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1、毕业设计 (论文)课 题 名 称枯草芽孢杆菌培养条件的优化研究2014 年 5 月 15 日1 目录摘要 2Abstract 31 前言 42 材料与方法 72.1 实验试剂与材料 72.2 主要仪器与设备 72.3 试验方法 83 结果与分析 83.1枯草芽孢杆菌的标准曲 93.2 单因素试验结果 10 3.3 正交试验结果分析 错误！未定义书签。4 结论和讨论 15 5 参考文献 16 6 致谢 17 2 枯草芽孢杆菌培养条件的优化研究摘要本文通过单因素实验和正交试验研究枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)的发酵条件（PH 、温度、时间、接种量）对枯草芽孢杆菌生长量的影响。本
2、实验的枯草芽孢杆菌在 BPG液体培养基上培养， 通过单因实验及正交试验得到最佳的发酵培养条件为：初始 pH 7.0 ；温度 35；时间 20h；接种量为 5%。在此培养条件下的活菌液量为3.785 107CFU/ml ，相比在LB 培养基下培养时的活菌液量3.2 106CFU/ml 提高了 10 倍左右。关键字：枯草芽孢杆菌；正交试验；生长量3 Optimization study of bacillus subtilis culture conditions Abstract In this paper, we study Bacillus subtilis (Bacillus subtil
3、is) fermentation conditions (PH, temperature, time, quantity of) the impact on the growth of Bacillus subtilis. The experiment of bacillus subtilis in combined cultivated in liquid medium, is obtained by single for experiment and the orthogonal experiment the best fermentation culture conditions as
4、follows: the initial PH 7.0. Temperature 35 ; Time 20 h; Inoculation quantity was 5%. Under the condition of the cultivation of the best amount of bacterium fluid is 3.785 x 107 cfu/ml, compared to when cultured in LB medium under the microbial quantity: 3.231 x 107 cfu/ml by about 10 times. Key wor
5、ds: Bacillus subtilis; Culture conditions; increment 4 1 前言枯草芽孢杆菌 (Bacillus subtilis)是一种好氧性产芽孢杆状细菌(G+)1，其基本特征：杆菌：一般 0.7-0.8 2.0-3.0 m，电子显微镜测量为0.5-0.6 1.1-3.5 m，着色均匀，无荚膜，周生鞭毛，能运动。革兰氏阳性菌，芽孢0.60.9 1.01.5微米，椭圆到柱状，位于菌体中央或稍偏，芽孢形成后菌体不膨大。菌落表面粗糙不透明，污白色或微黄色，在液体培养基中生长时，常形成皱醭。由于枯草芽孢杆菌是需氧菌在水质净化2、工业发酵中发挥着重要的作用，人们
6、开始致力于研究枯草芽孢杆菌应用于这些方面的研究。关于枯草芽孢杆菌的研究与应用已有 100 多年的历史，早期大部分工作集中在形态观察、分类鉴定、生理机制、 功能发掘及防治等方面。 近年来，对枯草芽孢杆菌的研究渐进到遗传学与分子生物学领域， 研究内容体现在特定功能基因的寻找并克隆到需要的物种中或者通过诱变、 基因工程等手段对枯草芽孢杆菌生产菌进行遗传改造等。但目前对该菌种的研究仍然处于实验室的初始阶段的水平。但是枯草研报杆菌有一系列的优良性状吸引这一些的科学家的目光，他们相信随着经济的发展， 枯草芽抱杆菌资源对在工、农、医等方面有重大应用价值，开发利用更具有重要意义。枯草芽孢杆菌是一类广泛分布于各
7、种不同生活环境中的革兰氏阳性杆状好养型细菌，可以产生内生芽孢，耐热抗逆性强3，在土壤和植物的表面普遍存在，同时还是植物体内常见的一种内生菌，对人畜无毒无害， 不污染环境。 由于枯草芽孢杆菌生长速度快，营养需求简单，易于存活，定殖与繁殖，无致病性，并可以分泌多种酶和抗生素4,5，而且还具有良好的发酵基础，用途十分广泛，国内外有众多研究单位和学者对此菌进行了大量研究，也积累了丰富的研究资料。 通过对枯草芽孢杆菌系列的研究，一方积累枯草芽孢杆菌规律信息为以后开发提供依据；另一方面也可了解芽孢杆菌与生态环境间的相互关系，为芽孢杆菌资源的利用奠定基础6 。现在对于枯草芽孢杆菌的主要运用方面：（1）在水产
8、养殖中的应用随着水产养殖业的迅猛发展和集约化经营程度的不断提高，养殖水体污染日趋严重，许多养殖池中有害藻类及病菌大量繁殖，水质条件不断恶化， 其后果影5 响到了水产品安全和产业的可持续发展7。利用常规药物防治方法，不但易加重水质恶化程度， 成本也较高， 而利用微生物制剂改善养殖水体环境受到人们越来越多的关注。 枯草芽孢杆菌是一种好氧的革兰氏阳性菌，在自然界广泛存在， 生命力极强，代谢旺盛，对人畜无害，不污染环境，具有广谱的抗菌活性和极强的抗逆能力8。枯草芽孢杆菌能有效的降解水体中的氨氮、亚硝酸盐和硫化物，达到净化水质的目的。 因此，枯草芽孢杆菌在养殖水体的生物修复方面得到了广泛的应用9,10。在水体或饲料中添加枯草芽孢杆菌制剂，可以有效抑制或杀灭水体中或养殖生物体内的某些有害致病菌， 并且能增强有益菌的群落， 而达到防治水产疾病的目的；芽孢杆菌可以降低水体中硝酸盐、亚硝酸盐的含量， 从而起到改善水质的作用11；芽孢杆菌还可以通过消灭病原体或减少病原体的影响来改善水质；枯草芽孢杆菌对水产中的弧菌、大肠杆菌和杆状病毒等有害微生物有很强的抑制作用，有效预防水产动物肠炎， 烂鳃等疾病。 同时枯草芽孢杆菌也可以分泌大量几丁质酶的功能。 几丁质酶可分解病原真菌的细胞壁而抑制真菌病害，分解养殖池中的有毒有害物质，
