实验 细胞内DNA的显示

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1、细胞内DNA的显示,实验目的实验原理实验方法及步骤作业,一、实验目的,学习DNA的Feulgen染色方法 了解DNA的Feulgen染色反应原理 观察DNA的Feulgen染色结果,二、实验原理,DNA是生物的遗传物质，主要分布细胞核内，以染色质或染色体的形式存在。自从1924年Feulgen等建立了DNA-Feulgen染色方法以来，至今这种方法仍是DNA定量检测的重要方法之一。,DNA经稀盐酸(1mol/L)水解后，DNA分子中的嘌呤碱基和脱氧核糖间的键被打开，使脱氧核糖的一端形成游离的醛基。Schiff试剂中的无色品红与醛基反应形成含有醌基的化合物, 因醌基为发色团，故可呈现出紫红色。即

2、DNA经稀酸水解后产生的醛基具有还原作用，可与无色品红结合形成紫红色化合物，从而显示出DNA的分布。,染色原理,当DNA样本预先用热三氯醋酸或DNA酶处理，抽提去细胞中的DNA，染色后呈阴性反应。由此正面Feulgen反应的专一性。,三 实验方法及步骤, 制牛蛙血涂片,1. 小烧杯内加抗凝剂两滴；2. 3组（一排6个人）取一只牛蛙，杀死后解剖 找到心脏。3. 用剪刀尖剪开蛙心脏的心尖或右心耳，心脏血液 流出积在心脏后大凹洼处。4. 迅速用滴管吸取血液，转移到烧杯内，与抗凝剂 混合（血液很快会凝固，因此要迅速）5. 蛙血制涂片（每组7片）。,三 实验方法及步骤, 牛蛙血涂片室温干燥 正常反应片6片 对照片 1片 90水浴中三氯醋酸20min，蒸馏水略洗 稀酸水解:冷 1mol/L盐酸（桌面）3 min 60水浴中1mol/L盐酸分别5、7、9、10、12、15 min（6个时间 梯度） 冷1mol/L盐酸中略洗（片子插入上下沾几下） 染色: Schiff氏试剂暗盒避光30 min,亚硫酸水溶液I，II，III中脱色各45s 水洗：流水冲洗 蒸馏水略洗镜检,接上页“暗盒避光30min”,四、实验报告中包含以下内容：,1. 绘图表示牛蛙血细胞中DNA的分布。2. 讨论Feulgen反应的关键步骤的处理和实验结果的关系。,