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1、色谱分析及其应用,1. 色谱分析基本原理 2. 气相色谱 3. 高效液相色谱 4. 实际应用,分析测试中心（校医院斜对面）205 王 超13775988566 cumt-,1. 色谱分析基本原理,色谱法是一种物理化学分离方法。将这种分离方法与适当的检测手段相结合，应用于分析化学领域，就是色谱分析法。,概念与原理,A 概 念 与原理,重要,用示意图简单介绍其原理,必须有两个相：流动相和固定相,流动相携带混合物流经固定相，由于混合物中各组分与固定相相互作用的强弱存在差异，因此不同组分在固定相滞留的时间长短不同，故按先后不同的时间次序从色谱柱中流出，从而达到分离的目的。,1. 色谱分析基本原理,特
2、征,重要,A 概 念 与原理,按两相的状态分类,气相色谱(GC)：,液相色谱(LC)：,气固色谱(SC) 其固定相为固体吸附剂,气液色谱(GLC) 其固定相为附着在惰性固定载体表面上的一薄层液体有机化合物,流动相为气体的称为气相色谱 流动相为液体的称为液相色谱,液固色谱(LSc),液液色谱(LLC),超临界流体色谱(SFC),化学键合相色谱(CBFC),其固定相是将固定液 键合在载体表面上的,流动相界于气体和液体之间的超临界流体,1. 色谱分析基本原理,重要,B 分 类,B. 按分离机理分类,利用组分在固体吸附剂上的吸附能力的强弱进行分离的方法称为吸附色谱 利用组分在固定液中溶解度的差异而进行
3、分离的方法称为分配色谱 利用组分在离子交换树脂（固定相）上的亲和力的大小不同达到分离的方法称为离子交换色谱 利用组分的分子大小不同在多孔固定相中有选择渗透而达到分离的方法称为凝胶色谱或尺寸排阻色谱 利用固定在载体上的固化分子对组分的专属性亲和力的不同进行分离的方法称为亲和色谱，常用来分离蛋白质,1. 色谱分析基本原理,B 分 类,C. 按固定相的固定方式分类,柱色谱 色谱分离在柱上进行的称为柱色谱 平板色谱 色谱分离在平板上进行的称为平板色谱 纸色谱 色谱分离在滤纸上进行的称为纸色谱 毛细管色谱 色谱分离在毛细管内进行的，其实质也是一种柱色谱,按照分离装置不同称为不同色谱,1. 色谱分析基本原
4、理,B 分 类,1. 色谱分析基本原理,保留值,死时间tM 不被固定相吸附或溶解的物质进入色谱柱时，从进样到出现峰极大值所需的时间称为死时间，如图18 3中 OA。,保留时间tR 试样从进样开始到柱后出现峰极大点时所经历的时间，称为保留时间，如图183 OB,调整保留时间tR 某组份的保留时间扣除死时间后称为该组份的调整保留时间，即 tR = tR-tM,C 色谱流出曲线及有关术语,1. 色谱分析基本原理,保留值,死体积 VM 指色谱柱在填充后，柱管内固定相颗粒间所剩留的空间、色谱仪中管路和连接头间的空间以及检测器的空间的总和,保留体积 VR 指从进样开始到被测组份在柱后出现浓度极大点时所通过
5、的流动相体积。,调整保留体积VR某组份的保留体积扣除死体积后，称该组份的调整保留体积，即 VR = VR- VM,C 色谱流出曲线及有关术语,1. 色谱分析基本原理,（l）根据色谱峰的个数，可以判断样品中所含组份的最少个数（2）根据色谱峰的保留值，可以进行定性分析（3）根据色谱峰下的面积或峰高，可以进行定量分析（4）色谱峰的保留值及其区域宽度，是评价色谱柱分离效能的依据（5）色谱峰两峰间的距离，是评价固定相(和流动相)选择是否合适的依据,C 色谱流出曲线及有关术语,色谱曲线上可得到的重要信息,重要,1. 色谱分析基本原理,色谱的定性定量分析,色谱定性分析 利用纯物质对照定性 相对保留值法 相对
6、保留值is 是指组分i与基准物质s调整保留值的比值,用已求出的相对保留值与文献相应值比较即可定性。 加入已知物增加峰高法 保留指数定性法,1. 色谱分析基本原理,色谱的定性定量分析,色谱定量分析,归一化法 内标法 外标法,分离效能高灵敏度高 分析速度快 应用范围广 定性困难,1. 色谱分析基本原理,特 点,E 特点与应用,2. 气相色谱分析,气相色谱法(GC)是英国生物化学家Martin ATP和Synge R L M等人在研究液液分配色谱的基础上，于1952年创立的一种极有效的分离方法(为此,他们1952年获诺贝尔化学奖),气相色谱法是以气体作为流动相的一种色谱法。根据所用的固定相状态不同，
7、又可分为气固色谱(GSC)和气液色谱（GLC）,重要,气相色谱,气相色谱结构与流程（原理图）,2. 气相色谱分析,气相色谱,3.高效液相色谱,液相色谱法是一种以液体为流动相的色谱分离分析方法。液相色谱根据其固定相不同可分为液-固色谱、液-液色谱、键合相色谱、尺寸排阻色谱、离子交换色谱、纸色谱以及薄层色谱等。,高效液相色谱的概念与原理,3.高效液相色谱,高效液相色谱法是一种以液体为流动相的现代柱色谱分离分析方法。它是在经典液相色谱的基础上，引入气相色谱的理论和技术，在技术上采用了梯度洗脱、高压泵、高效固定相、高灵敏度检测器和计算机，因而具备速度快、效率高、灵敏度高、操作自动化、智能化的特点。,特
8、点：速度快、效率高、灵敏度高、适应范围广、操作自动化。,高效液相色谱的概念与原理,重要,3.高效液相色谱,高效液相色谱仪,高效液相色谱的概念与原理,进样系统 分离系统 检测器 一类是溶质性检测器，它仅对被分离组分的物理或物理化学特性有响应。属于此类检测器的有紫外、荧光、电化学检测器等；另一类是总体检测器，它对试样和洗脱液总的物理和化学性质响应。如示差折光检测器等。,高压输液系统由 溶剂贮存器、高压泵、梯度洗脱装置和压力表 等组成。,色谱分析知识要点,掌握色谱分析的含义与所能解决的问题。 熟悉常用的气相色谱、高效液相色谱概念 能够运用色谱知识解决实际问题。,课堂作业（当堂课结束交） （请写明：院
9、系学号姓名）,一、判断正确（T）或错误（F） 1. 热重分析曲线台阶表示失重量，而差热曲线的峰表示吸放热。 2. 差热分析是是通过测量样品与参比物的能量差与温度关系的一种分析方法。 3. 色谱分析是一种通过分离来鉴定物质的一种方法。 4. 色谱分析可以对所有物质进行结构分析。 二、选择题 1. 一张差热图上出现3个峰，可以直接说明样品（）。（A）3次失重（B）3次吸（放）热 （C）其它 2.一张色谱图上在第5分钟到第30分钟出现4个峰，说明样品中至少含有（）。 （A）4种元素（B）4种物相（C）其它。 三、填充题 1.热重分析适合于在加热过程中有_变化的样品分析。 2.差热分析适合于在加热过程中有_变化的样品分析。,
