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1、本科毕业论文（设计） 毕业论文 题目：油樟 DNA提取的研究 专业：生 物 科 学 学生姓名：沈志强 学生学号： 030601023 系 级 班：生物工程03 级 1 班 指导教师：罗通职称 : 教授 宜宾学院教务处制 宜 宾 学 院 Y I B I NUN I V ERSI T Y 宜宾学院本科毕业设计（论文） I 摘要 油 樟 是 樟 科 樟 属 植 物 ， 本 课 题 主 要 研 究 油 樟 根 茎 叶 DNA的 提 取 方 法 以 及 对 根 茎 叶 DNA提 取 效 果 进 行对 比 分 析 。油 樟 的 细 胞 内 含 有 大量 的 多 糖 、 多 酚 、 鞣 质 等 次 生 代
2、谢 物 , 针 对 这 一 情 况 本 研 究 在 常 规 CTAB 法 的 基 础 上 做 了 进 一 步 改 进 ， 成 功 提 取 出 了 高 质 量 DNA 。 做 的 改 进 主 要 有 ： 在 CTAB提 取 缓 冲 液 中 加 入 2gPVP 以 除 去 酚 类 杂 质 ； 将 DNA 样 品 溶 于 TE 缓 冲 液 中 保 存 时 在 样 品 中 加 入 3 lRNaseA ，以除 去 RNA 。 用 改 进 CTAB法 提 取 的 DNA得 率 和 纯 度 都 较 高 。用 改 进 CTAB法 提 取的 油 樟 根 DNA得 率 小 于 油 樟 茎 DNA的 得 率 小 于
3、 油 樟 叶 DNA得 率 ，由 于 植 物 各 组 织 器 官 的 基 因 组 DNA是 相 同 的 ，因此 宜 用 更 易 研 磨 成 细 粉 的 油 樟 嫩 叶 来 提 取 油 樟 DNA ， 用 做 科 研 和 教 学 。 关 键 词 ： 油 樟 ； DNA ； CTAB（ 十 二 烷 基 三 甲 基 溴化 铵） ；电 泳 ；光 吸 收 宜宾学院本科毕业设计（论文） II Abstract Cinnamomum longepaniculatum belongs to laurel family and Lauraceae species. The topics studied main
4、ly the method of extracting DNA and compared the DNA extracting methods from roots, branches of Cinnamomum longepaniculatum . Cells of Cinnamomum longepaniculatum contain a large number of polysaccharides, polyphenols, tannins, and other secondary metabolites. Based on conventional CTAB method, a se
5、rial of improvements were carried out and high-quality DNA was successfully obtained. The main improvements are: 2g PVP was added into CTAB extraction buffer to remove impurities phenols; 3l RNaseA into the samples when DNA samples preserved in TE buffer to remove RNA. Improved CTAB extraction of DN
6、A yield and purity was higher. The DNA yield using improved CTAB extraction was roots stems leaves. Because genomic DNA is same, it is easier to extract DNA from leaves of Cinnamomum longepaniculatum for research. Keywords: Cinnamomum longepaniculatum; DNA; CTAB method of DNA; electrophoresis; absor
7、bing value of light 宜宾学院本科毕业设计（论文） III 目录 摘要 . . I Abstract . I I 第 1 章 绪论 . 1 第 2 章 油樟根茎叶 DNA 的提取方法 . 3 1. 材料、药品、仪器 . . 3 1.1 材料 . . 3 1.2 主要试剂溶液 3 1.3 主要仪器设备 . . 4 2. 实验方法和步骤 . . 4 2.1 常规方法的提取 . . 4 2.2 改良 CTAB 法 . 5 2.3 油樟根、茎、叶 DNA 提取的比较方法 . . 6 3. 结果及分析 . . 6 3.1 0.8% 琼脂糖凝胶电泳结果及分析. . 6 3.2 紫外光谱分
8、析 . . 8 4. 讨论 . 10 4.1 CTAB 法的基本原理 10 4.2 几种主要试剂的作用与对比. 10 4.3 方法的探索及改进 . 11 4.4 注意要点 . 12 4.5 实验过程中遇到的问题及对策. 12 5. 总结 . 13 5.1 . . 13 5.2 . . 13 5.3 . . 13 参考文献 . 14 致谢 . 15 文献综述 16 宜宾学院本科毕业设计（论文） 1 第 1 章绪论 图 1-1 油 樟 如 图 1-1 油 樟 Cinnamomum longepaniculatum(Gamble) 是 樟 科 樟 属 植 物 。高 大 乔 木 ，叶 互 生 ，卵 形
9、 、椭 圆 形 或 短 圆 形 ，先 端 长 渐 尖 或 急 尖 ， 基 部 楔 形 至 近 圆 形 ， 长 5.5-12cm， 宽 3-6 cm， 幼 时 即 无 毛 ， 腹 面 暗 绿 色 ，有 光 泽 ，背 面 粉 绿 色 ，通 常 羽 状 脉 ，中 脉 两 面 凸 起 ，侧 脉 约 5-6 对 ，两 面 凸 起 ，脉 腋 腹 面 泡 状 隆 起 ，背 面 有 小 窝 孔 ，孔 内 有 短 毛 ，横 脉 和细 脉 背 面 较 明 显 ，叶 柄 长 2-3 cm，无 毛 。圆 锥 花 序 腋 生 ， 纤 细 ， 疏 散 ， 通 常 长 10 cm 以 上 ， 无 毛 ， 花 梗 长 1-3
10、 cm， 无 毛 ； 花 被 长 约 2 mm， 外 侧 无 毛 ， 内 侧 密 被 毛 ， 裂 片 卵 形 ， 长 1.5 mm ， 花 后花 被 上 部 自 花 被 管 的 顶 端 处 整 齐 环 裂 脱 落 ；雄 蕊 长 约 1 mm ，被 柔 毛 ，第 3 轮 的 花 丝 基 部 有 1 对 具 短 柄 状 的 腺 体 ，退 化 雄 蕊 长 约 0.5 mm ，被毛 ， 近 心 形 ；雌 蕊 无 毛 ，子 房 近 圆 球 形 状 ，花 柱 较 子 房 为 长 ，柱 头 小 ，盘 状 。 果 阔 倒 卵 状 ， 顶 端 平 或 微 凹 ， 歪 斜 ， 稍 扁 ， 长 9 mm， 直 径
11、8 mm， 果 托 碟 状 ， 全 缘 ， 直 径 约 3.5 mm ； 果 梗 长 4-5 mm ，向 上 增 粗 。 花 期 4-5 月 ； 果 期 8-9 月 1 。 油 樟 在 四 川 有 大 量 分 布 ， 产于 叙 永 、 宜 宾 、 屏 山 、 娥 眉 、 雅 安 、 邛 崃 等 地 。宜 宾 是 油 樟 的 分布 中 心。在 经 历 了 许 多 坎 坷 之后 ，油 樟 终 于 闪 现 出 了 它 那 金 子 般 的 光 芒 。1951 年修 建 成 渝 铁 路 时 ，油 樟 被 成 批 地 砍 伐 用 作 枕 木 ；1958 年 大 办 钢 铁 时 ，油 樟 竟 老 嫩 不 拘
12、 ，被 用 作 烧 泡 炭 的 燃 料 ；1960 年 生 活 困 难 时 ，为 了 熬 煮 樟 油 ，对 幸 存 的樟 树 进 行 了 宜宾学院本科毕业设计（论文） 2 掠 夺 性 的 采 摘 。 这 些 事 实 都 导 致 珍 贵 的 油 樟 资 源 招 到 了 大 规 模 的 破 坏 ，幸 好 在 1978 年 十 一 届 三 中 全 会 以 来 ，各 项 林 业 政 策 得 到 了 落 实 ， 油 樟 林 也 逐 渐 得 以 恢 复 。 1978 年 樟 油 产 量 增 长 为 356t ， 比 1959 年 的 305 t ， 增 长 16.7% 。 到 1985 年 宜 宾 县 已
13、 有 油 樟 林 35130 亩 ，采 叶 油 樟 树 达 到 369 万 余 株 ， 全 县 树 龄 达 到 100 年 以 上 的 油 樟 64 株 ， 200 年 以 上 的 9 株。 1986 年 宜 宾 县 被 列 为 四 川 油 樟 基 地 2 ， 由 于 大 力 发 展 油 樟 ， 到 1995 年 ， 宜 宾 全 县 油 樟 面 积 由 1980 年 的 0.28 万 hm2发 展 到 0.77 万 hm2， 樟 油 产 量 从 1980 年 的 400 多 吨， 增 加 到 1995 年 的 1200 t ， 占 全 国 同 类 产 品 产 量 的 75 %， 占 全 省 产
14、 量 的 90 %， 产 品 畅 销 日 本 、 德 国 、 法 国 、 美 国 等 50 多 个 国 家 和 地 区 ， 为 国 家 创 汇 450 多 万 美 元 3 。宜 宾 县 被 称 为 全 国 保 存 和 发 展 最 好 的 天 然 香 料 油 源 基 地 。 樟 油 粗 加 工 的 主 产 品 1. 8- 桉 叶 油 素 ， 被 称 为 “ 中 国桉 叶 油 ” 4 ， 1984 年 被 评 为 四 川 省 优 质 产 品 。 1999 年 ， 为 适 应 西 部 大 开 发 的 形 势 ， 增 加 长 江 上 游 绿 色 植 被 ，加 大 力 度 保 护 油 樟 树 这 一 独
15、 特 资源 ，建 设 全 国 最 大 的 木 本 香 料 油 基 地 ， 宜 宾 县 又 决 定 到 2001 年 ， 用 3 年 时 间 ， 再 营 造 0.30 万 hm 2 油 樟 树 基 地 。油 樟 树 具 有 生 长 快 、材 质 好 ，萌 发 力 强 、 干 形 通 直 ，树 形 美 观 等 特 点 ，叶 、 枝 、 根 、 茎 、 花 、 果 富 含 芳 香 油 ，是 提 炼 天 然 香 料 的 优 良 树 种 ，也 是 目 前 全 国 保 存 和 发 展 最 好 的 天 然 香 料 油 源 。它 含 有 18- 桉 叶 油 素 、 - 萜 品 醇（ 松 香 醇 ）和 香 穗
16、烯 等 40 多 种 成 分 ，经过 深 度 加 工 可 以 提 取 多 种 重 要 的 天 然 单 离 原 料 ， 是 国 防 、 轻 工 、 香 料 、 医 药 和 高 级 电 镀 工 业 的 稀 有 原 料 5 。 特 别 是 从 中 提 取 的 18- 桉 叶 油素 物 性 稳 定 、芳 香 纯 正 ， 在 国 际 贸 易 中 被 称 为 “ 中 国 桉 叶 油 ” ， 在 世 界 各 国 都 属 免 检 产 品 。 为 了 充 分 开 发 利 用 油 樟 这 一优 势 资 源 ， 国 家 科 委 于1996 年 将 其 列 入 了 国 家“ 星 火 计 划 ” 和 名 特 优 经 济 林 商 品 基 地 建 设 项 目 6 。 宜 宾 县 地 处 金 沙 江 和 岷 江 下 游“ 金 三 角 ”地 带 ，是全 国 最 大的 油樟 基 地 ， 樟 油 产 量 占 全 国 的 75%，占 四 川 的 90%，被 中 外 客 商 誉 为“油 樟 王 国 ” 。 大 力 发 展 油 樟 ，对 农 民 致
