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1、吸光光度法 邻二氮菲可见分光光度法测定铁,杜小弟 2008.3.30,邻二氮菲分光光度法测定铁一、吸收光谱概述 二、吸光光度法的实验方法 三、显色反应与实验条件 四、分光光度法的误差 五、实验内容 六、数据处理 七、注意,一、吸收光谱概述,1.1 电磁波谱,1.2 吸收光谱的产生,1.2.1 量子理论 光的波粒二象性 E = h v p = h 电子能级的不连续性 电子在不同能级之间跃迁时将吸收或发射相应能量的光子,1.2.2 原子光谱 线状光谱太阳大气的吸收光谱,1.2.3 分子光谱 分子轨道的能级比原子轨道的复杂得多，所对应的跃迁也更多，因此分子光谱的谱线通常很多。 在多原子分子中，众多谱
2、线十分接近，以至于重叠在一起不能分辨开，因而形成带状光谱。,1.3 吸收光谱与颜色,1.4 光吸收的基本定律,能量守恒： I0 = IT + IA + IR IR可以忽略时 T = IT / I0 A = lg 1/T 朗伯比尔定律 A = bc,二、吸光光度法的实验方法,2.1 目视比色法 通过眼睛观察比较溶液的颜色深浅，以确定待测物含量的方法 仪器简单，操作简便，速度快，灵敏度高 准确度不高，多用于限量分析,2.2 分光光度法,通过分光器件（如棱镜、光栅、滤光片等）获得单色光，以用于分析测定。 通过光电器件对光能量进行测量和记录。 通常使用分光光度计,2.2.1 分光光度法的理论基础,朗伯
3、比耳定律的实际应用：对于单色光在实验条件一定的情况下吸光度A与浓度c成正比 A = k c测得A后，即可计算出c,2.2.2 分光光度计,光谱仪器一般都由光源、单色器、吸收池、检测器四部分组成。,2.2.3 定量方法,根据 A = k c，在一定实验条件下，先测定已知浓度的标准溶液的A值，从而求得k；再测定待测样品的A值，从而求得c 标准曲线法：测定一系列标准溶液的A值，将A对c作图，拟合成一条过原点的直线，根据直线的斜率求得k,注意：仅当实验条件完全确定时k才为常数 “条件”包括 1、试样条件，如溶剂、基体成分、显色反应等 2、仪器条件，如仪器型号、波长、吸收光程等 3、外界环境，如气温、湿
4、度、供电 某些物质的摩尔吸光系数已有文献报道的数据，但一般只能作为参考，不能将其直接用于浓度的计算。,三、显色反应与实验条件,3.1 显色反应 对于吸收较弱的物质，可通过一定的反应使其完全生成另一种吸收较强的化合物，从而使测定的灵敏度明显提高。 对显色反应的要求a. 选择性好b. 反应完全，产物单一、稳定c.灵敏度高 (104)d.反应和产物的颜色差别明显(60nm),3.2 显色反应的条件,1、体系酸度 2、显色剂用量 3、显色时间 4、显色温度 5、溶剂,3.3 测定波长,选择原则：吸收最大，干扰最小,3.4 参比溶液,作用： 仪器调零 消除吸收池壁和溶液对入射光的反射 扣除干扰 选择：
5、试剂空白 试样空白 褪色空白,四、分光光度法的误差,4.1 偏离朗伯比耳定律 4.2 显色反应的误差 4.3 干扰组分和背景吸收 4.4 仪器测量误差 4.5 积累和传递误差,五、实验内容,5.1 原理在pH29的溶液中，Fe2+与邻二氮菲(phen)生成稳定的橘红色配合物Fe(phen)32+pH=5显色，max508nm，1.1104Lmol-1cm-1,5.2 步骤 标准系列溶液的配制：7个50mL容量瓶，分别加入0.00，2.00，4.00，6.00，8.00，10.00mL 10 gmL-1铁标准溶液，以及10.00mL未知铁试液，再分别加入1mL盐酸羟胺，2mL phen溶液，5m
6、L NaAc溶液，每加入一种试剂后都要摇匀。然后用水稀释至刻度，摇匀，放置10min 。 吸收曲线的制作和测量波长的选择：取标准系列中6号瓶溶液（即10.00mL铁标液），用1cm比色皿，以试剂空白（即0.00mL铁标液）为参比溶液，在380570nm之间，每隔一定波长测一次吸光度。以波长为横坐标，吸光度A为纵坐标，绘制吸收曲线。选择最大吸收波长作为测定Fe的波长。 标准曲线的制作：用1cm比色皿，以试剂空白为参比，在所选择的波长下，依次测量各标准系列溶液的吸光度。以含铁量为横坐标，吸光度A为纵坐标，绘制标准曲线。 未知样中铁含量的测定：在同样条件下测量未知液的吸光度。从标准曲线上查出并换算原试液中铁的含量 。,5.3 仪器操作,六、数据处理,绘制吸收光谱图 选择测量波长 标准系列及未知液的测定 标准曲线的绘制及试液中铁含量的测定,七、注意,只做1、2、6、7步 移液管专管专用，切勿混用 铁标浓度为10mg/L，取用量分别为0.00、2.00、4.00、6.00、8.00、10.00 mL，未知液取10.00 mL。 定容后要放置10min使显色反应完全 仪器开盖预热 每次改变波长后，光度计应重新调100% 保护好比色皿 数据记录格式规范,
