少 （1）DIC、原发型纤溶、重症肝炎，肝硬化； （2）作为蛇毒治疗（抗栓酶、去纤酶）和溶栓治疗（UK、t-PA）的监测指标。FIB在1.2 1.5g/L ，治疗安全有效。,49,方法学问题, Clauss法功能检测，操作简单，结果可靠，WHO推荐为Fib-C的参考方法（凝血酶为30100U/ml，OVB的pH值应在7.35）； PT演算法更快速，简便，且重复性较好，当Fib在正常范围或轻度异常时，与Clauss法结果差异不大，但当Fib6.0g/L或Fib1.5g/L时， PT演算法结果不可信，一般高于Clauss法；,
