药物含量测定方法与验证

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1、第四章 药物的含量测定方法与验证,定量分析方法的分类与特点样品的前处理方法药品分析方法的验证,第一节 定量分析方法的分类与特点 定量分析方法的计算 药典对药物的含量限度的表示方法 原料药：多以%表示，有二种情况 按原料药本身形式计算其含量 例 ：阿司匹林（P.11）按干燥品计不得少于99.5% 对氨基水杨酸钠按干燥品计不得少于99.0% 凡未规定上限的，药典凡例中规定，其含量上限不得超过101.0%。,由于药物组成不定，需以另一种稳定形式计算含量 例 ：氢氧化铝 Al(OH)3以含三氧化二铝（Al2O3）计，不得少于48 .0% 制剂：制剂的含量限度表示方法有三种情况 按标示量计算 标示量即规

2、格量，生产厂家的处方量。它是以标示量为100%，将测得含量与之相比较，求出相对于标示量的百分含量。 例：维生素B1注射液含维生素B1应为标示量的95.0%105.0% 干酵母片含蛋白质不得少于标示量的40.0%,直接用%含量规定范围（主药含量微） 例：复方碘溶液含 I 应为4 .5% 5 .5% 含 KI 应为9 .5% 10 .5% 复方氯化钠注射液含总Cl-量 0.52%0.58% 含KCl量 0.028%0.032%含CaCl22H2O 0.031%0.035%,以重量规定含量范围（多为复方制剂） 例：复方炔诺酮片炔诺酮 0.540.66mg /片 炔雌醇 31.538.5g /片 复方

3、磺胺甲噁唑片SMZ 0.3600.440 g /片TMP 72.088.0mg /片,2018/8/31,6,一、容量分析法滴定法 aA+bB cC+dD （ A被测药物； B滴定液）（一）、滴定度的概念 T-与1ml规定浓度的标准溶液所相当的被测物的mg数。（二）、滴定度的计算 T=MA mB a/b （mg/ml ）,（三）含量计算1、直接滴定法原料药以%表示的制剂 样品% = VFT/W100% F = N实 / N理2、间接滴定法 （1）、剩余滴定法中须做空白 样品% =（V空白 V测 )样 FT/W100%（2）、生成物滴定法 aA+bB=cC（生成物）+dD ，cC+eE=fF+g

4、G 找到A与E的关系，计算滴定度（p.146）（自学）,相当于标示量%的计算公式 片剂： VFT/W平均片重/标示量100% 针剂：VFT/W/标示量（g/ml） 100%以重量/片计的计算公式 VFT/W平均片重=重量/片,司可巴比妥钠胶囊含量测定：精密称取内容物0.1385g，置碘量瓶中，加水10mL，振摇使溶解，精密加溴滴定液（0.05mol/L）25 mL，再加盐酸5 mL，立即密塞并振摇1分钟，暗处静置15分钟后，加碘化钾试液10 mL，立即密塞，摇匀，用硫代硫酸钠滴定液（0.1mol/L，F=0.992）滴定，至近终点时加淀粉指示液，继续滴定至蓝色消失，并将滴定结果用空白试验校正。

5、已知：样品消耗硫代硫酸钠滴定液（0.1mol/L）17.05 mL，空白试验消耗25.22mL，每1mL溴滴定液（0.05mol/L）相当于13.01mg的司可巴比妥钠。计算本品相当于标示量的百分含量（规格0.1g，20粒胶囊内容物重2.7506 g）？ (p.90生成物滴定法),2018/8/31,10,司可巴比妥钠的滴定度计算,1摩尔司可巴比妥钠与1摩尔溴相当T=MAmBa/b260.20.051/113.01mg/ml,(25.22 17.05) 13.010.992 2.7506,0.1385 0.1 1000 20,100%,精密量取维生素C注射液4mL（相当于维生素C 0.2g），

6、加水15mL与丙酮2mL，摇匀，放置5分钟，加稀醋酸4mL与淀粉指示液1mL，用碘滴定液(0.05mol/L)滴定至溶液显蓝色，并持续30秒钟不退。已知：注射液规格2mL:0.1g，消耗0.05mol/L碘滴定液（F=1.005）22.45mL，维生素C的分子量为176.12，问： （1）丙酮和稀醋酸分别起什么作用？ （2）每1mL碘滴定液(0.05mol/L)相当于多少mg的维生素C？ （3）求本品相当于标示量的百分含量？,2018/8/31,13,维生素C,1摩尔维生素C与1摩尔碘相当 T0.05176.121/1=8.806mg/ml 标示量%=TFV/W标示量100%8.80622.4

7、51.005 = 410000.05 100% =99.34%,二、光谱分析 （一）、UV法 1、标准对照法（一点法） A样/A标 = C样/C标， 样品%= A样/A标 C标F/W100% F=稀释倍数W=取样量 2、百分吸收系数法（A= E1%cmCL）C% = A / E1%cm 样品% = A / E1%cm F/W F = 稀释倍数和浓度换算因子 W = 取样量,3、标准曲线法（y=bxa） 由标准曲线或回归方程求出C样，再根据F，W求出样品%。4、计算分光光度法 双波长法，差示法均可应用比尔定律的公式，以A代替吸收度A。,差示分光光度法 原理：利用被测物在两种不同溶液中吸收光谱发生

8、了特征性变化，而共存干扰物在该两种溶液中未引起光谱变化，测定两种溶液的吸收度差值（A值），根据A与被测物浓度C的线性关系进行定量测定。 方法：一定量+酸 一定体积 （测定） A测同样量+碱 同样体积 （参比） A参A测A参=A样 干扰物在两种溶液中吸收光谱无变化，即 A杂=0， A样只与样品浓度C呈线性关系。,供试品,220 240 260 280nm,A,pH10溶液， 240nm pH13溶液，255nm 酸性溶液，无max,A样=A pH13- A pH10,A标=A pH13- A pH10,C样=A样/A标C标,特点：具备一般分光光度法简易、快速、直接读数的优点;无需事先分离，又能消

9、除干扰;提供一个近似理想的参比溶液。,A,称取己酸孕酮0.0105g,加无水乙醇溶解后,置10ml容量瓶中,稀释至刻度,摇匀。吸取1.00ml,置100ml容量瓶中,加无水乙醇稀释至刻度,置1cm吸收池内进行测定, 根据下列数据,求出按干燥品计算的己酸孕酮百分含量。A=0.390, E1%1cm=393,0.390 10,393 0.0105, 100% = 含量%,复方磺胺甲噁唑片中磺胺甲噁唑（SMZ）的含量测定：精密称取本品（每片含SMZ为0.4g）10片，总重量为5.5028g。精密称取SMZ对照品0.0501g、片粉0.0756g，按双波长分光光度法测定SMZ含量。在257nm波长处测

10、得：对照品溶液的吸收度A对为0.330，供试溶液的吸收度A样为0.372。在304nm波长处测得：对照品溶液的吸收度A对为0.009，供试溶液的吸收度A样为0.021。计算SMZ的含量相当于标示量的百分含量。,257nm,304nm,对照品,供试品,0.330,0.372,0.009,0.021,0.372- 0.021 0.0501 5.50280.330- 0.009 0.0756 10 0.4,100%,=99.69%,对乙酰氨基酚片剂溶出度测定： 取标示量为0.3g的本品6片，依法在1000mL溶剂中测定溶出度。经30分钟时，取溶液5mL滤过，精密吸取续滤液1mL，加0.04%氢氧化钠

11、溶液稀释至50mL，摇匀，在257nm波长处测得每片的吸收度分别为0.345，0.348，0.351，0.359，0.356和0.333，按其百分吸收系数为715计算出各片的溶出量。限度为标示量的80%。并判断其溶出度是否符合规定。,0.345 50 1000,715 0.3,= 80.4%,片1：,片2 ,三、色谱分析（HPLC和GC） 内标法： F = A 内/ A 标C标/C内 样品% = A样/A内FC内稀释倍数/W100% 或C样= R样/内/ R标/内 C标 （R代表峰面积比值） 外标法（同光谱法）: 标准曲线法 标准对照法(一点法),系统适用性试验 柱效（理论板数） n=5.54

12、(tR/Wh/2)2分离度 R=拖尾因子 T=重复性 取对照品或样品溶液，连续进样5次，测得峰面积相对标准差RSD应小于2.0%,2(tR2-tR1),W1+W2,W0.05h,2d1,(R 1.5),(T=0.951.05),T=W0.05h/2d1,d1,h,W0.05h,0.05h,HPLC测定复方SMZ片中SMZ含量，以SG为内标，测得 标准液中：SMZ峰高14.90cm，浓度8.0mg/mL，SG峰高13.80cm，浓度4.0mg/mL。 样品液中：SMZ峰高11.92cm，SG峰高16.20cm，浓度4.0mg/mL。 求样品液中SMZ的浓度为多少？（进样量均为5l）,13.8 8

13、.0,14.9 4.0,F=,样品（mg/mL） =,11.92 4.0,16.2,=1.852, F =5.45,用HPLC法测得某药保留时间为12.54min，半高峰宽3.0mm（纸速5mm/min），计算柱效？ N=5.54（12.54/3.0）2 ？ N=5.5412.54/（3.0/5）2 ？,N=2420,丙酸睾酮含量测定采用高效液相法：取本品对照品适量，精密称定，加甲醇定量稀释成每1mL中约含1mg的溶液。精密量取该溶液和内标溶液（1.6mg/mL苯丙酸诺龙甲醇溶液）各5mL，置25mL量瓶中，加甲醇稀释至刻度，摇匀，取10L注入液相色谱仪，记录色谱图。另取本品适量，同法测定，内

14、标法计算含量。已知对照品溶液为1.052mg/mL，样品溶液为1.032mg/mL，测得对照液中丙酸睾酮和内标准的峰面积分别为54678和61258，样品液中丙酸睾酮和内标准的峰面积分别为52213和61228，计算丙酸睾酮的含量？ 52213 / 61228 54678 / 61258,1.052/1.032=？,97.4%,第二节 样品分析的前处理方法 一、概述 含金属药物有：富马酸亚铁、葡萄糖酸锑钠、枸橼酸铋钾、葡萄糖酸锌、酒石酸锑钾等。 含卤素药物有：泛影酸、三氯叔丁醇、碘番酸、磺溴酞钠等。 根据所含金属或卤素在分子中结合的牢固程度，分析前采用不同方法进行预处理。,不经有机破坏处理的分

15、析方法 直接测定法 金属原子不与碳直接相连的或C-M键结合不牢固的有机金属药物，在水溶液中电离，可选用适当方法直接测定。例： 富马酸亚铁在热的稀矿酸中溶解，释放出亚铁离子，用硫酸铈滴定液直接滴定。,葡萄糖酸锑钠为组成不定的五价锑化合物，采用间接碘量法测定锑的含量，在酸性条件下，葡萄糖酸锑钠与碘化钾试液作用，Sb5+可氧化KI，析出I2，用Na2S2O3滴定液滴定。枸橼酸铋钾、葡萄糖酸锌EDTA滴定法测定含量。,经水解后测定法 本法适合于卤素与脂肪碳链相连者，经加热回流使其水解，有机结合的卤素转变成无机的卤素离子，然后用适当方法进行测定。例： 三氯叔丁醇的含量测定 CCl3C(CH3)2OH + 4NaOH 3NaCl 然后用银量法测定氯化钠含量。,回流,注意 沉淀转化 （加有机溶剂） Fe3+的水解 （酸性中滴定）,硬脂酸镁与定量硫酸标准溶液共沸，水解生成硬脂酸和硫酸镁，剩余的硫酸标准溶液用氢氧化钠标准溶液回滴。 经氧化还原后测定法 碱性还原后测定当卤素结合于芳环上时，因结合较牢固，需在碱性条件下加还原剂回流，使X-C键断裂，形成无机卤化物后测定。例泛影酸的含量测定,