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1、精品毕业设计（论文）P53 基因的研究进展姓 名 系 别 专 业 化生系 生物技术 导师姓名职称 完 成 时 间 精品目录 摘要Abstract1 P53 基因概述11.1 P53 基因的发现11.2 P53 基因的命名11.3 P53 基因的研究史21.4 研究动态 精品32 P53 基因结构和表达 42.1 基因的结构42.2 基因的表达52.3 基因的失表达63 P53 基因的功能73.1 阻滞细胞周期73.2 促进细胞凋亡7精品3.3 维持基因稳点83.4 抑制肿瘤血管生成83.5 信号通路94 P53 用于治疗方面104.1 基因疗法104.2 重建 P53 蛋白活性124.3 P5
2、3 治疗效果135 P53 基因最新研精品究14参考文献18致谢19精品摘要从 1979 年发现至今，P53 已经历经 30 多年的岁月，30 年说长不长说短不短，人们对 p53 基因的认识经历了癌蛋白抗原癌基因抑癌基因的三重转变，关于 p53 的文章层出不穷，每当我们觉得离p53 的真相接近之时才发现，p53 仍是我们最熟悉的陌生人。最近的Nature，PNAS 分别发表了 p53 最新研究进展，再度拉近了我们与p53 真相间的距离。关键字：P53 基因；肿瘤；基因治疗；重组蛋白精品AbstractFound so far in 1979, P53 has been through 30 y
3、ears of age, 30 years can be a long a short time, peoples understanding of the p53 gene has undergone cancer antigen protein - oncogene - tumor suppressor gene in the triple change, with regard to p53s Article after another whenever we feel the truth from the close of p53 only to find, p53 is still
4、our most familiar strangers. Recent Nature, PNAS published p53 were recent progress, we once again closer to the distance between the truth and p53.Keywords: P53 gene; tumor; gene therapy; recombinant protein精品1 P53 基因概述1.1 P53 基因的发现1979 年，在大家都在研究 SV40 病毒的癌蛋白时，好几个科研小组都无意中分别独立发现了 p53 蛋白。当时在伦敦癌症研究所(Lo
5、ndon Research Institute)工作的 David Lane 和 Lionel Crawford 发现，用感染了 SV40 病毒的动物血清与 SV40 大 T 抗原发生免疫沉淀反应时能共沉淀下来一个分子量约为 53kDa 的宿主细胞蛋白。另外三个科研小组也都在 1979 年同时发表文章报导了同样的结论，他们分别是法国的 Pierre May 科研小组、美国纽约的 Robert Carroll 科研小组和英国的 Alan Smith 科研小组。1.2 P53 基因的命名 每个实验室分别给这种分子量为 53 kDa 的蛋白质取了各自的名字，并且使用这些名字发表了很多论文，这样就造成
6、极大的混乱。1983 年在英国牛津举办的第一届国际 p53 蛋白研讨会上，来自各国的代表专门就这个蛋白的命名进行了讨论。经过一番激烈争论之后，大家一致认为，p53 这个名字最为合适，自此被保留下来一直沿用至今,其实 p53 这个名字根本就不是一个名字，只是因为这个蛋白在 SDS 聚丙烯酰胺凝胶电泳试验中表现出的分子量大约为 53 kDa 才因此而得名。后来大家才发现，这个表观分子量其实也只是一个大概的估计，因为该蛋白富含脯氨酸，所以在 SDS 聚丙烯酰胺凝胶电泳试验（）中的迁移率偏慢，表现出来的分子量要比它实际精品的分子量大。该蛋白的实际分子量只有 43.7 kDa，而小鼠体内 p53蛋白的分
7、子量会更小。但是谁又能够更改得了这个被大家使用已久的名字呢 .1.3 P53 基因三十年的发展史最初 10 年里 , p53 蛋白并非癌蛋白，而是抑癌蛋白 。 第二个 10 年里 , p53 蛋白实际上是一种转录因子 。它在细胞周期的调控、凋亡、发育、分化、基因扩增、DNA 重组、染色体隔离和细胞水平上的衰老相关。 在第三个 10 年里 ,又发现了 p53 蛋白的一些新功能，比如调控细胞代谢通路，调控与胚胎植入过程相关的细胞因子表达等等。 第四个“10 年计划” 目标是基于 p53 蛋白开发抗癌药物 。研究动态P53 基因是迄今发现与人类肿瘤相关性最高的基因，在短短的十多年里，人们对 P53
8、基因的认识经历了癌蛋白抗原，癌基因到抑癌基因的三个认识转变，现已认识 到，引起肿瘤形成或细胞转化的 P53 蛋白是 P53 基因突变的产物，是一种肿瘤促进因 子，它可以消除正常 P53 的功能，而野生型 P53 基因是一种抑癌基因，它的失活对肿瘤形成起重要作用。 P53 蛋白还分布于线粒体、核仁等结构，并且与细胞骨架有相互作用关系 .重组人 p53 腺病毒（）是一种基因工程改造过的活病毒，在结构上由两部分组成：一是抑癌基因 p53，二是载体。载体是改造过的无复制能力的腺病毒。就像火箭携带卫星上太空一样，这种精品携带 p53 的腺病毒特异感染肿瘤细胞，它能有效地将治病的p53基因转入肿瘤细胞内，
9、而对正常细胞无害。 今又生结合放疗治疗 53 例头颈鳞癌（），肿瘤完全消失率比单纯放疗的 46 例提高 2 倍。结合放疗治疗 45 例鼻咽癌（），肿瘤完全消失率比单纯放疗的 41 例提高 1.7 倍。结合放疗治疗了 4 例不能手术的期子宫颈癌都达到肿瘤完全消失。结合放疗、化疗或热疗治疗各种软组织肉瘤（）、消化系统腺癌、卵巢癌都取得一定的疗效，而这些病例都是经 3 大手段治疗失败的病人。使用今又生治疗恶性肿瘤，除出现暂时性自限性发烧外，未发现其他毒副反应。今后，全面的临床试验将在其他三级甲等医院有序展开，p53 基因治疗已从实验室走向临床，走向产业化。 p53 基因治疗肿瘤只是开了一个好头，为人
10、类征服癌症带来了新的希望和曙光 .精品2 P53 基因的结构及表达2.1 结构P53基因在人类、猴、鸡和鼠等动物中相继发现后，对其进行了基因定位，人类 P53基因定位于17P13.1，鼠P53定位于11号染色体，并在 14号染色体上发现无功能的假基因（），进化程度迥异的动物中， P53有异常相似的基因结构，约 20Kb长，都由11个 外显子和10个内含子组成，第 1个外显子不编码，外显子2、4、5、7、8、分别编码5 个进化上高度保守的结构域， P53基因5个高度保守区即第 1319、117142、17119 2、236258、270286编码区.正常的P53蛋白在细胞中易水解 ，野生型p53
11、蛋白的半衰期很短，因此用免疫组化法检测（）不到野生型p53蛋白，而突变型p53蛋白降解缓慢，代谢半衰期比较长，积聚在核内易于检测到，所以应用免疫组化检测的p53均为突变型，可作为多种癌的基因标志。P53蛋白N端有一个与转录因子相似的酸性结构域，与GAL4（）（GAL4是酵母转录启动蛋白 Gal4的基因）的DNA结合区重组时，融合蛋白能启动 GAL4操纵子转录，启动功能定位在P53第2040位密码子。P53细胞定位及反式启动功能提示，P53蛋白可能直接或通过与其他蛋白作用参与转录控制。进化程度迥异的动物中， P53 有异常相似的基因结构，约20Kb 长，都由 11 个外显子和 10 个内含子组成
12、 .P53 基因转录成精品2.5KbmRNA，编码 393 个氨基酸蛋白， 细胞内以四聚体形式存在。 分子量为 53KD。p53基因的多态性常见于4号外显子的72位密码子。而4号外显子附近这个区域编码接近中央疏水区域的氨基，决定蛋白的构象和DNA特异性结合。2.2 表达P53 基因转录成 2.5KbmRNA，编码 393 个氨基酸蛋白， 分子量为 53KD，P53 基因的表达至少受转录及转录后二种水平的调控 .在停泊生长或非 转化细胞中 P53mRNA 水平很低，但刺激胞液后mRNA 显著增加.持续生长的细胞，其 mRNA 水平不随细胞周期而出现明显变化，但经诱导分化后 mRNA 水平降低，部
13、分是转录后调控.P53 基因的转录由 P1、P2 二个启动子控制 .P1 启动子位于第一外显子上游 100250bp， P2 位于第一内含子内，在启动子中包含 1 个 NF1 蛋白结合位点和一个转录因子 AP1 相关 蛋白的结合位点，对正常 P53 基因的转录，不仅需要二个启动子的平衡作用，而且 P53 基因内含子也起作用，如内含子中有正调控作用，其调控有组织特异性 . 53 基因的表达至少受转录及转录后二种水平的调控 .P53 在正常细胞中表达量极低，但是当细胞受到低氧、紫外照射、化合物刺激等反应后表达量急剧增加并被启动，由于含有一段序列专一性 DNA 转录结合序列，作为转录因子， p53 可调节大量靶基因的表达，从而影响细胞周期阻滞、凋亡、分化、静息、DNA 损伤、精品血管生
