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1、家禽精液品质的鉴定及保存,专业：动物营养与饲料科学,内容概要,1.家禽精液与家畜精液的不同点肉眼观测 2家禽精液的品质鉴定 镜检观测生物化学检查细菌学检查精液稀释液 3家禽精液的稀释和保存 常用的精液保存方法,家禽精子与哺乳动物的精子的形态差异 家禽精子的形态与哺乳动物不同，头部如镰刀形，立体形状为长柱形，颈部短，局部长，外形纤细。鸡精子全长约100107um,头部长12.5um,顶部长约2.5um,核长约10um，直径0.5um，尾部长90100um，精子的体积约9.2um3。,家禽精液与家畜精液的差异与家畜精液相比，家禽精液量小，但其精子密度高。鸡通常一次射精量为0.3-0.5ml,火鸡为
2、0.2-0.3ml,鸭为0.1-0.2ml,鹅为0.2-1.5ml。精子密度鸡17-35亿/ml火鸡80-90亿/ml，鸭2-60亿/ml,鹅3-25亿/ml。家禽精液的成份 家禽的精液是由精子和精清组成。精 清是精细管、附睾和输精管的分泌物，同时还混入透明液。透明液还含有提高精子活力、呼吸和葡萄糖消耗因子，其促使精子早衰，故采精时，应尽量避免透明液混入精液。,家禽精液品质鉴定,肉眼观测 颜色：正常为乳白色。被粪便污染的为黄褐色；尿酸盐污染为白色絮状物；血液污染为粉红色；透明液过多为水渍状。 气味：稍带有腥味 采精量：正常在0.21.2ml。鸡通常一次射精量为0.3-0.5ml,火鸡为0.2-
3、0.3ml,鸭为0.1-0.2ml,鹅为0.2-1.5ml。 浓稠度：浓稠度很大。精子密度鸡17-35亿/ml,火鸡80-90亿/ml，鸭2-60亿/ml,鹅3-25亿/ml。 pH：呈弱碱性，其PH值，鸡的为7.07.6，鹅稍低为6.97.4。,镜检观测 主要包括精子活力、密度及精子形态等。 活力: 取精液，用平板法在37条件下用200400倍显微镜检查，评定活力的等级，一般根据在显微镜下呈直线运动的精子数（有受精能力）所占比例，分为1、0.9、0.8、0.7、0.6级。转圈运动或原地摆动的精子，都没有受精能力。,精液密度指每1ml精液中所含的精子数。在显微镜下根据精子稠密程度可分为： 密精
4、子中间几乎没有空隙。鸡40亿/ml,火鸡80亿以上/ml； 中有空隙。鸡2040亿/ml。火鸡6080亿/ml； 稀稀疏。鸡20亿以下/ml，火鸡50亿以下/ml。,畸形率检查：取一滴原精液在载玻片上，抹片自然阴干，干后用95%的酒精固定12min,水洗，再用0.5%龙胆紫（或红、蓝墨水）染色3min,水洗阴干，在400600倍镜检。畸形精子有以下几种：尾部盘绕、断尾、无尾、盘绕头、钩状头、小头、破裂头、钝头、膨胀头、气球头、丝状中段等。,浓度：用红细胞计数法测定。取红细胞计数吸管，吸取精液0.5处，在吸入3%的NaCl或2%伊红溶液至101处为200倍稀释，摇匀至23分钟，去掉前面的3滴，在
5、计数板盖玻片上下各滴1/2滴，滴入血细胞计数板静置23min,进行计数。 1ml精液的精子总数=5个中方格精子数/80（小方格）10（计数室格高度）400（计算小方格）200（稀释倍数）1000（1ml等于1000mm3）。 C=n/100(C为精子总数，以10亿/ml表示；n为5个中方格的精子数)。,生物化学检查 精子呼吸强度测定精子呼吸强度与精子密度和活力有关，通常采用美兰褪色试验测定。精子在美兰溶液中，呼吸时氧化脱氢，美兰获得氢离子后便是蓝色还原为无色。因此，根据美兰褪色时间可测知精液中存活精子数量的多少，判定精子的活力和密度的高低。,精液果糖分解的测定精液果糖分解能力与精子活力密切相关
6、，因此可作为精子活率评定的指标。精液中精子代谢时消耗精液中的游离果糖和磷酸果糖。 精液耗氧量测定精子呼吸时消耗氧气多少与精子活力和密度有关，但精液耗氧量不仅取决于精子细胞内氧化，而且也受精清耗氧量所致。将一定量精液放在37温箱中孵化一时，用瓦（勃）氏呼吸器测定其耗氧量，计算出精子的耗氧量。,精浆中其它化合物的测定测定精浆中其它化合物如透明质酸、谷草转氨酶、酸性磷酸酶、柠檬酸、镁、锌、甘油磷酸胆碱、肉毒碱、精氨酸、精液素、类固醇激素和前列腺素等，有助于全面了解精液的品质和动物的繁殖能力。,细菌学检查,精液无菌是保障人工授精的基础 ，精液在采集、生产和贮存过程中，不可避免的要接触一些细菌，因此，在
7、精液生产中精液的细菌学检验和控制就十分重要。细菌检查 1、无菌条件下，取新鲜或解冻后的细管精液，一支细管精液接注一个灭菌平皿内，并倒入50的培养基约15ml，转动平皿使精液、培养基混合均匀，凝固后翻转平皿并置于恒温箱37培养，48小时后计算每个平皿内菌落数，取两个平皿的平均值。 2、每样品做两个平皿，并设立一个空白对照平皿。,精液的稀释和保存,精液稀释的目的是扩大精液量，为精子提高营养物质，缓冲不良环境的危害，阻止精子遭受冷打击；抑制细菌的繁衍，延长精子的存活时间，便于精液的保存和运输。 常用稀释液的基本成分 稀释剂：扩大精液容量，要求与精液 有相同或相近的渗透压，如 生理盐水、糖类及某些盐溶
8、液。 营养剂：提供外源的能量，延长精子存活时间。如果糖类（一般指单糖）、奶类及卵黄。 保护剂：中和、缓冲对精子保存的不良影响，防止精子受“低温打击”，创造精子生存的抑菌环境等。 其他添加剂：改善精子外在环境的理化特性，调节母禽生殖道的生理机能，提高受精率。常用的有酶类、激素类、维生素和pH调节物。,1.缓冲液：pH6.87.4对精子无害，一般用柠檬酸钠、磷酸二氢钾和磷酸氢二钠，近年来常用三羟甲基氨基甲烷（Tris）碱性缓冲液，对碱中毒和酶活力有重要作用。 2.电解质：为延长精子在体外的存活时间，在稀释液中加入适量的非电解质或弱电解质，各种糖类和氨基酸。 3.防冻物质：防止精子冷冻休克 的作用，
9、如卵磷脂、脂蛋白及含磷脂的复合物。 4.抗冻保护物质：有抗冻危害的作用。常用甘油和二甲基亚砜（DMSO）。 5.抗生素：为防止精液采精和处理过程中的污染，常用的有青霉素、链霉素。,精液稀释液的种类,现用稀释液：适用于采集的鲜精经稀释后立即输精的情况。常用以具有等渗透压的糖类和奶类为主，也可用生理盐水。 常温保存稀释液：适用于精液的室内短期常温保存，具有较低的pH较低的特点。 低温保存稀释液：适用于精液的低温保存，以卵黄或奶类为主要成分，具有抗冷休克的作用。 冷冻保存稀释液：适用于精液的超低温保存，除含有糖类、卵黄外，需加入甘油和二甲亚砜等抗冻物质。,家禽精液的保存,精液保存是为了延长精子的存活
10、时间及维持其受精能力，便于长期运输，扩大精液适用范围，增加受配母禽只数，提高种公禽配种效能。 现行精液的保存方法，按保存温度分为常温保存（1525）、低温保存（05 ）、冷冻保存（-79 或-196 )等三种。前两种保存方法，精液都以液态形式存在，故统称为液态精液保存。,常温保存 常温保存的温度在1820 保存无需特殊控温和制冷设备，精液处理方法简单，便于推广普及。原理：常温保存时稀释液的弱酸性环境，抑制精子的运动和降低代谢水平，从而延长精子的存活时间。稀释性的外源能源（营养液）给精子补充足够营养物质来源，稀释液中添加适当剂量的抗菌物质以抑制细菌微生物的孳生。方法：精液经稀释后，按照输精剂量要
11、求分装，或者在烧杯中封口后，保存在1820 温度下。,低温保存 原理：将稀释后的精液，置于05的低温条件下保存。在低温条件下，精子运动减弱甚至停止而处于一种休眠状态，代谢降低到极低水平，相对延长精子的保存时间。 方法：精液经过稀释后可以保存在冰箱的冷藏室内。,精液冷冻保存 原理：将精液经过适当处理后，保存在液氮（-196）、干冰（-79）或其他冷源中。理论上讲，精液经过特殊处理保存在超低温下，使其细胞代谢（酶）活动停止，而温度上升到适宜温度时又能恢复受精能力，就能达到长期保存精液的目的。 稀释液：冷冻保存稀释液。,冷冻保存稀释液含有低温保护剂(如卵黄、牛奶)、防冻保护剂（甘油等）、维持渗透压物
12、质（糖类、柠檬酸钠等）、抗菌素以及其他添加剂。冷冻保存精液稀释液都是在原有低温保存稀释液的基础上，添加防冻物质。 配制过程中采用分步稀释液：基础液将糖类、盐类等可经高温消毒的药品成分，成批量的配制成溶液，瓶装密封保存。液根据每次采精量，计算所需的冷冻稀释液量，在基础液中按配方比例加入一定量的卵黄和抗苗素。液取需要量的液，按配方比例加入经灭菌的甘油制成。,家禽精液冷冻程序精液稀释-降温和平衡分装、冷冻解冻。 1.精液稀释 使用冷冻保存稀释液 2. 降温：是指由30以上温度降至05的过程。为避免低温打击，要缓慢降温。平衡 ：是指在05条件下精子的适应过程。目的是重建离子平衡，同时使精子为冷冻做生理
13、上准备。降温平衡时间因不同种类家禽和用不同抗冻剂而异。 3.分装、冷冻 冷冻精液有三种分装方法：塑料细管、颗粒和安瓿法。冷冻多用液氮薰蒸法。 4.解冻 方法和速度影响精液品质、目前多使用3540水浴解冻和25水浴解冻。,实例：鸡的精液冷冻程序 颗粒法 稀释液配方：配方I 5.7葡萄糖 85ml 甘油 5ml 印黄 15ml 配方 乙烯二酸 8ml 牛奶 8ml 上面二液均按每ml青霉素1000单位，链霉素1000Ug 。精液采下后，一般按1：13稀释。 降温和平衡 用棉花包住精液瓶在25条件下放置24小时。 滴冻 在铜纱网上滴冻，滴冻温度为-56-118，铜纱网约距离液氮面 2 .53. 5厘米，滴成颗粒后熏蒸12分钟。颗粒大小可为0090.llml。 解冻 解冻液可用57葡萄糖，解冻温度3540，一般用05ml解冻液。,钢管法（贝尔茨维尔法） 1.稀释 用贝尔茨维尔家禽稀释剂稀释。 2.降温和平衡 用2小时降温至5后，加入4二甲基亚砜。再平衡2小时 。 3.分装用05ml细管分装（并事先印上品种日期等）4.冷冻 +5-20降温速度 1分钟 -20 - 125 降温速度 50分钟 -125-196降温湿速度160分钟 5.解冻 细管放入2水中解冻。,
