液相色谱知识总结

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1、液相色谱知识总结,液相色谱的工作原理,高效液相色谱（high performance liquid chromatography ）是色谱法的一个分支， 分离原理是：溶于流动相(mobile phase)中的各组分经过固定相时，由于与固定相(stationary phase)发生作用（吸附、分配、离子吸引、排阻、亲和）的大小、强弱不同，在固定相中滞留时间不同，从而先后从固定相中流出。,仪器安装要求,实验室应清洁无尘，无易燃，易爆和腐蚀性气体，排风良好并避免检测器受对流空气干扰，室温在 15-30(示差折光检测器时，室温变化不超过2)，室内温度应控制20%-85%范围内,工作台应平稳周围无强烈机

2、械震动和电磁干扰。工作台尽量避免靠近窗户，以免受阳光和对流风。工作台后方离墙最好留有半米的距离方便人员检查仪器后面板。,:电源电压为22010V，频率为500.5Hz最好配备稳压器(2kw以上)最好 实验室有专线，同一线路上不可有大的用电机械干扰 电源为三相电源，接地必须良好(此条非常重要)，泵，检测器，工作站，电脑接在同一个合格的接线板上 (温分每台仪器带一专用接线板),高效液相色谱仪Lc98型仪器系统,泵 进样阀 (定量环 ) 色谱柱 柱温箱 检测器 工作站,液路系统,10u过滤器 四氟管 螺母 四氟压环 泵头 比例阀 压力传感器 缓冲器 进样阀 色谱柱 流通池 反压器,色谱分析必备的六个

3、条件,流动相比例 流速 进样量 柱型 柱温 波长,液相分析实验的步骤及要求,配制流动相，过滤超声备用。 配制标样，制备样品。 开机预热，观察基线。 注射标品，保存谱图。 注射样品，保存谱图。 标样校正。 计算含量。,色谱柱的种类, 正反相色谱柱 配位体交换色谱柱 尺寸排阻色谱柱 离子交换离子色谱柱 亲和色谱柱 手性色谱柱,检测器种类,高效液相色谱的检测器很多，最常用的有紫外检测器、示差折光检测器和荧光检测器等。,紫外检测器,紫外检测器是液相色谱中应用最广泛的检测器，适用有紫外吸收物质的检测。在进 行高效液相色谱分析的样品中，约有80的样品可以使用这种检测器。根据朗伯比尔定律，样品浓度越大，产生

4、的信号越大，这种检测器灵敏度高，检测下限约为10-10 gml，而且线性范围广，对温度和流速不敏感，适于进行梯度洗脱。,示差折光检测器,示差折光检测器是根据不同物质具有不同折射率来进行组分检测的。凡是具有与流动相折射率不同的组分，均可以使用这种 检测器。如果流动相选择适当，可以检测所有的样品组分。示差折光检测器的优点是通用性强，操作简便；缺点是灵敏度低，最小检出限约为10-7g/ml，不能做痕量分析。此外，由于洗脱液组成的变化会使折射率变化很大，因此，这种检测器也不适用于梯度洗脱。,荧光检测器,在其他条件一定的情况下，荧光强度与物质的浓度成正比。许多有机化合物具有天然荧光活性，另外，有些化合物可以利用柱后反应法或柱前反应法加入荧光化试剂，使其转化为具有荧光活性的衍生物。在紫外光激发下，荧光活性物质产生荧光，由光电倍增管转变为电信号。荧光检测器是一种选择性检测器，它适合于稠环芳烃、氨基酸、胺类、维生素、蛋白质等荧光物质的测定。这种检测器灵敏度非常高，检出限达10-1210-13g/ml，比紫外检测器高23个数量级，适合于痕量分析。而且可以用于梯度洗脱。其缺点是适用范围有一定的局限性。,常见问题及解决,1 压力 2 基线不稳 3 谱图重现性不好 4 凝胶负峰的产生,