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1、食品中细菌总数及 大肠菌群值的检测,实验十二,一、目的要求,了解食品卫生微生物学的重要性及其原理 学会食品中细菌菌落总数的测定方法和平板活菌计数法 3.学会食品中大肠菌群数的测定方法,二、基本原理,1、食品卫生微生物学指标包括细菌菌落总数、大肠菌群数和致病菌数量。前两者在日常检测中是必检项目。 2、细菌菌落总数是指水中或食品检样经处理后，在一定条件培养后，所得1 g或1 mL检样中所含细菌菌落的总数，其主要作为判定食品被污染程度的标志。 3、大肠菌群是肠道最普遍存在和数量最多的一群细菌、常将其作为人畜粪便污染的标志。水和食品中大肠菌群数是以每100 mL（g）检样中大肠菌群最可能数（MPN）表
2、示的。,菌落总数简介,菌落总数是指在被检样品的单位重量（g）、容积（ml）或表面积（cm2）内，所含能于某种固体培养基上，在一定条件下培养后所生成的菌落的总数。,菌落总数测定卫生学意义,判定食品被细菌污染的程度及卫生质量。,菌落总数测定流程(倾注平板法),检样1mL+9ml稀释液（磷酸盐缓冲液）适当十倍稀释样品选择23个连续适宜稀释度 各取1mL分别加入灭菌平皿内 （每个稀释度做两个平行）每皿内加入适量平板计数琼脂（PCA）35 ，48 2h菌落计数,菌落总数测定几点说明,由于检样中采用30/35有氧条件下培养，一些特殊营养要求的细菌、厌氧菌、微需氧菌、以及非嗜中温细菌，均难以反映出来。 鉴于
3、食品检样中的细菌细胞是以单个、成双、链状、葡萄状或成堆的形式存在，因而在平板上出现的菌落可以来源于细胞块，也可以来源于单个细胞，因而平板上所得菌落的数字不应报告活菌数，而应以单位重量、容积或表面积内的菌落数或菌落形成单位（colony forming units，CFU）报告。,大肠菌群,大肠菌群简介,大肠菌群系指一群能发酵乳糖、产酸产气、需氧和兼性厌氧的革兰氏阴性无芽孢杆菌。 大肠菌群不是细菌学上的分类命名，而是根据卫生学方面的要求，提出的与粪便污染有关的细菌，即作为食品、水体等是否受过人畜粪便污染的指示菌，这些细菌在生化及血清学方面并非完全一致。根据进一步的生化试验，可将这群细菌再分为大肠
4、艾希氏菌（俗称大肠杆菌）、弗氏柠檬酸杆菌、肺炎克雷伯氏菌和阴沟肠杆菌等。,卫生学意义,大肠菌群和大肠杆菌是评价卫生质量的重要指标，作为食品中的粪便污染指标。 食品中检出大肠菌群，表明该食品有粪便污染，既可能有肠道致病菌存在，因而也就有可能通过污染的食品引起肠道传染病的流行。大肠菌群数的高低，表明了粪便污染的程度，也反映了对人体健康危害性的大小。 大肠杆菌在外界存活时间与一些主要肠道致病菌接近，它的出现预示着某些肠道病原菌的存在，因此该菌是国际上公认的卫生监测指示菌。近年来，有些国家在执行HACCP管理中，将大肠杆菌检测作为微生物污染状况的监测指标和HACCP实施效果的评估指标。,初步发酵试验（
5、产酸产气否？）平板分离（伊红美蓝鉴别培养基）革兰氏染色（是否G-无芽孢杆菌？）复发酵试验（可疑菌落是否产气菌？）,检测程序,大肠杆菌测定EMB选择性分离鉴别,伊红和美蓝可抑制G+生长； 不发酵乳糖的细菌菌落无色透明； 能发酵乳糖，产酸力弱，菌落为棕色； 发酵乳酸，产酸能力强，菌落紫色，有绿色金属闪光,大肠杆菌测定EMB选择性分离鉴别,EMB平板典型大肠杆 菌菌落特征： 中心黑色或紫红色，有 或无绿色金属光泽,大肠杆菌革兰氏染色照片,MPN检索表 本表采用3个稀释度：1mL(g)，0.1mL(g）和0.01 mL (g)。每稀释度3管。,三、材料与器皿一)实验材料 超市购买的盒装巴氏杀菌牛奶 二）培养基 1、普通乳糖蛋白胨培养液 2、伊红美蓝培养基（EMB培养基）,五、实验报告 1、 简述实验过程。 2、计算实验结果。,六、思考题用倾注平板法和涂布平板法计数，其平板上长出的菌落有何不同？为什么要培养较长时间（48小时）后观察结果？大肠菌群的定义是什么？大肠菌群中的细菌种类，一般并非是病原菌，为什么要选用大 肠菌群作为食品被污染的指标？,
