《碱性磷酸酶的提取与纯化-theseparationandpurificationofakpppt培训课件》由会员分享，可在线阅读，更多相关《碱性磷酸酶的提取与纯化-theseparationandpurificationofakpppt培训课件（11页珍藏版）》请在金锄头文库上搜索。
1、碱性磷酸酶的提取与纯化,Exp.4 Extraction and Purification of Alkaline Phosphatase (AKP),（目的要求）,掌握用有机溶剂分离、纯化酶的原理和方法,Purpose,Master the principle and method of preparation and purification of enzyme by organic solvent,有机溶剂（乙醇、丙酮、正丁醇等）通过降低酶的S而使酶沉淀析出,（原理）,Principle,33% dissolve50% pellet30% dissolve60% pellet,ice a
2、cetone （冷丙酮）,ice ethyl alcohol（冷乙醇）,所用试剂的作用：,注意事项：,防止酶失活！,低温,慢慢滴加有机溶剂，并边加边充分搅拌,短时离心, 沉淀上清液 （弃、留 ）, 各步加入有机溶剂量的计算要准确！,（操作） 一次过滤,五次离心:,取10ml肝匀浆于三角烧瓶内,室温置10min，滤纸过滤,滤纸不要用水打湿 ！,注意,观察并记录现象,慢慢滴加，边加边搅,Methods,(一),（操作）,沉淀,B液,记录V1,悬液(V1),V=0.45(V1-0.2),记录V2,V=0.83V2,Methods,(二),沉淀,记录V3,V=0.5V3,记录V4,观察并记录现象,留取C液,Methods,（操作）,(三),(结果),（上交B1和C液保存）,Results,记录(V1-V4)的体积及各有机溶剂所加的量(以表格形式),Save B1 and C solution！,AKP溶液,ml,ml,有机溶剂,V1,V2,V3,V4,VC,V1，,V2，,V3，,V4，,记录体积,问题与讨论,有机溶剂提取与纯化酶的注意点及 操作中的注意事项和自己的心得体会。,
