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1、凝集反应 安阳工学院 10生物技术,凝集反应（agglutination）,是指颗粒性抗原，例如细菌、红细胞、螺旋体、细胞性抗原，或可溶性抗原（或抗体）与载体颗粒结合成致敏颗粒后，与相应的抗体（或抗原）在适量的电解质存在的条件下，经一定时间后凝聚成肉眼可见的凝集现象。,根据凝集反应中抗原的性质，反应的方式分为： 直接凝集反应 间接凝集反应 间接凝集抑制反应 协同凝集反应,直接凝集试验： 玻片凝集试验：ABO血型 试管凝集试验：外斐试验，肥达试验 间接凝集试验： 正向间接凝集试验 反向间接凝集试验 间接凝集抑制试验 协同凝集试验 简介血凝试验 胶乳凝集试验 明胶凝集试验,凝集反应的特点,颗粒性抗
2、原 致敏颗粒 （可溶性抗原或抗体与载体颗粒结合） 电解质的存在 肉眼可见的凝集现象,凝集反应的发生分两阶段：,抗原抗体的特异结合 出现可见的颗粒凝集,直接凝集反应,细菌、螺旋体和红细胞等颗粒抗原，在适当电解质参与下可直接与相应抗体结合出现凝集，称为直接凝集反应。参加反应的颗粒性抗原称为凝集原（agglutinogen），抗体称为凝集素（agglutinin） 。 常见的方法有玻片法和试管法,玻片凝集试验ABO血型鉴定,玻片凝集试验为定性试验，一般用已知抗体作为诊断血清，与受检颗粒抗原，如菌液或红细胞抗原各加一滴在玻片上，混匀，数分钟后即可用肉眼观察凝集结果，出现凝集颗粒的为阳性。此法简便，快速
3、，适用于从病人标本中分离得到的菌种的诊断或分型，也可用于红细胞ABO血型的鉴定。,【实验原理】人类ABO血型抗原主要有A和B两种，根据红细胞表面这两种抗原的有无可把血型分为四种。据此，将抗A和抗B抗体分别与待测红细胞混合，抗A或（和）抗B抗体与红细胞表面上的相应抗原结合而引起红细胞凝集，据其凝集情况便可判定出受试者的血型。,【实验材料】1ABO标准血清：抗A分型试剂和抗B分型试剂各1支。21ml生理盐水的试管1支3. 一次性采血针1枚、白瓷板1块、一次性毛细吸管1支、75酒精棉球和灭菌干棉球,【实验方法】1.用酒精棉签消毒被检者手指尖端，以采血针刺破皮肤，稍加挤压，使血液流出。滴1至2滴血液于
4、含有生理盐水的试管内，摇匀，制成血球悬液。用干棉球止血。2取洁净载玻片1块，将抗A、B分型试剂分别加1滴于白瓷板的两个圆孔内。3. 用毛细吸管吸取血球悬液，在白瓷板的两个圆孔内各加一滴,并充分混匀，放置510分钟。4.观察红细胞有无凝集发生。如有凝集，可见红细胞凝集成块；无凝集，红细胞呈均匀分散。5.记录凝集情况，判定受检者的血型。,试管凝集试验,多用于半定量试验，原则上是用定量抗原悬液与一系列倍比稀释的受检血清混合，在保温静置后观察结果，以判定受检血清中有无相应抗体及其效价。 常有肥达试验，外-斐试验，交叉配血试验等。,间接凝集反应将可溶性抗原或抗体先吸附于适当大小的颗粒性载体表面（这种载体
5、与免疫无关），然后与相应抗体或抗原结合，在适量的电解质存在下，出现特异性凝集现象，称为间接凝集反应。根据载体的不同可将间接凝集反应分为：间接血细胞凝集试验、间接乳胶凝集试验（及间接乳胶凝集抑制试验）和金黄色葡萄球菌协同凝集试验等。,载体的种类及处理方法,常用载体有：红细胞（O型人红细胞，绵羊红细胞）、聚苯乙烯胶乳颗粒、明胶颗粒、离子交换树脂、活性炭、火棉胶等。 处理方法：颗粒表面的处理（醛化、鞣化、化学处理）,间接凝集反应的类型,1. 正向间接凝集反应 2. 反向间接凝集反应 3. 间接凝集抑制反应 4. 协同凝集反应,血凝试验,可在微量滴定板或试管中进行，将标本倍比稀释，一般为1:64，同时
6、设不含标本的稀释液对照孔。在含稀释标本1滴的板孔（或试管）中，加入0.5致敏红细胞悬液1滴，充分混匀，置室温12小时，即可观察结果。凡红细胞沉积于孔底，集中呈一圆点的为不凝集（）。如红细胞凝集，则分布于孔底周围。根据红细胞凝集的程度判断阳性反应的强弱，以凝集的孔为滴度终点。,血凝反应强度示意图,1（正向）间接凝集反应,用抗原致敏载体以检测标本中的相应抗体,2反向间接凝集反应,用特异性抗体致敏载体以检测标本中的相应抗原。,3间接凝集抑制反应,诊断试剂为抗原致敏的颗粒载体和相应的抗体，用于检测标本中是否存在与致敏抗原相同的抗原。检测方法为将标本先与抗体试剂作用，然后再加入致敏的载体，若出现凝集现象
7、，说明标本中不存在相同抗原，抗体试剂未被结合，因此仍与载体上的抗原起作用。如标本中存在相同抗原，则凝集反应被抑制。,间接凝集抑制反应原理示意图,4协同凝集反应,协同凝集反应与间接凝集反应的原理相类似，但所用载体既非天然的红细胞，也非人工合成的聚合物颗粒，而是一种金黄色葡萄球菌。它的菌体细胞壁中含有A蛋白SPA具有与IgG的Fc段结合的特性，因此当这种葡萄球菌与IgG抗体连接时，就成为抗体致敏的颗粒载体。如与相应抗原接触，即出现反向间接凝集反应。协同凝集反应也适用于细菌的直接检测。,间接凝集反应的应用,间接凝集反应具有快速、敏感、操作简便、无需特殊的实验设备等特点，而且能用于抗原或抗体的测定，因
8、此在临床检验中广为应用。,（一）抗原的检测,反向间接凝集试验可用于检测病原体的可溶性抗原，也可用于检测各种蛋白质成分。 间接凝集反应的敏感度虽较沉淀反应高，但低于新发展的各种标记免疫测定。 例如检测乙型肝炎表面抗原（HBsAg）的间接血凝试验敏感度一般在25ng/ml，对献血员的筛检已不符合要求。,（二）抗体的检测,可用于检测细菌、病毒、寄生虫等感染后产生的抗体。 例如间接血凝试验或明胶颗粒凝集试验用于检测抗人免疫缺陷病毒（HIV）抗体以诊断艾滋病、胶乳凝集试验用于检测抗溶血素O等。也有用于检测自身免疫性疾病的抗体，例如类风湿因子胶乳凝集试验、抗DNA抗体和抗甲状腺球蛋白抗体的间接血凝试验等。,
