《变态反应性疾病的诊断方法ppt培训课件》由会员分享，可在线阅读，更多相关《变态反应性疾病的诊断方法ppt培训课件（49页珍藏版）》请在金锄头文库上搜索。
1、变态反应性疾病的诊断方法,成都市妇女儿童中心医院 儿童呼吸内科 鲁正荣,湿疹,荨麻疹,眼结膜炎,支气管哮喘,变应性鼻炎,食物过敏,变应性疾病,变应性疾病是一个全球性的公共健康问题 在世界各地均很常见 全球发病率高达 40 并且患病人数仍在继续增加,粗略估计 变应性疾病的发病率 正以每10年 23 倍的速度增加,IL-12,IL-10,-,-,IL-12,+,-,IFN-,IL-13,IL-4,+,+,IgE,allergen,Mast cell,B cell,Th2 cell,Th1 cell,Eosinophil,inflammatory mediators,IL-3, IL-4,IL-6,
2、 IL-9,allergen,Dendritic cell,Dendritic cell,bacteria,viruses,IL-3, IL-5 GM-CSF,I型变态反应,机制,IgE,IL-4,IL-5,Allergic response,Eosinophils,CD4,APC,CD80/86,Th2,T cell,Allergen,CD3,HLA,CD28,B-cell,+,+,Th3,IL-10,TGF-,b,-,-,Th1,IgG,IFN-g,B-cell,+,IT,IT,-,Durham, AAAAI, NY, 2002,Mechanism of type 1 Allergy re
3、lated to spec allergy vaccine (IT),（一）变应原检测 变态反应性疾病由变应原所引发，因此确定致病的变应原对防治此病有着十分重要的作用。 皮肤试验（简称皮试） 血清中特异性IgE(sIgE )检测吸入性过敏原，如尘螨、猫皮屑、犬皮屑、树花粉、草花粉、真菌和少数其他途径进入的药物（如青霉素等）,变态反应性疾病的诊断方法,1.皮肤试验,问世于1909年，具有简单、快速、低花费和高敏感性的特点，因而至今仍可作为变态反应疾病变应原诊断不可缺少的重要手段。皮肤试验主要分为皮内试验和点刺试验两种 。,（1）皮内试验,是目前应用最广、结果较可靠、测试剂量控制较严格的一种试验方
4、法，也是皮肤试验的经典方法。近年来，由于此法较繁琐，有一定痛感，不适合于小儿患者，已逐渐被点刺试验所取代。,（2）. 点刺试验 它是将抗原导入皮肤更浅表水平的一种简便的皮肤试验。,然后用消毒的点刺针在滴有抗原的皮肤中央进行点刺。点刺针是定型设计的，该针长3cm左右，端部针尖长1mm，以柄肩限制针刺皮肤的深度。用该针在皮肤上垂直压破表皮，1秒后将针提起，随即擦去皮试液。20分钟左右观察结果。试验时应同时作阴阳性对照。,在受试者前臂曲侧经消毒的 皮肤上，滴一滴变应原浸液,组胺当量级别： 以变应原及组胺所致丘疹面积比而定其反应级别,组胺所致丘疹面积,无反应或与阴性对照相同者为(-),为组胺丘疹25%
5、- 50%者为(+),50%- 100%者为(+),100%- 200%者为(+),200%以上者或 出现伪足者为(+),以（+），或以上判定阳性,运用点刺试验，受试者几乎没有疼痛，小儿患者也能接受，且快速、简便，适合于一次进行多个变应原的测定。 它所采用的变应原制剂稳定期长。 点刺针若操作正确，皮肤不会出血，而且深度一致，易于自身或异体对照。 皮试液立即被擦去，其进入皮肤的量和作用时间比较一致，用量易于控制而且节省。,不会出现非特异性的皮肤反应、具有特异性高、重复性和对比性好等优点，并且点刺试验几乎不会出现全身反应。 由于点刺试验不向皮内用力推入皮试液，避免了对皮肤的刺激，所以假阳性结果很少
6、，与其他检测特异性变应原的试验符合率较高，因此，有替代皮内试验法的趋势。 但由于点刺试验敏感性较皮内试验差，因而所需用的变应原浓度比皮内试验高出100倍。,皮试有时可出现假阳性和假阴性反应 假阳性的原因有： 变应原浓度太高； 变应原本身含有大量组胺或促组胺释放的物质； 溶剂的非特异刺激，如pH和渗透压有偏差，或甘油浓度过高； 患者皮肤敏感性过高，如划痕症阳性者。,假阴性的原因有： 受试者年龄过大或过小； 皮试变应原效价降低或注入变应原剂量太少； 药物因素的影响，如皮试前应用抗组胺类药物； 近期刚发生过强过敏反应，患者体内的过敏性抗体处于暂时“耗竭”状态。,国外目前推广将各种已包被了不同变应原并
7、密闭包装的点刺器具，使用时只要打开包装，无需再滴加变应原，并备有阴阳性对照。这种试验被称之为“干点刺试验”。该试验操作极为方便，且由于变应原处于干燥状态而不易被降解，故有效期长。,近年来强调变应原的标准化，即皮试液组分和各组分间的比例、含量、活性均恒定。随着分子克隆技术的发展，已有重组变应原问世，使皮试质量更加完善。,2. 血清特异性IgE检测,特异性IgE（sIgE）的测定在变态反应性疾病体外诊断中占有重要地位,现已被广泛使用。由于血中IgE含量甚微，仅为血中IgG的十几万分之一，sIgE含量则更微，因此采用一般的免疫学方法并不能检测到sIgE，需采用由标记上同位素或酶的抗人IgE抗体（作为
8、二抗）以及固相化的各种变应原所建立标记免疫分析技术进行测定。,sIgE固相化的变应原,变应原- sIgE复合物标记的抗人-IgE抗体,固相化的变应原-sIgE-标记的抗人IgE抗体的复合物,若标记物为同位素，则应用-计数仪测定结合的同位素活性；若标记物为酶，则通过酶催化底物产生的颜色，或发光（包括荧光），再经特定仪器灵敏地进行检 测。,sIgE检测的优点是： 不受对症治疗用药的影响，也不受过敏症状的干扰； 适用于皮试呈现假阳性的划痕症患者、严重皮炎不能作皮试者以及皮肤反应差的老年人及3岁以下儿童； 没有用昆虫、动物皮屑等变应原作皮试时产生的全身不适感。,缺点是： 费用较昂贵,需一定设备；费时，
9、一般需一天时间才能得出结果； 血清中存在非IgE抗体，如脱敏治疗过程中所产生的IgG类阻断抗体也可与变应原结合，干扰了IgE抗体与变应原的结合； 不是所有的变应原都适用，如药物和细菌等并不适用；,方法种类繁多，有酶免法、荧光酶免法、化学发光法等；所采用的固相化变应原的固相载体有96孔塑料板、圆形纸片、微孔薄膜、内含多孔弹性纤维素粒的帽状新型载体和蛋白芯片等；所用的结合抗人IgE抗体（作为二抗）的酶有辣根过氧化物酶、碱性磷酸酶、半乳糖苷酶和尿素酶等；应用的抗人IgE来源也不同，有单克隆抗体、多克隆抗体（包括从马、羊、兔来源）。,由于以上差异，以及抗人IgE抗体的亲和力和效价不尽一致，各厂家又备有
10、自己的标准品，因此所得的结果差异可很大，可比性尚不够满意。不同公司的商品试剂盒所得结果相互间很难作比较。目前公认荧光酶免法（ImmunoCAP；Pharmacia Diagnostics；Uppsalo, Sweden）是检测sIgE的金标准。,近年又有新方法（ADVIA Centaur）问世，即将抗人IgE抗体固相化，可特异的与待测标本中IgE相结合，防止了IgG的干扰。,对于摄入性过敏原，皮试结果远不及吸入性过敏原可靠，食物过敏的病史与皮试结果的符合率偏低，sIgE敏感度约在4050% 左右，这可能因食物品种的复杂性以及食物抗原经消化酶作用，加之烹饪等使食物抗原性与食物皮试抗原可能不一致有
11、关。此外，有些食物过敏并非由IgE所致，若仅检测sIgE并不会得出阳性结果。,3. 激发试验,激发试验是指人为得将一些变应原与靶器官（如鼻、支气管、消化道）相接触，继而通过靶器官功能的改变或所诱发产生的临床症状诊断变应原，并可了解器官的反应性。因为它在人体上进行，所以也属于体内试验。可按测试液进入途径分为眼结膜激发试验、鼻粘膜激发试验、支气管激发试验和口服食物激发试验。,目前公认口服激发试验中的双盲安慰剂对照食物激发试验（double-blind placebo control food challenge，DBPCFC）是诊断食物过敏的金标准，它的阳性和阴性预测值的正确度均95。,但此法需在
12、激发试验前一周回避可疑食物, 试验前16小时停用抗组胺药,需花费医生和患者（包括家属）数小时，且费用高，在激发试验时会使患者产生不适的过敏症状，甚至发生危及生命的严重休克反应，为了安全最好住院检测。,起始量1050毫克,安慰剂,可疑食物,无反应则按每30分钟加倍量,最大剂量为10g,出现临床症状（包括呼吸道、 消化道和皮肤）时即可判定阳性,4. 从 嗜碱性粒细胞水平检测变应原 嗜碱粒细胞在外周血中虽然含量甚微，但它表面存有高亲和力IgE受体可吸附IgE，当与所加入的变应原作用后，会脱颗粒和释放的组胺，因此可根据它被激活后胞浆内颗粒脱出不被染色的特点，或测定所释放组胺量，以及通过检测嗜碱粒细胞激
13、活时表面所表达的CD36以诊断变应原。,（二）其他辅助诊断方法,1.嗜酸粒细胞及其毒性蛋白的测定 分类计数或直接计数，EOS增高是过敏性炎症的特征，但某些寄生虫病、传染病和血液病时EOS也会增高。而局部体液（鼻分泌物、皮疱液、支气管肺泡液等）中的EOS增高可作为变应性疾病诊断的直接依据。,近年来开展诱导痰中EOS检测，即通过超声雾化吸入一定量的高渗盐水（通常为35氯化钠液）诱导下呼吸道产生分泌物,然后经涂片、染色及显微镜下进行EOS计数，算出其百分率。当百分率大于3时有诊断价值。,每个EOS胞浆中含有200个以上颗粒，当EOS被激活后会释放带有阳离子电荷的4种细胞毒性蛋白，包括嗜酸粒细胞阳离子
14、蛋白（eosinophil cathionic protein，ECP）、嗜酸粒细胞过氧化物酶（eosinophil peroxidase，EPO）、主要碱性蛋白（main basic protein，MBP）、嗜酸粒细胞蛋白X嗜酸粒细胞衍生的神经毒素（eosinophil protein X/eosinophil derived neurotoxin，EPX/EDN），其中应用较多的是ECP。,血清和痰液中ECP的测定对呼吸道过敏，特别是过敏性哮喘的诊断有重要意义。但在消化道过敏和特应性皮炎，ECP测定的意义远较呼吸道过敏逊色，有人认为仅30消化道过敏者血清中ECP会增高。,ECP测定的影响
15、因素也较多，诸如采血的试管、分离血清所需的凝血时间、凝血时的温度、离心分离血清的离心力、离心时间等，因此需对这些条件作以下严格规定：采血应使用玻璃管或SST管；不可使用塑料管。,应尽可能在20250C的室温条件下使血液凝集，温度升高可导致ECP值升高；采用玻璃管时，血凝时间严格控制在60土10分钟之内。当采用SST管时, 血凝时间在60120分钟均可；应固定离心的离心力（g）充分离心分离血清，以避免ECP值的假性升高。,2. 类胰蛋白酶（ tryptase）的测定,类胰蛋白酶是肥大细胞合成的中性蛋白酶，它包括和两个亚型，只有后者是过敏反应发生时肥大细胞被激活后从胞浆释放入血中的。,血浆类胰蛋白酶,过敏反应,1530 min,12h,1214h,研究证实，在过敏性鼻炎、哮喘、食物过敏以及一些药物过敏（如抗生素、麻醉药、造影剂等）类胰蛋白酶值增高，因此该指标有助于此类变应性疾病的诊断。此外，由于其性质稳定，在外周血存在时间长，可用于尸检时变应性疾病的诊断。但是在慢性荨麻疹缓解期，它的值并不增高，考虑由于该病的发病机制主要与T淋巴细胞有关。,
