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1、第四章 药物的含量测定方法与验证,定量分析方法的分类与特点样品的前处理方法药品分析方法的验证,第一节 定量分析方法的分类与特点 定量分析方法的计算 药典对药物的含量限度的表示方法 原料药:多以%表示,有二种情况 按原料药本身形式计算其含量 例 :阿司匹林(P.11)按干燥品计不得少于99.5% 对氨基水杨酸钠按干燥品计不得少于99.0% 凡未规定上限的,药典凡例中规定,其含量上限不得超过101.0%。,由于药物组成不定,需以另一种稳定形式计算含量 例 :氢氧化铝 Al(OH)3以含三氧化二铝(Al2O3)计,不得少于48 .0% 制剂:制剂的含量限度表示方法有三种情况 按标示量计算 标示量即规
2、格量,生产厂家的处方量。它是以标示量为100%,将测得含量与之相比较,求出相对于标示量的百分含量。 例:维生素B1注射液含维生素B1应为标示量的95.0%105.0% 干酵母片含蛋白质不得少于标示量的40.0%,直接用%含量规定范围(主药含量微) 例:复方碘溶液含 I 应为4 .5% 5 .5% 含 KI 应为9 .5% 10 .5% 复方氯化钠注射液含总Cl-量 0.52%0.58% 含KCl量 0.028%0.032%含CaCl22H2O 0.031%0.035%,以重量规定含量范围(多为复方制剂) 例:复方炔诺酮片炔诺酮 0.540.66mg /片 炔雌醇 31.538.5g /片 复方
3、磺胺甲噁唑片SMZ 0.3600.440 g /片TMP 72.088.0mg /片,2018/8/31,6,一、容量分析法滴定法 aA+bB cC+dD ( A被测药物; B滴定液)(一)、滴定度的概念 T-与1ml规定浓度的标准溶液所相当的被测物的mg数。(二)、滴定度的计算 T=MA mB a/b (mg/ml ),(三)含量计算1、直接滴定法原料药以%表示的制剂 样品% = VFT/W100% F = N实 / N理2、间接滴定法 (1)、剩余滴定法中须做空白 样品% =(V空白 V测 )样 FT/W100%(2)、生成物滴定法 aA+bB=cC(生成物)+dD ,cC+eE=fF+g
4、G 找到A与E的关系,计算滴定度(p.146)(自学),相当于标示量%的计算公式 片剂: VFT/W平均片重/标示量100% 针剂:VFT/W/标示量(g/ml) 100%以重量/片计的计算公式 VFT/W平均片重=重量/片,司可巴比妥钠胶囊含量测定:精密称取内容物0.1385g,置碘量瓶中,加水10mL,振摇使溶解,精密加溴滴定液(0.05mol/L)25 mL,再加盐酸5 mL,立即密塞并振摇1分钟,暗处静置15分钟后,加碘化钾试液10 mL,立即密塞,摇匀,用硫代硫酸钠滴定液(0.1mol/L,F=0.992)滴定,至近终点时加淀粉指示液,继续滴定至蓝色消失,并将滴定结果用空白试验校正。
5、已知:样品消耗硫代硫酸钠滴定液(0.1mol/L)17.05 mL,空白试验消耗25.22mL,每1mL溴滴定液(0.05mol/L)相当于13.01mg的司可巴比妥钠。计算本品相当于标示量的百分含量(规格0.1g,20粒胶囊内容物重2.7506 g)? (p.90生成物滴定法),2018/8/31,10,司可巴比妥钠的滴定度计算,1摩尔司可巴比妥钠与1摩尔溴相当T=MAmBa/b260.20.051/113.01mg/ml,(25.22 17.05) 13.010.992 2.7506,0.1385 0.1 1000 20,100%,精密量取维生素C注射液4mL(相当于维生素C 0.2g),
6、加水15mL与丙酮2mL,摇匀,放置5分钟,加稀醋酸4mL与淀粉指示液1mL,用碘滴定液(0.05mol/L)滴定至溶液显蓝色,并持续30秒钟不退。已知:注射液规格2mL:0.1g,消耗0.05mol/L碘滴定液(F=1.005)22.45mL,维生素C的分子量为176.12,问: (1)丙酮和稀醋酸分别起什么作用? (2)每1mL碘滴定液(0.05mol/L)相当于多少mg的维生素C? (3)求本品相当于标示量的百分含量?,2018/8/31,13,维生素C,1摩尔维生素C与1摩尔碘相当 T0.05176.121/1=8.806mg/ml 标示量%=TFV/W标示量100%8.80622.4
7、51.005 = 410000.05 100% =99.34%,二、光谱分析 (一)、UV法 1、标准对照法(一点法) A样/A标 = C样/C标, 样品%= A样/A标 C标F/W100% F=稀释倍数W=取样量 2、百分吸收系数法(A= E1%cmCL)C% = A / E1%cm 样品% = A / E1%cm F/W F = 稀释倍数和浓度换算因子 W = 取样量,3、标准曲线法(y=bxa) 由标准曲线或回归方程求出C样,再根据F,W求出样品%。4、计算分光光度法 双波长法,差示法均可应用比尔定律的公式,以A代替吸收度A。,差示分光光度法 原理:利用被测物在两种不同溶液中吸收光谱发生
8、了特征性变化,而共存干扰物在该两种溶液中未引起光谱变化,测定两种溶液的吸收度差值(A值),根据A与被测物浓度C的线性关系进行定量测定。 方法:一定量+酸 一定体积 (测定) A测同样量+碱 同样体积 (参比) A参A测A参=A样 干扰物在两种溶液中吸收光谱无变化,即 A杂=0, A样只与样品浓度C呈线性关系。,供试品,220 240 260 280nm,A,pH10溶液, 240nm pH13溶液,255nm 酸性溶液,无max,A样=A pH13- A pH10,A标=A pH13- A pH10,C样=A样/A标C标,特点:具备一般分光光度法简易、快速、直接读数的优点;无需事先分离,又能消
9、除干扰;提供一个近似理想的参比溶液。,A,称取己酸孕酮0.0105g,加无水乙醇溶解后,置10ml容量瓶中,稀释至刻度,摇匀。吸取1.00ml,置100ml容量瓶中,加无水乙醇稀释至刻度,置1cm吸收池内进行测定, 根据下列数据,求出按干燥品计算的己酸孕酮百分含量。A=0.390, E1%1cm=393,0.390 10,393 0.0105, 100% = 含量%,复方磺胺甲噁唑片中磺胺甲噁唑(SMZ)的含量测定:精密称取本品(每片含SMZ为0.4g)10片,总重量为5.5028g。精密称取SMZ对照品0.0501g、片粉0.0756g,按双波长分光光度法测定SMZ含量。在257nm波长处测
10、得:对照品溶液的吸收度A对为0.330,供试溶液的吸收度A样为0.372。在304nm波长处测得:对照品溶液的吸收度A对为0.009,供试溶液的吸收度A样为0.021。计算SMZ的含量相当于标示量的百分含量。,257nm,304nm,对照品,供试品,0.330,0.372,0.009,0.021,0.372- 0.021 0.0501 5.50280.330- 0.009 0.0756 10 0.4,100%,=99.69%,对乙酰氨基酚片剂溶出度测定: 取标示量为0.3g的本品6片,依法在1000mL溶剂中测定溶出度。经30分钟时,取溶液5mL滤过,精密吸取续滤液1mL,加0.04%氢氧化钠
11、溶液稀释至50mL,摇匀,在257nm波长处测得每片的吸收度分别为0.345,0.348,0.351,0.359,0.356和0.333,按其百分吸收系数为715计算出各片的溶出量。限度为标示量的80%。并判断其溶出度是否符合规定。,0.345 50 1000,715 0.3,= 80.4%,片1:,片2 ,三、色谱分析(HPLC和GC) 内标法: F = A 内/ A 标C标/C内 样品% = A样/A内FC内稀释倍数/W100% 或C样= R样/内/ R标/内 C标 (R代表峰面积比值) 外标法(同光谱法): 标准曲线法 标准对照法(一点法),系统适用性试验 柱效(理论板数) n=5.54
12、(tR/Wh/2)2分离度 R=拖尾因子 T=重复性 取对照品或样品溶液,连续进样5次,测得峰面积相对标准差RSD应小于2.0%,2(tR2-tR1),W1+W2,W0.05h,2d1,(R 1.5),(T=0.951.05),T=W0.05h/2d1,d1,h,W0.05h,0.05h,HPLC测定复方SMZ片中SMZ含量,以SG为内标,测得 标准液中:SMZ峰高14.90cm,浓度8.0mg/mL,SG峰高13.80cm,浓度4.0mg/mL。 样品液中:SMZ峰高11.92cm,SG峰高16.20cm,浓度4.0mg/mL。 求样品液中SMZ的浓度为多少?(进样量均为5l),13.8 8
13、.0,14.9 4.0,F=,样品(mg/mL) =,11.92 4.0,16.2,=1.852, F =5.45,用HPLC法测得某药保留时间为12.54min,半高峰宽3.0mm(纸速5mm/min),计算柱效? N=5.54(12.54/3.0)2 ? N=5.5412.54/(3.0/5)2 ?,N=2420,丙酸睾酮含量测定采用高效液相法:取本品对照品适量,精密称定,加甲醇定量稀释成每1mL中约含1mg的溶液。精密量取该溶液和内标溶液(1.6mg/mL苯丙酸诺龙甲醇溶液)各5mL,置25mL量瓶中,加甲醇稀释至刻度,摇匀,取10L注入液相色谱仪,记录色谱图。另取本品适量,同法测定,内
14、标法计算含量。已知对照品溶液为1.052mg/mL,样品溶液为1.032mg/mL,测得对照液中丙酸睾酮和内标准的峰面积分别为54678和61258,样品液中丙酸睾酮和内标准的峰面积分别为52213和61228,计算丙酸睾酮的含量? 52213 / 61228 54678 / 61258,1.052/1.032=?,97.4%,第二节 样品分析的前处理方法 一、概述 含金属药物有:富马酸亚铁、葡萄糖酸锑钠、枸橼酸铋钾、葡萄糖酸锌、酒石酸锑钾等。 含卤素药物有:泛影酸、三氯叔丁醇、碘番酸、磺溴酞钠等。 根据所含金属或卤素在分子中结合的牢固程度,分析前采用不同方法进行预处理。,不经有机破坏处理的分
15、析方法 直接测定法 金属原子不与碳直接相连的或C-M键结合不牢固的有机金属药物,在水溶液中电离,可选用适当方法直接测定。例: 富马酸亚铁在热的稀矿酸中溶解,释放出亚铁离子,用硫酸铈滴定液直接滴定。,葡萄糖酸锑钠为组成不定的五价锑化合物,采用间接碘量法测定锑的含量,在酸性条件下,葡萄糖酸锑钠与碘化钾试液作用,Sb5+可氧化KI,析出I2,用Na2S2O3滴定液滴定。枸橼酸铋钾、葡萄糖酸锌EDTA滴定法测定含量。,经水解后测定法 本法适合于卤素与脂肪碳链相连者,经加热回流使其水解,有机结合的卤素转变成无机的卤素离子,然后用适当方法进行测定。例: 三氯叔丁醇的含量测定 CCl3C(CH3)2OH + 4NaOH 3NaCl 然后用银量法测定氯化钠含量。,回流,注意 沉淀转化 (加有机溶剂) Fe3+的水解 (酸性中滴定),硬脂酸镁与定量硫酸标准溶液共沸,水解生成硬脂酸和硫酸镁,剩余的硫酸标准溶液用氢氧化钠标准溶液回滴。 经氧化还原后测定法 碱性还原后测定当卤素结合于芳环上时,因结合较牢固,需在碱性条件下加还原剂回流,使X-C键断裂,形成无机卤化物后测定。例泛影酸的含量测定,