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1、湛江安度斯生物有限公司,1,唐丽娟:15018750050,内容目录,一、真菌感染概,一、真菌感染概述 二、真菌与葡聚糖 三、鲎试验与G试验 四、G试验临床意义 五、“生物探针”介绍 六、“生物探针”操作流程 七、“生物探针”的临床比对 八、G试验的影响因素,湛江安度斯生物有限公司是查尔斯河公司设在中国的子公司，是中国细菌内毒素检测试剂的最大供应商，也是中国细菌内毒素检测领域的技术领导者和创新先锋；世界著名的美洲鲎试剂（LAL）生产企业美国CR恩度斯弗公司（Charles River Endosafe, Inc.），也是查尔斯河实验室公司的子公司,湛江安度斯的简介,Charles River
2、Laboratories,作为全球最大的实验动物公司，Charles River Laboratories一直是全球实验动物商业化繁育和市场供应的领导者，拥有分布在北美、欧洲和日本的15个分设施和遍布全球的销售网络；已成为一个生物医学前临床产品和服务的主要供应商。,库珀博士,C R Endosafe（恩度斯弗） 公司是美国著名三大鲎试剂企业之一,有国际知名权威学者詹母斯 弗.库珀博士(Dr. Jammes F.Cooper)创建。库珀博士是细菌内毒素检查研究领域的先驱。1971年他与Lein 及 Banger等人提出以鲎实验法检查热源，并率先证明了鲎实验法作为注射药品热源检查的敏感方法的价值。
3、1972年他协助美国(The parentral Drug Association) 的鲎试剂.他一直主持着美国非经肠道药物协会(The parenteral Drug Associatoin)的鲎实验应用促进工作,以及每年一届的美国南卡罗纳州查尔顿的鲎实验学术会议。,库珀博士创建的 Endosafe 公司现以成为美国鲎试剂(LAL)市场最大的供应商.该公司的鲎试剂以其良好的稳定性,广泛的适用性以及优越的抗干扰性能享誉国际医药工业界.,一、真菌感染概述,真菌感染 ：真菌感染在通常情况下我们最常见的是表皮的感染，例如头癣、体癣、甲癣等，由于侵犯的部位大都表浅，不会导致严重问题，因而叫浅部真菌感染
4、； 深部真菌感染则是真菌突破人体天然屏障导致组织脏器的感染。,7,美国死于感染性疾病的十大原因,真菌感染的死亡率上升了3.4倍 （死亡率：0.72.4 /100,000）,8,EORTC/MSG原称侵袭性真菌感染（IFI），修订后改称IFD； 是指真菌侵入人体，在组织、器官或血液中生长、繁殖，并导致炎症反应及组织损伤的疾病。 是真菌感染致死的重要原因,侵袭性真菌病(Invasive Fungal Disease ,IFD),9,侵袭性真菌病已变得越来越常见,10,侵袭性真菌感染的诊断标准,G试验可作为拟诊病例的微生物学标志,11,主要可引发侵袭性真菌病的疾病,肿瘤类： 胃癌，肝癌，肝内胆管癌，
5、肺癌，多发性骨髓瘤，白血病，恶性淋巴瘤,12,二、真菌与葡聚糖,2018/9/2,13,1. 某些真菌的细胞壁结构,2. 细胞壁含有葡聚糖组分的真菌： （1）是导致侵袭性真菌病(IFD)的常见真菌。 （2）细胞壁有葡聚糖组分,2018/9/2,14,这类真菌有： 念珠菌 曲霉菌 耶氏肺孢菌 镰刀酶 隐球菌接合菌.,2018/9/2,15,北京301医院尸检结果（7797年） 肺真菌病发生率3.7 (38/1027 ),隐球菌病、接合菌病占真菌病比例不高,16,当人体深部受这类真菌感染时，真菌在代谢过程会不断释放出葡聚糖。检查患者的血液（血浆或血清），会发现葡聚糖含量明显高于非感染者。因此，葡聚
6、糖可作为具有这种细胞结构的真菌感染标识物。,2018/9/2,17,三、鲎试验与G试验,1. 鲎（Hu，后）试验,2018/9/2,18,鲎是地球上最古老的海洋生物之一，已有三亿多年的历史，人们称它为“活化石”。,雌,雄,2018/9/2,19,研究发现，鲎的循环细胞（阿米巴细胞）中含有一种特殊的凝固酶原。这种凝固酶原可以被自然界广泛存在的两种物质激活为凝固酶，从而导致一系列的生化反应。这两种物质就是脂多糖(Lipopolysaccharide, LPS)和(1-3)-D葡聚糖。,2018/9/2,20,人们利用鲎的阿米巴细胞溶胞物制备成了鲎试剂（LAL或TAL）。通常称使用鲎试剂检测脂多糖（
7、LPS）或-葡聚糖（-G）的试验为鲎试验（LAL Test or TAL Test）。,2018/9/2,21,2. 鲎试验反应机理,22,3. 鲎试验的应用,应用I：细菌内毒素检查 (Bacterial Endotoxin Test, BET),2018/9/2,23,研究发现，革兰氏阴性细菌的细胞壁都含有一种叫内毒素(Endotoxin)的组分。,2018/9/2,24,内毒素是能够引起哺乳动物原反应的主要热原物质。革兰氏阴性细菌在新陈代谢过程不断地向环境释放内毒素，污染药品和医疗器械。因此注射药品和医疗器械都要求必须作细菌内毒素检查（BET）。,2018/9/2,25,应用II： 革兰氏
8、阴性菌脂多糖检测,2018/9/2,26,细菌内毒素的化学成分是脂多糖。当人体深部感染革兰氏阴性菌时，细菌会在体内不断释放内毒素（脂多糖）。检查患者的血液（血浆）、腹水、尿液及脑脊液，会发现脂多糖明显高于非感染者。脂多糖检测对败血症、严重器官衰竭的快速辅助诊断有临床价值。,2018/9/2,27,应用III： 真菌(1-3)-D葡聚糖检测,2018/9/2,28,医学上通常把用于检测真菌葡聚糖的鲎试验称为G试验。这是取葡聚糖的英文名称Glucan的首字母来命名该试验。,2018/9/2,29,需要指出的是，隐球菌的细胞壁虽然有葡聚糖组分，在隐球菌感染患者的血液中却检测不出葡聚糖异常。这可能与隐
9、球菌具有特殊的细胞被膜有关。因此G试验不适合对隐球菌感染的检测。,2018/9/2,30,四、G试验临床意义,31,G试验的临床意义,32,G试验的临床意义,33,34,35,G试验应用科室,36,五、“生物探针”介绍,37,“生物探针”介绍,38,“生物探针”介绍,39,“生物探针”介绍,40,“生物探针”介绍,41,“生物探针”功能,快速定量的临床检测方法，帮助临床医生早期诊断目前常规方法难以判断的侵袭性真菌感染、革兰氏阴性菌感染，便于对感染的早期诊断、早期治疗及对治疗的疗效判定。,可检测标本 ：血浆、血清、尿液、腹水、脑脊液等,42,六、“生物探针”操作流程,43,“生物探针”操作流程,
10、44,“生物探针”操作流程,45,“生物探针”操作流程,46,“生物探针”操作流程,47,“生物探针”操作流程,48,“生物探针”操作流程,49,“生物探针”操作流程,50,“生物探针”操作流程,数据可接入LIS系统等,51,侵袭性真菌感染的临床检测方法对比,52,产品特点,灵敏度高 快速,检测方法严谨,准确性高,特异性好,临床符合率高,53,七、“生物探针”的临床比对,J厂家的-G试剂、LPS试剂均无特异性,54,最低检测限最低浓度重复性,厂商 安度斯 最低检测限 10pg/ml 编号 检测结果(pg/ml) 阴性(pg/ml) 检测日期 1 10.3 1.3 3.6 2 10.1 3 11
11、.0 4 9.8 5 9.8 6 10.8 7 10.1 8 10.0 9 9.6 10 10.3 CV=6.85% 11 10.0 12 9.8 13 10.7 14 9.8 15 12.4 16 10.3 17 9.7 18 9.6 19 9.4 20 9.9 21 9.6,批内精密度,批间精密度,“生物探针”的临床比对,评价结论：安度斯产品的综合性能具有明显优势。,58,八、G试验的影响因素,2018/9/2,59,1. 检测试剂的灵敏度 1.1 葡聚糖的量值与标准品,2018/9/2,60,2018/9/2,61,目前G试验中葡聚糖采用的单位为重量单位“pg”。pg是一个非常非常微量的
12、单位。因此G试验是一项非常灵敏的生物检测。当然，越是灵敏精确的检测，越容易受到干扰。,目前葡聚糖没有公认的标准物质！ 没有国际标准品，没有国家标准品，也没有公认的行业标准品，只有企业的标准品（质控品）,2018/9/2,62,各企业的葡聚糖标准品的来源不一。有的来自茯苓多糖，有的来自香菇多糖，有的来自海藻多糖。不同来源的葡聚糖对鲎试剂的活性不同。 各企业的葡聚糖标准品效价不一。你的1pg可能相当我的10pg。相互之间无可比性。,2018/9/2,63,无统一的标准品导致不同厂家试剂盒有不同的参考值。有的是10pg为阳性，有的是100pg为阳性。 对参考值的表示各厂家也有所不同。有的以全血含量来
13、表示，有的以检测浓度来表示。,2018/9/2,64,1.2 试验器具对G试验有重要的影响！ 葡聚糖是自然界广泛存在的一种物质，极容易污染到试验器具。 葡聚糖是一种非常稳定的物质，通常的蒸煮高压、辐照等灭菌手段不能彻底破坏葡聚糖。很难找到真正意义的无葡聚糖的器具。,2018/9/2,65,G试验使用到的实验器具： 采血针 采血管（瓶） 反应试管 移液器具（吸头） 最主要的污染来自采血管！,2018/9/2,66,重要建议 最好使用厂家供应的专用采血管（瓶） 其次是用经厂家检测合格的采血管 不能使用未经检测的实验器具,2018/9/2,67,尊重科学，为患者负责！无效试验是对患者最大的危害！,2
14、018/9/2,68,2.试剂的生物特异性 如前所述，G试验的检测试验就是鲎试剂。鲎试剂可以对两种物质反应，用于不同的用途。如下图表示。 检测内毒素/脂多糖 用于革兰氏阴性菌检测 鲎试剂 检测葡聚糖（G试验） 用于真菌检测,2018/9/2,69,在检测试剂制备上，应根据试剂的用途制备生物特异性强的检测试剂，如： 用于检测细菌脂多糖的试剂，不能对葡聚糖产生反应。 用于检测真菌葡聚糖的试剂，不能对脂多糖产生反应。,2018/9/2,70,遗憾的是，由于技术的原因，并不是所有厂家的试剂都具有生物特异性。 有的试剂盒对LPS和-G都反应。 有的试剂盒对非检测对象低浓度时可能不反应，较高浓度时会反应。
15、无生物特异性的试剂盒不能区分细菌感染和真菌感染，不具有临床检测价值！,2018/9/2,71,2018/9/2,72,鉴别试剂盒是否具有生物特异性的方法：用该试剂盒与LPS/-G的标准品（质控品）反应。,3. 某些药物对G试验的影响 3.1 临床应用发现，注射过香菇多糖注射液的供试者作G试验，其血液中葡聚糖含量会显著增高。因此需要作G试验的供试者应在24小时内避免使用香菇多糖注射液。,2018/9/2,73,3.2 临床应用发现，使用过脂肪乳的供试者作G试验（包括作LPS检测），反应曲线形态会发生异常，致使检测值非常高。因此需要作G试验的供试者应在24小时内避免使用脂肪乳。,2018/9/2,74,-G检测的正常反应曲线,2018/9/2,75,100 pg/mL,500 pg/mL,5000 pg/mL,正常人,3.3 正常反应曲线与异常反应曲线的比较,-G检测的异常反应曲线,2018/9/2,76,61000 pg/mL,达限时间250,LPS检测的正常反应曲线,2018/9/2,77,0.05EU/mL,0.25EU/mL,2.5 EU/mL,正常人,LPS检测的异常反应曲线,2018/9/2,78,
